Штамм 705-57-продуцент молокосвертывающего фермента

 

Свюэ Советских

Сец еаинсткческки

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (63) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 27.12.77 (21) 2568594/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 150580. Бюлл тень №18

Дата опубликования описания 15 580 (зим. к .

С 12 К 1/02

С 12 П 13/10

A 23 С 19/02

Госуварственный комитет

СССР но иенам изобретений и открытий (5З) 4К 577. 15. .07(088.8) (72) Авторы изобретения

Т.В. Емцева, З.М. Геберович, С.A. Коновалов, И.В. Карманова и Т.A. Харитонова

Всесоюзный научно-исследовательс",ий биотехнич.ский .институт (71) За яв и тель (54) lIlTAMM ВАС11.1.1 5. PDLYMYX К

705-57-ПРОДУЦЕНТ МОЛОКОС1,ЕРТЫВАЕЦЕГO

ФЕРМЕНТА

3 2

Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий, который может быть использован для получения ферментного препарата, заменяющего сычужный фермент, применяемый в сыроделии °

Известен штамм Bac1IIus poIymyxa

13-13, характеризующийся тем, что он обладает молокосвертывающей активностью культуральной жидкости

3500 ед/мл и протеолитической активностью — 0,80 ед/мл (1).

Недостатком штамма является его 15 недостаточно высокая активность для рентабельного производства ферментного препарата.

Наиболее близким.по технической сущности к изобретению является исход20 ный штамм Bac.poIymyxa 705, полученный из Всесоюзной коллекции микроорганизмов. Подробного описания культурально-морфологических свойств нет. Указаний на активность молокосвертывающего фермента нет. По

"бранным исследователей активность молокосвертывакщего фермента,определенного по методу Пятницкого Н.П. и Пятницкой И.Н., составляет 5000- 30

6000 ед/мл и .-родолжительность культивирования 32 ч (2) .

Целью изобретения является получение нового штамма мутанта культуры Вас.ро?утпуха 705, с повышенным биосинтезом молокосвертывающего фермента при глубинном способе культивирования.

Использование штамма Вас.poIymyxa

705-57 даст возможность получать активный комплекс молокосвертывающего Фермента при глубинном способе культивирования, тем самым, интенсифицировать производство молокосвертывающего фермента. Штамм Вас.ро?утпуха

705-57 — продуцент молокосвертывающего фермента получен из штамма Вас.poIymyxa 705 путем индуцированной селекции с применением комбинированного воздействия этиленимина в концентрации 1:5000 при экспозиции 30 мин и УФ-лучей в дозе 4000 эрг/мм . Выделенный активный мутант подвергали проверке ферментативной активности при хранении и при пересевах на свежую питательную среду. Культивирование мутанта Hac.poIymyxa 705-57 в глубинных условиях проводили на жидкой питательной среде, содержащей крахмал картофельный растворн734272

4375

3500

1 3-13

5455

6000

705

8889

8000

0,9

705-57

60 б5 мый, лизаты дрожжей, К НРО», ° KH PO

NgSO4, NnSO4, CACO, FeSOg °

Рост штамма на указанной среде в условиях глубинного культивирования на качалке (со скоростью вращения

160-180 об/мин) Ари 26 С в колбах емкостью 750 ьл со 100 мл питательной среды интенсивный, культура имеет вид густой, слизистой бактериальной массы. Максимальное образование молокосвертывающего Фермента в культуральной жидкости наблюдается к 32 ч роста. Показатели активности молокосвертывающего фермента, определяемого по методу Пятницкого Н.П. и

Полученный мутант Вас.polymyxa 705»

57 имеет следующие морФологические и Физиологические, признаки.

Морфологические признаки.Грампо-! ложительные палочки с закругленными 35 ,концами соединены по две или одиночные. Размер (2, 3-5) Х (О, 6-0, 7) мкм.На

5 сутки встречаются клетки со спорами клостридиального типа.

Десятисуточная культура состоит из спор размером (1,2-1,4)1 (0,7-0,7 мкм.

Культуральные признаки. Сусло агаррост обильный, колонии белого цвета, выпуклые, слизистые, блестящие, поверхность бугристая. Край колоний неровный, консистенция вязкая, упру- 45 гая. Среда без видимых изменении.

Картофельный агар-характер роста как и на сусло агаре.

Эшби агар-рост диффузный или совсем отсутствует. 50

МПА-рост слабый, в виде тонкого плоского налета, гладкий. Слизь не образуется. Край колонии Фестончатый, поверхность неровная. Среда беэ видимых изменений.

Среда Чапека-колонии мелкие, прозрачные, слизистые, беловато-серого цвета.

Ломтики картофеля-рост обильный, колонии белые, слизистые, выпуклые эа счет пузырьков газа. Картофель размягчается.

