Штамм васiвlus suвтilis

 

Союз Советских

Социалистических

Ресщблмк

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ8У

594769 (6l ) Дополнительное к авт. с вид-ву (22)Заявлено 29.06,76 (2l) 2378374/28-13 (51)М. Кл.

С 12 О 13/06 с присоединением заявки №

Гоеударствснный кои нтет (23) Приоритет до делам нэобретеннй н открытий

Опубликовано 30,12.82. Бюллетень № 48

Дата опубликования описания 30.12.82 (53) УЙК 576,851, .59(088.8) (72) Авторы изобретения

Д,И,Ерохина и Л.А,Казаринова

Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (7l) Заявитель (54) ШТАММ ВАСILLUS SUBTiLI5 ЦМПМ

В-1321 - ПРОДУЦЕНТ ИНОЗИНА

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения нового штамма, продуцирующего иозин, используемый в фармакологии и в качестве исходного соединения при получении иноэиновой кислоты и других пуриновых производных, Известен штамм Bacillus subtilis

ЦМПМ В- 1321- - продуцент иноэина (1), Однако он не обладает высокой продуктивностью.

Цель изобретения - получение штамма с высокой продуктивностью инозина.

Это достигается путем выделения мутанта исходного штамма Bacillus

subtilis ЦМПМ В-1321 в результате применения генетико-селекционных методов.

Штамм Bac i l lus sub t i l is ЦМПМ

В-1321 - продуцент инозийа хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером ЦМПМ В-1321 и характеризуется следующими признаками, Культурально-морфологические признаки. Спорообразующая палочка размером 3-5õ0,6-0,8 IU . Размер спор

1,0-1,ZX0,6-0,7 p .

Мясо-пептонный агар. При инкубации в течение 48 ч при 37 С образу" ет желтовато-серые круглые колонии, в центре выпуклые, диаметром 2,53,0 мм, с лопастными краями, срастаются с субстратом, Поверхность шероховатая, морщинистая, матовая.

Мясо-пептонный бульон. При инкубации в течение 24 ч при 37ОС без встряхивания наблюдают помутнение среды, на поверхности образуется морщинистая, сухая пленка, при встря2о хивании на качалке - сильное помутнение среды. При стоянии образуется осадок.

Агаризованная среда Хоттингера, При инкубации в течение 48 ч при

3 59476

37 С образует желтовато-серые круго лые колонии, в центре выпуклые с белым оттенком, диаметром 2-2,5 мм с лопастными краями, срастаются с субстратом. Поверхность морщинистая, шероховатая, матовая, Синтетическая среда с минеральным азотом. Рост отсутствует.

Ломтики картофеля, Пигмента не образует, Имеет матовую, сухую мор- 10 щинистую поверхность. физиолого-биохимические признаки, Грамположительный, аэробный, рост поверхностный, Желатину разжижает. 15

Крахмал гидроли зует.

Молоко пептонизирует и подщелачивает.

Отношение к источникам углерода.

Усваивает глюкозу, галактозу, лакто- щ зу, фруктозу, мальтозу, маннозу, рамноэу, сахарозу, глицерин, При росте на синтетической среде нуждается в аденине, тирозине, гистидине. 25

Оптимальный выход иноэина 1012 г/л за 65- 12 ч ферментации.

Пример 1. Культуру со скошенного агара Хоттингера (или ИПА) переносят на жидкую посевную средуследующего состава, 3:

Глюкоза техническая 2,0

Дрожжевой экстракт 1,0

NaC1 0,25

Пеп тон 1,0

Посевной материал выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих

150 мл среды, на качалке с 220250 об/мин в течение 18-24 ч при 2830 С, Инокулят передают в ферментао 40 ционную среду в количестве 4-6 об.l.

Состав ферментационной среды, 4:

Глюкоза техническая 10,0

БВК 2,0

2,0

СаСО> 2,0

Вода водопроводная, рН 7,2 доводят до стерилизации 5 N КОН. Глюкозу в виде 40/-ного раствора стерилиэуют совместно с мелом при 0,5 атм 30 мин.

Процесс ферментации проводят ме50 тодом глубинного культивирования в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл, содержащих 30 мл среды, на качалке с

220-250 об/мин или в металлических ферментерах емкостью 30 л при расходе воздуха 1 об. на 1 об. среды в

1мин и скорости мешалки 400-500 об/мин, Оптимальная аэрация для указанной

9 4 среды в колбах обеспечивается при скорости растворения кислорода 2,03,0 г 0 л/ч.

