Актиноцил-бис-( @ -диметиламинопропил)-амин, обладающий противоопухолевой активностью

 

Актиноцил-бис-(Г-диметиламиНопропил)-амин формулыИзобретение относится к новому соединению-аналогу природного антибиотика актиномицина D,К настоя1цему времени описано большое число актиноцил-бис-аминокислот и их эфиров. Среди этих соединений к настоящему времени не обнаружено пока соединений с практически ценнными свойствами.Известно, что из группы алкилирующих противоопухолевых соединенийактивностью обладает сарколизин. Но наряду с противоопухолевой активностью по отношению к некоторым перевиваемым опухолям сарколизин обладает высокой токсичностью.Целью изобретения является расширение ассортимента биологически активных соединений,В "соответствии с изобретением описывается актиноцил-бис-(у-диметилами" нопропил)-амин формулы

„,ЯО„, 6772

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (снйфитснгсньин нисн сн сн и(Щ

СО Щ

Н2

Ф

М

Ф

С тивностью;

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHpblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) ?550692/04 (22) 07.12.77 (46) 23.04.92. Бюл. Н 15 (71) Ленинградский технологический институт им. Ленсовета" и Онкологический научный центр AMH СССР (72) 0.Ф. Гинзбург, Е.Н. Глибин, З.И. Коршунова,.M.А. Кривцова, З.П. Софьина, С.С. Цымбалова и Н.П. Яворская (ВС) . (53) 547.233.07 (0 .") (56) Английский патент Н Р076Р7, кл. 2(3) С, 1969.

Машковский М.Д. Лекарственные средства, и. 2, M.. Медицина, 1972, обладающий противоопухолевой акИзобретение относится к новому соединению-аналогу природного антибиотика актиномицина О.

К настоящему времени описано большое число актиноцил-бис-аминокислот и их эфиров. Среди этих соединений к настоящему времени не обнаружено пока соединений с практически ценнными свойствами.

Известно, что из группы алкилирующих противоопухолевых соединений (51)5 С 07 В ?65/38,A 61 K 31/13

2 (54) АКТИНОЦИЛ-БИС-(II-ДИМЕТИЛАМИНО ПРОПИЛ)-АМИН, ОБЛАДАИЩИИ ПРОТИВООПУ", X0flFB0A (57) Актиноцил-бис-(II-äиметиламино пропил) -амин формулы активностью обладает сарколизин.. Но наряду с противоопухолевой активностью по отношению к некоторым перевиваемым опухолям сарколизин обладает высокой токсичностью.

Целью изобретения является расширение ассортимента биологически активных соединений.

8 соответствии с изобретением описывается актиноцил-бис-($-диметилами" нопропил)-амин формулы

3 (CHl1gNCHgCHgCHzNH

Ю

677293

XNCHgCHzCHzN(CHg)g

1 (Н который получают окислением феррицианидом калия в Фосфатно-щелочном буфере (рН 7,2) или РЬО в спиртовом растворе 2-амино-3-окси-4-метилбензоил-(|g -диметиламинопропил) -амина . Пос" ледний получают каталитическим гид" рированием 2-нитро-3-бензилокси-4метилбензоил(g-диметиламинопропил)амина либо.2-нитро-3-окси-4-метилбензоил-((-диметиламинопропил)-амина.

П р и и е р. Хлоргидрат 2-нитро-;

3-бензилокси-4-метилбензоил(-диметиламинопропил)амина.

K раствору 5,6 г хлорангидрида

2-нитро-3-бензилокси-4-метилбензой ной кислоты s 100 мл бензола при температуре 25-30 C и перемешивании

0 добавляют по каплям раствор 1,77 г

25 "äèìåTèëàèèHîïðoïèëàìèíà в ?0 мл .бензола. Выдерживают реакционную мас-.

:су при перемешивании и комнатной температуре 1 ч, а затеи 7 ч при 500

:60 С. При этом образуется обильный .осадок. По окончании выдержки реак-ционную массу упаривают досуха. Су-.

":хой остаток обрабатывают 50 мл бензола, йагретого до 700С, охлаждают, осадок отфильтровь вают, промывают небольшим количеством бензола, сушат. ..Выход 4,2 г (56,3/) . Т.пл . 166-168 С (изопропиловый спирт-бензол, 1:10) .

Хроматографически однороден на плас .тинах силуфол UV-254 в системе 1-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:1) .

Найдено,t: С 58,2; Н 6,5; Cl 8,8.

Вычислено,3: С 58,6; Н 6,4; С1 8,7

2-Нитро-3-бензилокси-4-метилбен- зоил-(f-äèìåòèëàìèíoïðoïèë)-амин, 3,5 г хлоргидрата 2-нитро-3-бензилокси-4-метилЬензоил- Я-диметиламинопропил)-амина растворяют в

20 мл воды, добавляют насыщенный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом (3 раза по 20 мл) .

