Способ инактивации грибного токсина

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (!i) 740249 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 27.09.78 (21) 2668574/30-15 с присоединением заявки J4— (51) М. Кл.

А 61 K 31/14

А 01 Й 9/02

Гооударстевиный комитет (23) Приоритет— (53) УДК 576,8. . 095.87:

:576.8,097. .29:661.185 (088.8) по делам изобретений и открытий

Опубликовано 15.06.80. Бюллетень № 22

Дата опубликования описания 18.06,80. (72) Авторы изобретения

С. Н. Харченко и B. П. Литвин

Украинский ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственная академия (71) Заявитель (54) СПОСОБ NHAKTHBAUNH ГРИБНОГО ТОКСИНА

Изобретение относится к области ми-, котоксикологии, в частности к способам инактивации грибных токсинов, конкретно токсина дендродохина остротоксичес- кого метаболита гриба ВеМгодос1т1итп

t0)cicurp Р1с1орс, Е Biloxi.

Известен способ инактивации токсина . афлатоксина в пищевых продуктах .смесью окиси этилена с метилмормиатом Ц .

Известен также способ инактивации бактерийных токсинов, основанный на . использовании поверхностно-активного вещества - гексаметилендиизоцианата, избыток которого при гидропизе превращается в гексаметилендиамин и угольную кислоту P). . Однако ни одиним из этих способов нельзя инактивировать токсин дендродохин.

Целью изобретения является создание способа, позволяющего эффективно инак . тивировать токсин дендродохин.

Указанная цель достигается тем, что в качестве поверхностно-активного вещества используют этоний или додецоний, ко2 торые берут в 0,1 1,0%-ной концентра-, ции водного раствора на 1 -30 мг/мл дендродохина, а инактивацию проводят в течение 1-3 сут.

П р и М е р . Инактивацию образуемо го грибом токсического метаболитадендродохина проводили путем добавления к спиртовым растворам, содержащим раз- . личные концентрации (1 100 мг/мл) кристаллического препарата токсина, 0,1; 0,5; 1,0%-ных растворов атония .или дедоцония.

Реакционные смеси объемом 2-10 мл инкубировали при комнатной температуре в течение 1 -7 сут. В качестве контроля использовали соответствующей концентрации спиртовые растворы дендродохина, к которым добавляли определенные объемы дистиллированной воды без инактивато- ров, Присутствие дендродохина в реакцион ных смесях после контакта с поверхностно-активным веществом (ПАВ) устанавли вали по изменению фунгистатической акВремя контакта токсина с ПАВ, сут.ПАВ концентрация

% (мг/мл) Исходная концентра

/ ция токсина, мг/мл

Концентрация токсина, мг/мл

Радиус зоны, Концентрация токсина, мг/мл

Радиус зоны, MM

Радиус . зоны, мм

Концентрация токсина, мг/мл

Этоний

1) 30

05 (5) 30

1,0 (10) 30-40

100

10

30,5

3 тивЬости микотоксийа по отношению к чувствительной к нему тест-культуры . Can ol l do Ые йр Ыдеа штамм 63 методом бумажньи дисков или серийных разведений, хроматографинески, кожной пробой в опытах на лабораторных животнйх.

Бумажные диски диаметром 4 мм смачивали в контрольных растворах и опытных смесях, затем наносили на поверхность агаризованного сусла (среда, 10 оптимальная для роста тест-культуры), засеянного С, Майсйойемштамм 63, и выдерживали в термостате при 37 С о

24 ч. О количественном содержании дендродохина в контроле и реакционных сме- 15 сях судили по величине стерильных зон угнетения роста тест-культуры, образуемых вокруг дисков.

Серийные разведения применяли для учета степени дендродохининактивирую- 20 щего действия ПАВ по изменейию антибиотической активности токсина в контроле и реакционных смесях (до и после контакта с fIAB), которую выражали концентрациями дендродохина в 1 мл жидкого сусла (7 по Баллингу) в пробир, ках, где отмечали попное угнетение рос та тест-культуры, Нагрузка тест-культуры составляла 200 000 микробных кле-: ток в 1 мл питательной среды. Бремя

30 инкубации 18-24 ч.при 37 С.

На полости хроматографической бумаги (Ленинградская быстрая" ) шириной

1 см и длиной 20 см, на расстоянйи

3 см от нижнего конца наносили 0,02мл

" исследуемого-раствора "и после подсушивания помещали хроматограммы в хроматографические камеры с хлороформом.

