Способ получения биомассы

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ к пдтен ту

«i>712029 (61) Дополнительный к патенту (22) ЗаЯвлено 131.174 (21) 2082605/28-13

{23) Приоритет (32)14,1073 (3l) 128724/13 (33) Япония (ЬЦ М. Кл.

С 12 С 11/08 (осударствеи и ы и ком и тот

СССР по делам изобретений и открмтий (БЗ) УД 663 ll (088. 8) Опубликовано 2510.80 Бюллетень,% 3

Дата опубликования описания 2801.80

Иностранцы

Киеси Ватанабе, Хадэиме Кавахарада, Кейичи Каготани,, Кендзи Сузуки, Таками Фудэимото, Есио Симада, Киеси Хисики и Хирохиса Яно (Япония) P2) Авторы изобретения

Иностранная Фирма Канегафучи Кемикал Индастриз Ко, Лтд (Япония) P3) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ

Изобретение относится к технике получения биомассы и может быть использовано в микробиологической промышленности, Известен способ получения биомассы, предусматривающий культивирование дрожжей на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и витамины (1), В известном способе в питательную среду вводят биотин, необхсдимый элемент для роста дрожжей рода Candida, или источник биотина, например мелассу, дрожжевые экстракты и т,д, Для других микроорганизмов известный способ не обеспечивает достаточно высокой скорости роста.

Бель изобретения — увеличение скорости роста микроорганизмов.

Это достигается тем, что в предлагаемом способе получения биомассы .)к питательной; среде добавляют

0,05-500 мкмоль его-предшественника; при этом из дрожжей используют виды

Saccharomyces cerevisiae или Saccharomyces rouxii, или Pichia farinosa, или Pichia membranaefaciens или

Saccharomycopsislipolytiса или

Rhodotorula rubra или Candida

novellus, или Candida tropical is, или Сandida l ipo1ус.icа, или

Candida arborea, или Candida guiIIier mondii или Candida rugosa или

Тогц1орэ1s xylinus, или Torulopsis

magnoliae, или Trichosporon cutaneum, или Trichosporon puIIuIans.

При этом в качестве предшественника используют кротонбетаин или бутирбетаин.

Способ осуществляют следующим образом. Дрожжи культивируют на питательной среде, содержащей источчики углерода, азота, минеральные соли и витамины с добавлением к среде от 0,05-500 мкмоль карнитина или его производных, или 0,05-50мкмоль его предшественника, при этом в качестве последнего используют кротонбетаин или бутирбетаин.

Из дрожжей используют виды Saccharomyces cerevi.sae или Saccharomyces rouxiii или Pichia farinosa, или Pichia membranaefaciens, или

Saccharomycopsis 1ipolitica, или

Phodotorula rubra, или Candida

novellvs, или Candida tropicalis, или Candida lipolytica, или Candida arborea, илн Candida guilIiermondii, или Саг1i.).э 1.- -. a или

712029

S5 или TorylOpsis xylinus, или

Torylopsis magnolie, или Trichosporon

cutaneum, или Trichosporon pullulans

Культивирование проводят при температуре, допустимой для выращивания данного вида дрожжей, и за 5 исключением некоторых микроорганизмов, процесс ведут предпочтительно при 25-40 С, рН среды поддерживают в пределах 6-8 в случае применения органических кислот или высших жирных кислот и в пределах 4-7 при других источниках углерода.

Если в качестве субстрата применяют углеводороды или масла и жиры, возможно добавление поверхностноактивных веществ, например производных жирных кислот, для ускорения диспергирования субстрата в условиях культивирования, В соответствии с определенным этапом развития культивирования возможно добавление пеногасителя, например силиконовой смолы, производного жирной кислоты или моно- или диалкильного сложного эфира полиоксиалкиленгликоля.

Пример 1. К основной сре- . де, доведенной до значения рН 7,0 и содержащей 13 г н-парафина (степень чистоты 980, С о, ), 4 r КН2РО, 5 г сульфата аммония, 0,6 г

М9504 ° 7H O, 30 мг ZnSOq 7Н20, 50 г 30

FeSO, . 7Й О, 10 мг биотина, 1 мг ти амина- гйдрохлорида добавляют водопроводную воду до 1 л, хлорид карнитина добавляют в таких количествах, что он содержится в готовой среде для 35 культивирования в различных концентрациях (см,табл,l) 30 мл полученной среды для культивирования помещают в колбу емкостью 500 мл, предназначенную для перемешивания встряхива- 4р нием, инокулируют 0,5 мл бульона с выращенной культурой Candidai

novellus ATCC 20275. Эту культуру предварительно выращивают в колбе, содержащей основную среду и культивирование осуществляют при 33ОС и 4 встряхивании„ Полученные данные приведены в табл.1.

Пример 2. Микроорганизмы зида Candida tropicalis TFO 0006, "andidа 1ipoIyticai FO 0746

Candida rugosa 1FO0591 культивируют так, как описано в примере 1.

Пслученные данные приведены в табл.2.

Пример3, Микроорганизмы вида Pichia fari—

nosa культивируют согласно примеру

1 с применением среды для культивирования, которая была получена путем добавления хлорида карнитина K той же самой основной среде для культивирования, которую применяют в примере 1 в таком количестве, что полученная среда культивирования имеет различные концентрации хлорида карнитина. Полученные данные приведеныв табл.3.

Пример 4.

Микроорганизмы вида Saccharomyces

rouxii культивируют согласно примеру

1. Полученные данные приведены в табл,4.

Пример 5.

Микроорганизмы вида Saccharomycopsis l ipolutica CBS 6124 культивируют согласно примеру 1, Полученные данные приведены в табл.5.

