Питательная среда для культивирования aspergillus foetidus — продуцента ферментов

 

. *сч4 Е,,;,;

ОПИСАЙЙЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ (i i) 436О79

Союз СоветскиХ

Социапистичесюп

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 10.04.72 (21) 1770061/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 15.07.74. Бюллетень № 26

Дата опубликования описания 18.12.74 (51) М. Кл. С 12Ь 3/00

С 12d 13/10

Государственный комитет

Совета 1иинистрав СССР па делам изобретений и открытий (53) УДК 577.15.07 (088.8) (72) Авторы изобретения Л. С. Лосякова, К. А. Калунянц, T. М. Малышева и Л. Н. Мушникова (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

ASPERGILLUS FOETIDUS — ПРОДУЦЕНТА ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известна питательная среда для культивирования Aspergillus foetidus — продуцента ферментов, содержащая пшеничные отруби, свекловичный жом и минеральные соли.

С целью интенсификации биосинтеза протеолитических ферментов, в частности кислой протеиназы, в предлагаемой среде пшеничные отруби и свекловичный жом содержатся в количествах соответственно равных, 87 — 74 и 10 — 20, из минеральных солей используют нитрат натрия в количестве 3 — 6%.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Выращивание плесневого гриба Aspergillus

foetidus проводят на питательной среде, содержащей пшеничные отруби 87 — 74%, свекловичный жом 10 — 20% и нитратные соли щелочных металлов 3 — 6%, в течение 48 час при 32 — 36 С. Выросшая культура гриба представляет собой остатки питательной среды, проросшей мицелием.

Готовую культуру гриба измельчают и за5 ливают водой в соотношении 1: 2,5 — 1: 3,5 к весу абс. сухой культуры. Экстракцию ведут в течение 40 — 60 мин, после чего массу отжимают до влажности 60 — 62%, фильтрат собирают и используют для дальнейшего вы10 деления ферментного препарата кислой протеин азы.

Выделение препарата проводят осаждением этиловым спиртом при концентрации в смеси 70 — 72%.

15 Полученный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин.

Ниже приведена таблица активности пектолитических и протеолитических ферментов, полученных с применением предложенной пи20 тательной среды и известных, 436079

Активность кислой протеиназы

Пектолитическая активность

Состав среды,,, ед/г ед/г от контроля от контроля

10 — 20 свекловичного жома

86 — 76 пшеничных отрубей

4 ИаИО, 10 — 20 свекловичного жома

86 — 76 пшеничных отрубей

4 КИОЗ

9 — 21 свекловичного жома

91 — 79 пшеничных отрубей

9 — 21 свекловичного жома

91 — 79 пшеничных отрубей

6 ИаХО, 300

90000

37,2

3,08

288

86240

35,6

2,96

54200

180

75,0

6,04

70000

230,3

33,8

2,72

При изменении состава питательной среды (среда Мя 3) подавляется биосинтез пектолитических ферментов и усиливается биосинтез кислой протеиназы, активность которой увеличивается на 80О/о. При оптимизации питательной среды (среды 1, 2), т. е. добавлении нитратных солей щелочных металлов в количестве 3 — 5%, резко увеличивается активность кислой протеинозы (96240 — 100000 ед/г, т. е. на 288 — 300%) и резко снижается активность пектолитических ферментов. При увеличении концентрации нитратных солей щелочных металлов до 6 /о, активность кислой протениозы снижается до 70000 ед/г.

Пример (контроль) . 25 г свекловичного жома, 74 г пшеничных отрубей и 1 г сернокислого аммония смешивают, увлажняют

120 мл воды до влажности 60%. Увлажненную питательную среду помещают в колбу на

1 л и стерилизуют в течение 60 мин, при

1 атм. Простерилизованную питательную среду охлаждают до 37 С и засевают 10 мл водной суспензии конидий гриба. Засеянную питательную среду перемешивают и раскладывают в кюветы по 200 г (толщина слоя 3 см).

Выращивание проводят в течение 38 — 40 час при 28 — 32 С.

Готовую культуру гриба измельчают и заливают водой в количестве 320 мл, экстрагируют в течение 60 мин. По окончании экстракции массу отжимают до влажности

62%, фильтр ат собирают. Выделение ферментного препарата проводят этиловым спиртом при концентрации в смеси 73,5%. Полученный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин.

Активность кислой протеиназы в культуре составляет 30000 ед/г, а ферментном препар ате — 290000 ед/г.

Пример 2. 15 г свекловичного жома, 81 r пшеничных отрубей и 4 г NaNOq смешивают, увлажняют 120 мл воды до влажности 60 /о. Увлажненную питательную среду помещают в колбу на 1 л и стерилизуют в течение 60 мин при 1 атм. Затем среду охлаждают до 37 С и засевают 10 мл водной суспензией конидий гриба.

Засеянную питательную среду перемеши10 вают и раскладывают в кюветы по 200 r (толщина слоя 3 см). Выращивание проводят в течение 48 час при 32 — 36 С. Готовую культуру гриба измельчают и заливают водой в количестве 210 мл. Экстракцию про15 должают в течение 60 мин, после чего отжимают до влажности 62%, фильтрат собирают и используют для выделения препарата.

Выделение ферментного препарата проводят этиловым спиртом при концентрации в

20 смеси 71 /о. Полученный осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин.

Активность кислой протеиназы в культуре составляет 90000 ед/г, ферментном препарате — 93 8000 ед/г.

Предмет изобретения

Питательная среда для культивирования

30 Aspergillus foetidus — продуцента ферментов содержащая пшеничные отруби, свекловичный жом и минеральные соли, о т л и ч а ющ а я с я тем, что, с целью интенсификации оиосинтеза протеолитических ферментов—

35 кислой протеиназы, пшеничные отруби и свекловичный жом содержатся в количествах соответственно равных, вес. : 74 — 87 и

10 — 20, из минеральных солей используют нитрат натрия в количестве 3 — 6.