Способ получения альбумина

 

с

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сеюэ Советскнх

Сецнаннстнческнх

Респубвнк

ni> 743564

К ПАТЕНТУ

I (6() Дополнительный к патенту (51) М. Кл.

А 61 К 37/02 (22) Заявлено 2803.75 (23) 2117933/28 — 13 (23) Приоритет (32) 28. 03. 74

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий (33) Р 2415079.6 (И) (53) УДК 615 ° 361. .018.51/55 (088.8) Опубликовано 250 80,Бюллетень М 23

Дата опубликования описания 2506.80 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Вальдемар Шнайдер, Кристиан Фрелих, 3 ° Харальд Фидлер и Ханс Лефевр (ФРГ) P3) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЬБУМИНА

Изобретение относится к области медицины, а именно гематологии.

Известен способ получения альбумина путем тепловой обработки плазмы крови человека, из которой удалены факторы свертывания, в присутствии стабилизирующих альбумин веществ при нейтральных значениях рН, охлаждения, установления рН до 4, последующего осаждения образовавше- 36 гося осадка, содержащего глобулины, и выделения целевого продукта 311 .

Однако при таком способе выход альбумина недостаточно высокий (6070%). 15

Цель изобретения — повьхаение выхода альбумина.

Это достигается тем, что тепловую обработку плазмы осуществляют

9%-ным спиртом, смесь равномерно. © нагревают до 60 — 75оС и обрабатывают в течение 3 ч.

Пример 1. Для отделения плазмы используют плазму, которая лишена свертыванхцих факторов. Сверты- нв вающий фактор Vill и фнбриноген устраняют при помощи осаждения криоэтанола. Протромбины устраняют путем адсорбции ДЕАЕ-целлюлозы.. Первб- начальная плазма является HBAg-отри- Е цательной, имеет нормальную величину трансаминазы и не содержит видимого гемоглобина. В исходную плазму вводят каприлат натрия до тех пор,пока не будет концентрация 0,004 моля.

Смесь, содержащую около 9% этилового спирта, нагревают при рН 6,5.Значение рН достигают при помощи 0,5

NHCL. Температуру за 3 ч доводят до

68 С. Затем жидкость охлаждают,рН. понижают до 4,4 с помощью HCL. Подкисленную плазму оставляют на ночь (примерно при 10 С).

Отделение фракции осуществляют в центрифугах с непрерывным потоком при помощи силиконовых шлангов. Отделенные белковые вещества собирают в роторы. Альбумин находится в оставшейся жидкости. Отделенные в роторах белковые вещества не содержат альбумина, который получают дополнительно при помощи повторного смывания и пропускания через центрифугу. Для того, чтобы осадить альбумин, оставшуюся жидкость фильтруют через SSK-фильтр, при этом удаляются оставшиеся липиды и неизмененные, протеины. Затем добавляют осаждающее средство, например, 18%-ную малеиновую кислоту при комнатной тем7435 б 4, 10% протеина и 4-5% спирта, содержа-! ние спирта и растворе устанавливают до 9Ъ. Затем смесь нагревают до о

68 С. Осадок пропускают через центрифугу и промывают, чтобы удалить содержащийся еще альбумин. Оставшуюся жидкость фильтруют и осаждают полиэтиленгликолем, малеиновой кислотой или другими осажцающнми средствами.

Пример 4. Аналогично примеру 3 взвешивают 1,0 кг фракции IV (пасты) в 3,0 л воды, которая содержит 0,004 моля каприлата натрия в качестве стабилизирующего вещества.

Раствор содержит около 7,5% протеина и примерно 7% спирта. Получают альбумин иэ раствора как в примере 3. Альбумин получают иэ 9%-ного спиртового раствора.

Примерно 20В протеина в фракции

IV-1 представляет собой альбумин.

26 Можно дополнительно получить 1-2 r добавочного альбумина на 1 л выходной плазмы.

Также получают добавочный альбумин фракции !Ч. ,$$ 3aTeM альбумин получают при помощи осаждения или лиофилизации,можно также применить ультрафильтрацию или выпаривание воды иэ раствора путем ротационного испарения.

Предлагаемый способ позволяет увеличить выход альбумина.

Составитель С. Малютина

Техред М. Петко Корректор С. Шекмар,Редактор А. Бер

Заказ 3495/52

Тираж 673 . Подписное цНИИПИ Гос.ударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППН "Патент", г.

3 с ." °

j+ а пературе. В течение нескольких секунд альбумин осаждается.,Суспензия альбумнна снова проходит через центрифугу. При этом малеиновая кислота и соли остаются в свободной от протеинов жидкости.

Альбумин собирается в роторах в виде пасты. В сосуде она поглощает дистиллированную воду и переводится в 8%-ный раствор. После фильтрации альбумин может быть переведен непосредственно в 4-5%-ный употребляемый раствор, причем осмотичность регулируют при помощи глюкозы или других подходящих веществ. Затем продукт стерилизуют фильтрацией, разливают по бутылям и пастериэуют в течение 10 ч при 60 С.

H p и м е р 2. Приготовление

20%-ного раствора альбумина. Отделение плазмы и отделение фракций осуществляют по примеру 1. Затем осаждают альбумин.

Оставшуюся жидкость фильтруют при помощи SSK-фильтра, чтобы удалить оставшиеся липиды и иэмефные протеины. Затем в качестве осаждающего средства добавляют полиэтиленгликоль с мол.в. 4000-6000 22%"ной концентрации при комнатной температуре. Альбумин осаждается в течение 30 мин.. Суспензию снова пропускают через центрифугу. При этом полиэтиленгликоль и соли остаются в свободной от протеинов жидкости.

Альбумин собирают в роторы в виде пасты. В сосуде она поглощает дистиллированную воду и переводится в 8%-ный раствор. 8%-ный альбумин после фильтрации лиофилиэуют. Высушенный порошок поглощает дистиллированную воду.

Пример 3. 1,0 кг фракции

iV†- (пасты) взвешивают в 2 л води,.которая содержит 0,004 моля каприлата натрия в качестве стабилизирующего вещества.:С помощью гидроокиси натрия значение рН доводят до 7-7,5. Суспенэию слегка перемешивают при комнатной температуре. Значение рН проверяют и регулируют. Большая часть пасты растворяется в течЕние 1 ч. Получающийся неочищенный раствор содержит около

Формула изобретения

Способ получения альбумина путем тепловой обработки плазмы крови человека, из которой удалены факторы свертывания, в присутствии стабилизирующих альбумин веществ лрн нейтральных значениях рН, охлаждения,установления рН до 4, последующего осаждения образовавшегося осадка, содержащего глобулииы, и выделения целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода, тепловую обработку плазмы осуществляют 9%-ным спиртом, смесь равномерно нагревают до 60 — 75оС и обрабатывают. в течение 3 ч.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США Р 2705230, кл. 260-122, опубл. 1955.

Ужгород, ул. Проектная,4