Этилацетатные вытяжки обьединяют, промывают водой, сушат сульфатом магния и упаривают в вакууме. Получают

2,8 г маслообразного продукта, хроматографически однородного на пластинах силуфол UV-254 в системаx: 1-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:1), хлороформ-метанол-этилацетат (6:1:3) .

Анализируют в виде рейнеката, который получают смешением раствора 2нитро-3-бензилокси-4-метилбензоил(2I-диметиламинопропил)-амина в О,1 н.

2О соляной кислоте и 3i-ного водного раствора рейнеката аммония. Выделившийся рейнекат 2-нитро.-3.-бензилокси4-метилбензоил-((-диметиламинопро. пил)-амина отфильтровывают, flpoMbl вают водой и сушат. в эксикаторе над

CaCl .

Найдено,3; С 41,6; Н 4,6; Cr 9,0, N 17,9.

С„11, 1 О, С,11,Сг 1,О 18,, Вычислено,3: С 41,6; Н- 4,7;

Cr. 9,3; N 18,3.

2-Нитро-3-окси-4-метилбензоил(2J -диметиламинопропил)-амин.

0,5 r ?-нитро-3-окси-4-метилбензойной кислоты растворяют в 10 мл

Ç5 абсолютного эфира, добавляют. ?0 мл безводного бензола и к полученному раствору при комнатной температуре и перемешивании добавляют раствор

0,52 г дициклогексилкарбодиимида в

5 мл бензола. Реакционную массу выдерживают 0,5 ч отфильтровывают дициклогексилмочевину и к Фильтрату добавляют по каплям при перемешивании раствор 0,18 г II -диметиламино4 пропиламина в 5 мл оензола. Выдер-. живают при перемешивании 0,5 ч, отфильтровывают осадок, промывают его небольшим количеством бензола и эфира, сушат, обрабатывают 30-мл воды, 5О водный раствор профильтровывают, упаривают до обьема 1-2 мл и наносят на колонку, содержащую,4 г целлюлозы ДЭАЭ. Хроматографируют в воде, собирая фракцию, отвечающую по

55 TCX на пластинах Силуфол UV-254 в системе метанол-этилацетат-триэтиламин (5:5:1) 2-нитро-3-окси-4-метилбензоил-(1-лиметиламинопоопип)-аминч

5 6

Элюат упаривают досуха, Кристаллизуют из смеси спирт-бензол и из бензола. Получают 0,15 г ?-нитро-3-окси-4-метилбензоил-(f-диметиламинопропил)-амина, т.пл. 182,5-184 С.

Найдено, 1: С 55,5; Н 6,9. с „н, и о

Вычислено,В: С 55,5; 6,8.

Яктиноцил-бис-(-диметиламинопропил)-амин. а) 2,8 t- 2-нитро-3-бензйлокси-4метилбензоил-(It-дйметиламинопропил)— амина гидрируют в 100 мл метанола при атмосферном давлении в присутствии палладиевой черни до 2-амино-3-0Кси"4-метилбензоил-(2I -диметиламинопропил)-амина . Контроль методом ТСХ на пластинах силуфол UV-254 в систе мах: 1-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:1) и хлороформ- метанол-этилацетат (6:1:3). По окончанйи гидрирова. ния реакционную массу проФильтровывают от катализатора и при перемешивании добавляют к суспензии 3,5 г двуокиси свинца в 30 мл метанола.

Перемешивают при комнатной температуре 7 ч,оставляют на 12 ч, упаривают . досуха, экстрагируют хлороформом, хлороформный экстракт упаривают в вакууме досуха, остаток кристаллизуют из бензола. Выход 1,4 r хроматогра- фически однородного силуфол UV-254, система - хлороформ-летанол-этилаце.тат (6:1:3) актиноцил-бис -(g-диметиламинопропил)-амина . T.,пл. t36-.

137ОС. . б) Профильтрованный от катализатора раствор, полученный при гидри . ровании 0,55 г 2-нитро-3-бензилокси4-метилбензоил-(II"-диметиламинопропил) ,амина, смешивают со 100 мл Фосфатно . щелочного буфера (рН 7,2) добавляют к раствору 1,51 г Феррицианида калия в 15 мл того же буфера. Перемешивают 3 ч при комнатной температуре, в реакционную массу вносят насыщен ный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют хлороформом. Хлороформный экстракт промывают водой, сушат сульфатом натрия, упаривают досуха. Остаток кристаллизуют из бензола. Получают 0,3 г вещества с т.пл.

135-137ОС, Не дает депрессии температуры плавления в пробе смешения с образцом, полученным по методу а).

Хроматографическая подвижность образцов, полученных по методам а} и б), одинакова.

