Хроматографический носитель для фракционирования олигонуклеотидов

 

ЙЖтб 1 I :Д

Союз Соевевтских

Социалистимвских республик опис я= ага

ИЗОБРЕТЕНИЯ (112

К АВТОРСКОМУ СВИДВТВЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 28.03.78 (21) 2598242/23-25 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет— (51) N Кл.

G 01 N 31/08

Государственный квинтет

СССР оо делам нзооретвннй н отнрытнй

Опубликовано 15 09.79. Бюллетень ¹ 34 (53) УДК 543.544 (088.8) Дата опубликования описания 25.09.79 (72) Автор изобретения

В. И. Ямковой (71) Заявитель Новосибирский государственный университет (54) ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ НОСИТЕЛЬ

ДЛЯ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ

Изобретение относится к области разделения смесей биологического происхождения.

Хроматография в водноорганических системах на различных сорбентах в случае. когда сорбент насыщается органической фазой, переносится в колонку и далее уравновешивается водной фазой, называется хроматографией в обращенной фазе.

Известен хроматографический носитель, используемый для фракционирования нуклеиновых кислот и их компонентов — RPO-1, представляющий собой хромосорб W (с диаметром гранул 125 — 150 мкм, промытый кислотой и обработанный диметилдихлорсиланом), пропитанный диметилдилауроиламмоний хлоридом в изоамилацетате (1).

Из известных технических решений наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является хроматографический носитель для фракцнонирования олигонуклеотидов на основе полиэтиленового порошка, на который нанесена органическая фаза (2) .

Недостатком известного хроматографического носителя является нестабильность его органической фазы при использовании в качестве элюентов растворов, содержащих гидрофобные соединения. Как показали результаты проведенных нами исследований, на одной колонке с этим носителем при вве5 дении в элюирующий раствор 0,01 М имидазольного буфера (pH 7,02 может быть сделано не более 5 — 10 анализов олигонуклеотидов вследствие постепенного вымывания с полихлортрифторэтиленового порошка недостаточного количества гидрофобного адогена 464.

Целью изобретения является повышение стабильности носителя.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве органической фазы служит тетра1 октиламмоний бромид при следующем соотношении компонентов, вес. %:

Тетраоктиламмоний бром ид 1 — 5

Полихлортрифторэтиленовый порошок Остальное

Пример. Тетраоктиламмоний бром ида в количестве 0,1 г растворяют в 80 мл хлороформа в круглодонной колбе на 250 мл.

Вносят в колбу 4 г полихлортрифторэтиле685975

Формула изобретения мкМ r

25

5 оу

Составитель Л. )Каркова

Редактор И. Шубина Техред О. Луговая Корректор Е. Лукач

Заказ 5452/45 Тираж 1090 Подписное

Цн И И ПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

I 13035, Москва, )К вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал П П П «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 нового порошка (с диаметром гранул около 10 мкм) и содержимое колбы хорошо перемешивают, разбивая комочки слипше гося порошка стеклянной палочкой. Выдержав смесь 24 ч при комнатной температуре, хлороформ упаривают досуха на ротационном испарителе. Полученный хроматографический носитель переносят в стеклянный гомогенизатор, приливают к нему 100 мл

0,01 М имидазольного буфера (рН 7,0), содержащего КС1 в концентрации 2 М и растирают стеклянным пестиком до образования гомогенной суспензии, оседающей на дно гомогенизатора. После этого носитель уравновешен водной фазой и готов для приготовления колонок.

Полученный хроматографический носитель обладает способностью разделять олигорибонуклеотиды как при элюции градиентом концентрации хлористого калия в 0,01 М имидазольном буфере (рН 7,0), так и при элюции аналогичным раствором, содержащим 7 М мочевину (вещество, разрушающее водородные связи и ослабляющее гидрофобные взаимодействия). В обоих случаях на одной колонке было проведено до 100 анализов без изменения свойств носителя

Свойства хроматографического носителя нв основе полихлортрифторэтиленового порошка с нанесенным на него тетраоктиламмоний бромидом не изменяются также при варьировании процентного содержания тетраоктиламмоний бромида в носителе в пределах от 1 до 5% (см. чертеж) .

На чертеже нанесена кривая зависимости емкости хроматографического носителя на основе полихлортрифторэтиленового порошка с нанесенными на него тетраоктиламмоний бромидом от содержания тетраоктиламмоний бромида в носителе, в %. Емкость определялась по достижении плато на кривой адсорбции гексарибоаденилата из 0,01 М имидазольного буфера (рН = 7,0) .

Как видно из чертежа, емкость носителя при используемых пределах содержания тет10 раоктиламмоний бромида максимальна и не зависит от его количества.

Хроматографический носитель для фракционирования олигонуклеотидов на основе полихлортрифторэтиленового порошка насыщенного органической фазой, отличаюи ийся тем, что, с целью увеличения стабильности носителя, в качестве органической фазы (служит) тетраоктиламмоний бромид при следующем соотношении компонентов, вес. %:

Тетраоктиламмоний бромид 1 — 5

Полихлортрифторэтиленовый порошок Остальное

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Kelmers А. D. à. î. «Journal of Biochem зо 240, № 10, 3979-3983.

2. Roe В. à. î. «Biochem Biophys Acta»

319, № 1, 25-36 (прототип).