49

После прохождения растворителем от-„ меченного расстояния (20 см) хроматограммы высушивали на воздухе и проявляли биавтографически в специальных кюветах на агаризованном сусле, засеянном чувствительной к дендродохину культу» рой С.ete00otoidea штамм 63 в течение 24 ч при 37 С, О присутствии в контрольных и опыт-, ных пробах дендродохина или других токсических компонентов судили по наличию, величине и расположению стерильных зон угнетения роста тест-культуры. Я дендродохина в хлороформе 0,8-0,9

Кожную пробу на кролике осуществля- ли следующим образом. На депелирован» г ный участок кожи стеклянной палочкой наносили контрольные растворы, содержащие соответственно разные концентрации дендродохина или ПАВ, а также опытные реакционные смеси (по 0,5 мл). Учет дерматонекротической реакции проводили через каждые 24 ч на протяжение 7-10 сут.

Характеристика дендродохининактивирующего действия этония и додецония по степени фунгистатической активности и изменению содержания дендродохина в реакционных смесях в зависимости or концентрации и времени контакта токсина с ПАВ представлена в табЛице.

Как видно из таблицы, 1 мг/мл это ия инактивирует в течение 1 сут до

4 мг/мл дендродохина, 1 мг/мл додецония - 3 мг/мл дендродохина.

740240 — Продолжение таблицы

22

0,5 (15

5) 30 . 20

10) 30-40 1 8

100 30

1,0 (10

Контроль

30

26 30 йендродохин 30

/ без контакта с ПАВ 40

40

Этоний 1 / ный водный раствор йодецоний

1%-ный водный раствор

Ф

Отсутствие зоны угнетения роста тест-культуры.

ВФЛА » .

Йодецоний

01 (1) 30 24

Увеличение концентрации ПАВ в реак» ционных смесях (5,10 мг/мл).

Характеристика дендродохининактиви- рующего действия этония и додецония (по величине стерильных зон угнетения роста 0.МоИМо део штамм 63 и изменению концентрации токсина в реакционных смесях). приводило к сокращению сроков инактивации и повышению количества обезвреженного токсина. Содержание в реакционных смесях 5 мг/мл . этония или додецония за 24-48 ч приводило к инактивированию до 40 мг дендродохина, 10 мг/мл - в течение 2 сут обезвредили 100 мг токсина.

Установленная биологическим путем инактивация дендродохина ПАВ в зави/ симости от концентрации и времени действия инактиваторов подтвердилась хроматографически. Зона угнетения роста тест-культуры (К дендродохина в хлороформе 0,8-0,9) при биавтографическом. проявлении хроматограмм отсутстврвала.

Полная детоксикация дендродохина во всех вариантах опыта отмечалась на третьи сутки контакта токсина с исследуемыми концентрациями ПАВ.

Проверка дерматонекротического действия реакционных смесей в контрольных растворах, содержащих разные количества дендродохина, показала, что токсин до контакта с fIAB также, как и контрольные растворы дендродохина, при нанесе« нии, на депелированную кожу кролика вызывает воспалительную реакцию четвертой степени, которая характеризовалась : покраснением, сильным отеком, глубоким сухим некрозом, захватывающим и подкожную клетчатку, образованием долго не заживающих язв.

После трехсуточного контакта дендродохина в концентрации 30мг/мл с

0,1%-ными растворами ПАВ, а также двухуточного контакта токсина в концентраim 30-40 мг/мл с 0,5 и 1,0Ъ-ными

7402

Формула изобретения 10

7 растворами ПАВ, дерматонекротцческая реакция на коже кролика не отмечалась.

Полученные данные позволяют считать возможным испОльзование изученных инактиваторов для обезвреживания кормов, пораженных остро токсическим грибом

ОЕпдгодосйют 4oxicum. !

Способ инактивации грибного токсина, основанный на использовании поверхностно-активного вещества, о т л и ч а ю

49

8 шийся тем, что, с целью эффективного инактивирования токсина дендродохина, в качестве поверхностно-активноto вещества используют атоний или додецоний, которые берут в 0,1««1,0/0ной концентрации водного раствора на

10-30 мг/мл дендродохина, а инактивацию его проводят в течение 1-3 сут.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Заявка. ФРГ № 2557599, кл. А 01 Й 9/02, 1977.

2. Патент ФР1 М. 2137630, кл. А 61 К 9/02, 1975.

Составитель В. Радьков

Редактор Е. Харина Техред М. Петко Корректор Г. Решетик

Заказ 3072/4 Тираж 673 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изоретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4