Способ разделения гликозаминогликанов

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) б03903 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 14,1276 (21} 2432161/28-13 (51) М. Кл.

G01. К 33/16 с присое)гниением заявки ЭЙ (23) Приоритет (43) Опубликовано 250478,Бюллетень Ph15

Гааидаратввнный иомитвт

Саввтв Миниотров СССР .ао двлвм иэобрвтвний

N атнрытий (53) УД К 6 16-0 0 8 . 8 (088.8) (45) Дата опубликования описания 0304,78 (72) вторы изобретения

Ю.А.Юрков, М.М.Алимова и Т.С.Королева (71) ЗаяВИтЕЛЬ Научно-исследовательский институт педиатрии АМН СССР (5 4 ) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ

Изобретение относится к клинической биохимии и касается методов иссле дования биологических соединений, используемых для диагностических целей в клинике.

При самых различных заболеваниях поражается система соединительной ткани, широко распространенная в организме человека и животных, сложная в морфологическом и метаболическом отношении. Структурные компоненты соединительной ткани, волокна и клетки погружены в так называемое основное вещество соединительной ткани.

Основное вещество соединительной ткани является межклеточной средой, в которой протекает экстрацеллюлярный обмен между кровью и тканями и оно в первую очередь поражается при действии различных патологических агентов у) на организм.

Одна из главных функций основного вещества, обеспечивающая создание благоприятных условий для специфической деятельности паренхиматозных клеток органов и тканей, зависит от гликозаминогликанов (мукополисахариды), входящих в состав основного вещества.

- Гликоэаминогликаны — высокомолекулярные углеводные соединения, среди З) которых в настоящее время наиболее известны гиалуроновая кислота, хондроитин-4-сульфат, хондроитйн-6-сульфат, хондроитин, дерматансульфат, кератансульфат, гепарин, гепаринсульфат. Соотношение между отдельными гликоэаминогликанами в различных тканях изме-. няется в процесса роста, развития и старения организма, а также при различных заболеваниях. Представление о состоянии обмена гликозаминогликанов можно получить изучая содержание и соотношение их компонентов в биологических жидкостях Организма. .

Известен способ разделения гликозаминогликанов путем злектрофореза в агарозном геле.

Однако этот способ трудоемок, требует применения специальной аппаратуры и дорогостоящих реакторов, что затрудняет его применение в клинике.

Целью изобретения является упрощение способа для широкого использования его в практической клинике.

Это достигается тем, что .используют гель, составленный из агарозы и акриламида, взятых в соотношени 2:1, и пиридин-муравьиный буфер (рН 3,0), а фореграьжы фиксируют в водном растворе бромистого цетилтриметиламмония.

603903

Формула изобретения

Составитель Н.Макарова

Техред Н. Бабурка Корректор М. Демчик

Редактор A.Áåð

Заказ 2061/36 Тираж 1112 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, Ул. Проектная„ 4

Способ осуществляют следующим образом, Вначале готовят гель, Для этого

600 мл агароэы заливают 60 мл пиридинмуравьиного буфера (РН 3,0) и выдер кивают в кипящей водяной бане 7-10 мин до получения прозрачного раствора, затем добавляют 300 мг акриламида, тщательно размешивают и охлаждают до

40-45 С Теплым елевым раствором эа- 1 о ливают расположенные в прибсре для

10 электрофореза стеклянные пластины, в которых делают стартовые щели для введения смеси гликозаминогликанов.

КаМеры прибора для электрофореза заливают пиридин-муравьиным буфером. Электрофореэ проводят в течение 2, 5 час при напряжении 17-20 В/см, в силе то,ка 50-70 мА.

После окончания электрофореза фотограммы фиксируют в 0,1%-ном .водном растворе цетавлона в течение 1 час при комнатной температуре. Затем гель на каждой пластине закрывают фильтровальной,бумагой и оставляют сохнуть при

37 С. Высохшие фореграммы имеют вид 25 тонкой пленки и легко красятся 0,04%ным раствором толуидинового синего, приготовленного на 80% ацетона в течение 3-5 мин. Излишки краски отьывают дважды 3%-ной уксусной кислотой и несколько раз дистиллированной водой.

Сушат окрашенные фореграммы при комнатной температуре.

В результате испытания данного способа получено четкое разделение смеси стандартов, состоящей иэ гиалуроновой кислоты, гепарина хондроитинсульфата и дерматансульфата. При электрофорезе гликозаминогликанов мочи дете. получены четкие фракции гиалуроновой кислоты и хондроитинсульфатов — основных гликозаминогликанов мочи. установлены существенные изменения в соотношении этих фракций гликозаминогликанов у детей, больных ревматоидным артритом (по сравнению с таковыми у здоровых детей) .

Предложенный способ разделения гликозаминогликанов пригоден для изучения этих соединений в биологических жидкостях и тканях организма, он более прост в исполнении, менее трудоемок и может быть приМенен в клинике для качественного и количественного анализа гликоэаминогликанов в норме и при патологиях.

1. Способ разделения гликозаминогликанов путем электрофореза в геле, о тл и ч а ю шийсятем, что, с целью упрощения способа, используют гель, составленный из агароэы и акриламида, взятых в соотношении 2:1, в пиридинмуравьином буфере, а фореграммы фиксируют в,водном растворе бромистого цетилтриметиламмония.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю шийся тем, что электрофоретическое разделение ведут в течение 2-2,5 час при напряжении 17-20 В/см, силе тока

50-70 мА.