77293 - 6 в) Яктиноцил-бис- ф-диметиламинопропил)-амин получают аналогично ме тоду б), исходя из 2-нитро-3-окси-45 метилбензоил-(-диметиламинопропил)амина, гидрирование которого до 2амино-3-окси-4-метилбензоил- ф-диметиламинопропил)-амина ведут при атмосферном давлении в этаноле в присутствии никеля Ренея. Продукт, полученный по методу в), идентичен соединению, полученному по методам а) и б).

Найдено,Ф: С 62,8; Н 4,3; N 16,9..

CZgHggNgOg

Вычислено,",. С 62,9; Н 4,3;

N 16,9.

Уф-спектр (натрийфосфатный буфер, рН 6) Я ggp> нм (Е) ?40(2,8 10 ), 7Q 445 (2. 44-10 ) .

Спектрофотометрическое -титрование . актиноцил-бис-(II -диметиламинопропил)-амина дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК) в натрийфосфатном. бу25 фере (ц0,1) показало, что полученное соединение комплексообразует с ДНК (К 6 10 7, В 0,6) .

Изучение, противоопухолевой ак.тивности проводилось in vitro в системе первичных односуточных стацио-: нарных суспензионных культур опухоле" вых клеток мышей (табл. 1.) и в.системе первичных культур опухолевых кле ток человека (табл.2), а также in

vitro в опытах на мышах (табл .3) °

Из приведенных: в табл.1 и 2 данных следует, что актйноцил-бис-(I3 "" диметиламинопропил) -амин йроявляет противоопухолевую активность в системах первичных суспензионных куль"

4О тур опухолевых клеток мышей и пер" вичных опухолевых клеток человека

in vitro. Данные, приведенные в табл.3, свидетельствуют о том, что актиноцил-бис-(| -диметиламинопропил)45 амин проявляет противоопухолевую ак тивность, равную активности актино-. мицина D, при изучении in. vitro на . солидной опухоли (аденокарциономе

AK 755). Он вызывает торможение рос50 та этой опухоли íà 70, тогда как ак" тиномицин D тормозит рост этой опухоли íà 634, При этом,в отличие от актиномицина D,àêòèíoöèë-бис-(/-диметиламинопропил)-амин не эффективен

55 при лейкозах, а при солидной опухоли дает эффект пролонгирования.

Максимально переносимая доза актиноцил-бис-(II диметиламинопропил)"

6?7293 амина в ?500 раз больше дозы актиномицина D, что свидетельствует о его меньшей токсичности.

Таким образом, актиноцил-бис-(, диметиламинопропил)-амин - препарат ( менее токсичный и более избирательно действующий, чем актиномицин П.

Табл и ца 1

Доза, мкг/мл, подавляющая синтез суммы нуклеиновых кислот на 50

С-37 55178 Эрлих NIz/Ly

Препарат

Актиноцил-бис(87-диметиламинопропил)-амин

10 10 1-10 1-10

0,001 0,0001- 0,001-0,001 0,01

Актиномицин D

0,0010,0001

Таблица2

Сравнительные данные 6 цитостатической активности на первичных опухолях человека

Торможение синтеза суммы нуклеиновых кислот, Ф

Концентрация, мкг/мл

Препарат псевдо- злокач. миксома мезенхинома мела- ра к нома яичника

Актиноцил-бис(f-диметиламинопропил)-амин

10 53 . - 44,5- 47,5

80,0 79,0

1 . 30-40.0,1 .71,5 55,0- 61,5 71.,0

50-.79

44,551,0

Актиномицйн D

О, 01 54,5

52 блица 3

Т а

Сравнительные данные о противоопухолевой активности

Препарат

Разовая

ПродолжительОпухоль или лейкоз

Торможение роста опухоли по окончании лечения, о

Гибель от ток ность сичнос жизни ти число введений на 1 на 3 на 7 день день день животH6IX > о

75,5

«»

71,Р 19,5 24,0

Актиноцил-бис(-диметиламинопропил)-амин

АК 755 нет нет

1. 1?10 75,5 б/э б/э

100,5

125,5 нет б/э нет

ПродолжительРа зовая

Препарат доза х ность жизни ти число введений на 3 на 7 животных,4 на 1 день день день нет

26 нет нет (через 96 ч) 143

0,12,?

Редактор Т. Шарганова

Техред N.T1oðãåíòàë

Корректор И, Эрдейи

Заказ 2310 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Опухоль или лейкоз

Та 100, 5

Р 388 75,5.

Актиномицин D, АК .759 0,.03.5

T. 12.10 0,12.2

677293

Торможение роста опухоли по окончании лечения, о;

63,0 17,0 1,0 .(через 96 ч) 1О

Продолжение табл 3

Гибель от ток» сичнос б/э нет

6/э нет