Пример 6.

Микроорганизмы вида Torulopsxs

xylinus 1FO 0454 культивируют согласно примеру 1. Полученные данные приведены в табл.б.

Пример7.

Микроорганизмы вида Saccharomyces

cerevisiae {дрожжи для хлебопечения) культивируют по примеру 1 с тем отличием, что в качестве источника углерода взамен н-парафина применяют

20 r этанола, В качестве витаминов добавляют 2 мг пантотената калия, 10 мг пиридоксина в виде хлористоводородной соли и 10 мг инозитола в добавление к биотину и тиаминугидрохлориду. Температуру доводят

О до 30 С. Полученные данные приведены в табл.7.

При мер 8.

Микроорганизмы вида Pichia mern

branaefaciens 1AM 4744 культивируют по примеру 1 с тем отличием, что применяют основную среду, доведенную до рН 6,0, следующего состава: 10 г уксусной кислоты: 15 г КН.РО, 15 г Na,,HP04,. 13 r (NH4) НР04,.

2 г NgSO ° 7Й О; 30 мг ZnSO4 7Н, О;

10 мг FeSO,) 7Í, О; 10 мг биотина.

Водопроводную воду добавляют до

1 л. Полученные данные приведены в табл.8.

Пример9.

Микроорганизмы вида Rhodotorula

rubra 1FO 0383 культивируют по примеру 1 с тем отличием, что в качестве источника углерода взамен н-парафина применяют 20 г глюкозы.

Полученные данные приведены в табл.9.

Пример 10.

Повторяют пример 1 с тем с дополнительным добавлением соответственно кротонбетаин-гидрохлорида и бутирбетаин-гидрохлорида. Полученные данные приведены в табл.10.

712029

Таблица 1 ентрация клеточного материала, г/л ельность культивирования, ч

16 ч 18 18 ч 20

6,4

9,4

10,5

7,1

0,05

10,7

12,3

12,0

0,5

8,3

13,0

12,2

9,0

l3,8

13,8

13,0

10,2

10,5

13,8

13,3

500

Таблица 2 ериала,г/л

Штамм я, ч нием хлорида мкмоль

0 ) 24

Candida 1ipolytica 1FO.07.46 1,5 5,6 8,7

Candida tiopicalis 1Fo.0006 1,9 6,7 9,4

3,4 9,6

4,2 10,3

3,1 8,5

9,3

10,4

Candida rugosa 1FO 0591 0,9 4,4 7,5

9,9

Т а б л и ц а 3 трация клеточного материала,г/л льность культивирования, ч

18

8,0

5 4

8,6

11,5

0,5

9,4

12,7

Таблица 4 чного материала, г/л ивирования, ч (24

7,3

2,2

9,0

9,1

3,8

10,1

0,5

4,2 10, 5

11,6

Концентрация хлорида карнитина,мкмоль

Концентрация хлорида карнитин мкмоль

Концентрация хлорида карнит мк моль

10,2

12,8

13,3

712029

8,7

l,5

5 6

8,8

9,5

0,5

3,0

9, 6

9,8

3,4

2,3

6,5

8,5

8,7

0,5

4,6

9,3

10,9

5,9

10,1

Т а б л и ц а 7

Конц хло тин

10,0

6 1

0 5

7,9

10 5

5,5

8,4

10,9

11,0

5,8

8,6

К х т

1,8

2,6

3,4

3,1

2,5

3,9

0 5

2,8

Концентрация хлорида карнитина, мкмоль

Та блица 5

Таблицаб

Таблица

63,5

72,0

75,0

74,0

712029

Таблица 9

Концентр хлорида тина,мкм

5,8

11 5

7,7

4,6

6,8

12,0

10,8

6,9

0,5

6,9

12,2

713

Та блица 10

Дополнительн вещество,мкм

10,7

6 5

Не вводится

Кротонбетаингидрохлорид

j3t 4

l3,5

12,1

8,5

0,56

12,3

8,7

5,6

Бутирбетаингидрохлорид

0,55

8,0

ll 7

12,9

5,5

8,5

12,0

13,1

Формула изобретения

Составитель A.Бражникова

Редактор Т.Зубкова Техред Л.Алферова Корректор Н.Стец

Заказ 9386/66 Тираж 522 . Подписное

IIHHHIlH ГосударстВенного комитета СССР по делам изобретений и октрытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП Патент, r.yæãoðoä, ул,Проектная,4

l. Способ получения биомассы,предусматривающий культивирование дрожжей на питательной среде, содержащей источники углерода, аэота, минеральных солей и витаминов, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью увеличения скорости роста микроорганизмов, к питательной среде добавляют

0,05-500 мкмоль карнитина или его производных, или 0,05-50 мкмоль его предшественника, при этом иэ дрожжей используют виды Saccharomyces

cerevisil,èëè Saccharomyces rouxii, или Pichia farinoza, или

Pichia membranaefaciens, или Saccha, romycopsis IipoIytica, или йпойо оги-

40 Ia rubra, или Candida novellus znH

Candida tropicaIis, или Candida IipoIytica, или Candida arborea, или Candida guiIIiermoridii, или Candida rugosa, или ToruIopsis xyIinus, или

ToruIopsis ° magnoliae, или Trichosporon cutaneum, или Trichosporon puIIuIans.

2. Способ по п.l, о т л и ч а ющ я и с я тем, что в качестве предшественника карнитина используют кротонбетаин или бутирбетаин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент СССР 9 355807, кл. С 12 С -11/18,опублик,1972 (прототип).