Ломтики моркови-рост слизистый очень обильный, прозрачный, слегка с желтоватым оттенком.

Десятницкой И.Н. составляет 8000 ед/мл культуральной жидкости и протеаэы

0,8-0,9 ед/мл (стандартный метод

ГОСТ 202642-74).

Исследованиями, проведенными в течение 6 мес., установлено, что при хранении и пассировании на среде с ломтикамы картофеля высокий уровень активности молокосвертывающего

Фермента у мутанта Вас.polymyxa 70557 не снижается.

Сравнительные данные молокосвертывающей и протеолитической активностей штаммов Вас.роХувуха приведены в табл. 1.

Т а б л и ц а 1

МПБ-рост слабый. Пленки не образует. На поверхности диффузионный налет. На дне рыхлый осадок. В середине столбика рост в виде тонкого стержня. . Фнлиологическне признаки. Среда

Гетчннсона-рост отсутствует,клетчатка не разрушается.

Молоко створажнвается через сутки. Сыворотка отстает и хорошо отделяется по всей толще столбика.

Желатина-рост на поверхности и в глубине по уколу. Разжижение кратеровидное.

Крахмал гидролизуется, рост пьааНЦЙ.

Отношение к источникам углерода.

Глюкозу, сахарозу, лактозу, кснлозу арабинозу, маннит, глицерин усваивает. Инозит не усваивает, рамнозу усва-в ивает очень слабо.

Отношение к температуре. Развивается прн температуре от 10 до 45ОС с оптимумом при 30 С. Максимальное образование молокосвертывающего фермента при 26 С.

Нитраты восстанавливает в нитриты.

Отношение к кислороду - факультативный анаэроб.

Пригодность фермента, сннтеэируемого Вас.polymyxa 705-57, для свертывания молока в сыроделин проводили по методу быстрой пробы, который дает возможность предсказать:органолентические свойства сыра, приготовленного с заменителем сычужного фермента.

734272

Т а блица 2

4375

13-13 100 1, 29

Плотная

Без Беэ заме- заме;ча- ча-. ний ний

705-57 100

8889

Плотная

Без Без

sa- замеча- мечаний иий

0,5

Формула изобретения

ЦНИИПИ Заказ 2007/35 Тираж 522 Подписное

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Штамм Вас.poIyIIIyxa 705-57 по результатам быстрой пробы пригоден для свертывания молока в сыроделии. Для свертыванкя равного количества молока требуется в 2,5 раза меньше раствора ферм нта, продуцируемого

Таким образом, предлагаемый штамм по сравнению с прототипом обладает повышенной способностью к биосинтеэу молокосвертывающего фермента и представляет собой новый штамм со стойкими биохимическими свойствами.

Штамм BaciIIus poIymyxa 705-57 продуцент молокосвертывающего фермен- 40 та. Хранится в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов, регистрационный номер ЦМПМ-В-1531. 45

Морфологические признаки. Клетки грамположительные, палочки с закругленными концами величиной 2,3-5х0,6 0,7 мкм.Размер спор 1,2-1,4 у. 0,70,75 мкм. 50

Культуральные признаки. Сусло-агаррост обильный, колонии белого цвета, выпуклые, слизистые, блестящие.

Край колонии неровный, консистенцкя вязкая, упругая. 55

Картофельный агар-характер роста как и на сусло-агаре.

Эшби агар-рост диффузионный или совсем отсутствует. MI1A-рост слапредлагаеьятм,штаммом, чем штаммэманалогом.

Штамм Вас.роХутвуха 705-57 обладает более высоким отношением молокосвертывающей активности к протеоли:тической (данные приведены в табл.2). бый, в виде плоского налета, гладйий, слкэь не образуется, Край колонии фестончатый; поверхность неровная. Среда беэ,видимтх изменений.

МПБ-рост слабый, пленка отсутству ет, на поверхности очень слабый диффузионный налет. На дне рыхлый осадок °

Физиологические признаки. Среда Гетчинсона — рост отсутствует. Клетчатка не разрушается.

Молоко створажнвает через сутки.

Сыворотка отстает и хорошо отделяется по всей толще столбика.

Отношение к источникам углерода.

Усваивает глюкозу, сахарозу, лактоэу, ксилозу, арабинозу, маннит, глицерин; не усваивает — иноэит, очень слабо усваивает рамноэу.

Крахмал гидролизует.

Нитраты в нитриты восстанавливает.

Отношение к температуре-развиваето

;я при температуре оТ 10 до 45 С с оптимумом при 30 С. Максймальное образовайие фермента при 264С.

Источники информации, принятые во вниманке при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

В 471380, кл. С 12 D 13/10, 1971.

2. Штамм BaciIIus polymyxa — 705, зарегистрирован во Всесоюзной коллекции института Микробиологии AH СССР (прототит .