Способ получения полиинозиновой кислоты

 

О П И С А Н И Е рц644 797

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

61) Дополнительное к авт, свид-ву (22) Заявлено 03.08.76 (21) 2396368/23-04 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.01.79. Бюллетень № 4 (45) Дата опубликования описания 30.01.79 (51) М. Кл.;

С 07Н 21/00

Государственный комитет

СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 547.857.3 (088.8) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИИНОЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения полиинозиновой кислоты, которая находит широкое применение в биологии, генетике и медицине.

Известен способ получения полиинозиновой кислоты поликонденсацией компонента нуклеиновой кислоты — инозин-5 -дифосфата, с ферментом — полирибонуклеотидфосфорилазой (1).

Недостатками известного способа являются низкая степень поликонденсации инозин-5 -дифосфата, коэффициент седиментации $2о, w 10 — 15, относительно низкий молекулярный вес целевого продукта 200000—

280000, большие потери исходного сырья.

Целью изобретения является улучшение качества целевого продукта, т. е. удлинение цепи, повышение молекулярного веса.

Поставленная цель достигается путем использования в качестве исходного сырья полиадениловой кислоты с последующим ее дезаминированием.

Способ получения полиинозиновой кислоты (поли-И) заключается в том, что полиадениловую кислоту (поли-А) подвергают воздействию дезаминирующего агента, предпочтительно нитрита натрия, в ледяной уксусной кислоте в присутствии стабилизатора — ионов Mg+ или Мп+ в буферной системе при рН 250 — 2,55, Образующая полиинозиновая кислота имеет коэффициент седиментации S p w 17 — 18, мол. вес

360000 — 380000.

Пример 1. К 10 мл раствора полиаде5 ниловой кислоты, полученного в процессе биосинтеза полинуклеотидфосфорилазой из

Е.coli и содержащего 60 мг поли-А, 10 — М ацетата магния и 0,1 М трис-НСl, после отделения, ферментативного белка прибавля10 ют 0,12 мл ледяной уксусной кислоты, 0,1М раствора этилендиамин-N,iN,N,N - тетрауксусной кислоты (ЭДТА) до конечной концентрации 10 — (рН 2,5 — 2,55). При непрерывном перемешивании небольшими порци15 ями в течение 3 ч прибавляют 0,12 г сухого нитрата натрия. Перемешивание продолжают до тех пор, когда отношение оптических плотностей Дz50/Д оо достигает 1,6 — 1,7.

Поли-И осаждают 20 об. 96%-ного этило20 вого спирта и проводят очистку известным способом.

Степень дезаминирования 98%, Szo, w 18, выход 56 мг поли-И.

Пример 2. 60 мг поли-А, полученных в

25 процессе биосинтеза полинуклеотидфосфорилазой из Е.coli, растворяют в 10 мл воды, прибавляют 0,1М раствора МпС12 до конечной концентрации 10 — М 0,2 мл ледяной уксусной кислоты и 0,1 М ЭДТА до конечной з0 концентрации 10- М, рН 2,5 — 2,55. В тече3

Формула изобретения

Составитель Л. Никулина

Техред С, Антипенко Корректор P. Беркович

Редактор Л. Новожилова

Заказ 2645/7 Изд. № 143 Тираж 520 Подписное

НПО Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр, Сапунова, 2 ние 3 ч при непрерывном перемешивании и небольшими порциями прибавляют 0,2 г сухого нитрата натрия. Далее процесс дсзаминирования, выделения и очистки поли-И проводят как показано в примере 1. Szo,zv

17. Выход 58 мг поли-И.

Пример 3. К 10 мл раствора поли-А, содержащего 60 мг поли-А, 10- М ацетата магния, 0,1 М трис-НС1, после отделения ферментного белка прибавляют 0,2 мл ледяной уксусной кислоты, ЭДТА до 10 — М (рН 2,5 — 2,55), 2 см нитрозилхлорида в течение 3 ч. Далее выделение и очистку поли-И проводят, как показано в примере 1.

Степень дезаминирования 98%, Язв, иу 18, выход 45 мг поли-И.

Целевой продукт получают с мол. вес.

360000 — 380000 и коэффициентом седиментации Язв, 1г 17 — 18.

1. Способ получения полиинозиновой кислоты из компонентов нуклеиновых кислот, 5 отличающийся тем, что, с целью улучшения качества целевого продукта, полиадениловую кислоту подвергают воздействию дезаминирующего агента в присутствии стабилизатора — ионов Mg+ или Мп+ в буферной системе при рН 2,50 — 2,55.

2. Способ по п. 1, о тл и ч а ю шийся тем, что в качестве дезаминирующего агента используют нитрит натрия в присутствии ледяной уксусной кислоты.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США № 3594278, кл. 195 †, опубл. 1971.