Оптимальная температура процесса биосинтеза инозина 30-31 С. При оптимальных условиях ферментации в колбах максимальное накопление инозина наблюдается на 96-120 часу. Уровень образования инозина составляет 1011 г/л,.При культивировании штамма

ЦИПА В-1321 в условиях ферментера выход инозина составляет 11,0 г/л на 65 часу.

Пример 2. Штамм продуцент, условия ферментации те же, что и в примере 1. Отличие состоит в составе ферментационной среды.

Состав ферментационной среды, 3:

Глюкоза техническая 10,0

БВК 2,0

Mg C12 0 5 Н4 О 2,0

Сас09 2,0

Вода водопроводная, рН 7,2 доводят до стерилизации 5 и КОН.

Содержание инозина на 120 ч ферментации в колбах составляет 1112 г/я.

Пример 3. Штамм продуцент, условия ферментации те же, что и в примере i . .Отличие состоит в составе ферментационной среды.

Состав ферментационной среды, 3:

Гидрол 15,0

БВК 1,3

Кукурузный экстракт 1,5

NHÄNO> 2,5

СОСО> 2,0

Вода водопроводная, рН 7,2 доводят до стерилизации 5 N KOH.

Содержание инозина на 96-120 ч ферментации в колбах составляет 1012,0 г/л соответственно, fl р и м е р 4, Штамм - продуцент, условия ферментации те же, что в примере t Отличие состоит в составе ферментационной среды.

Состав ферментационной среды, Сахар 10,0

БВК 2,0

4 3

2,0

Са СО 2,0

Вода водопроводная, рН 7,2 доводят до стерилизации 5 N КОН.

Содержание инозина на 120 ч ферментации в колбах составляет 10,0 г/л, Штамм Вас. subtil is ЦИПИ В-1321 является новым более активным штам59 мом, синтезирующим в процессе глубинной ферментации инозин в количестве 10-12 г/л за 65-120 ч на средах с доступным не пищевым сырьем, формула изобретения

Штамм Вас111us subt.ilis ЦМПМ

В-1321 — продуцент иноэина. Xранится в коллекции Всесоюзного научноисследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером ЦМПМ В-1321.

Культурально-морфологические признаки, Спорообразующая палочка размером 3-5»0,6-0,8 (11. Размер спор

1,0-1,2 0,6-0,7 p .

Мясо-пептонный агар. При инкубации в течение 48 ч при 37 С образует желтовато-серые круглые колонии в центре выпуклые, диаметром 2,53,0 мм, с лопастными краями, срастаются с субстратом. Поверхность шероховатая, морщинистая, матовая, Мясо-пептонный бульон, При инкубации в течение 24 ч при 37 С без встряхивания наблюдают помутнение среды, на поверхности образуется морщинистая, сухая пленка, при встряхивании на качалке - сильное помутнение среды, При стоянии образуется осадок.

4769

Дгаризованная среда Хоттингера.

При инкубации в течение 48 ч при

37 С образует желтовато-серые круго лые колонии, в центре выпуклые с беп м оттенком, диаметром 2-2,5 мм с лопастными краями, срастаются с субстратом. Поверхность морщинистая, шероховатая, матовая, Синтетическая среда с минеральt0 ным азотом, Рост отсутствует.

Ломтики картофеля, Пигмента не об.разует, Имеет матовую, сухую морщинистую поверхность. физиолого-биохими чески е приз наки.

15 Грамположи тель ный, аэробный, рост поверхностный.

Желатину разжижает, Крахмал гидролизует, Молоко пептонизирует и подщела20 чивает.

Отношение к источникам углерода.

Усваивает: глюкозу, галактозу, лактозу, фруктоэу, мальтозу, маннозу, рамнозу, сахарозу, глицерин, 25 При росте на синтетической среде нуждается в аденине тирозине гистидине.

Оптимальный выход инозина 10-12 г/л за 65-120 ч ферментации °

30 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

Авторское свидетельство СССР

ti 382676, кл. С 12 0 13/06, 1973.

Редактор Л. Письман Техред 3. Палий Корректор О. Билак

Заказ 10 5 /11 Тираж 0 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, .Раушская наб., д. 4/5

Филиал Патент", г. жгород,,уа, Проектная,