Способ получения сывороточного альбумина

 

( (пп 467536

ОП И САН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт, свид-ву (22) Заявлено 05,02.71 (21) 1629487/31-16 (51) М. Кл А 61К 23, 02 с присоединением заявки Хе

Гооулерственный комитет

Совете Министров СССР по лелем изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 05.07.76. Бюллетень К 25

Дата опубликовашгя описания 28.06.76 (53) УДК 615.373(088.8) (72) Авторы изобретения

М. И. Иванов, А. А, Фром, А. А. Никитенко, В. М. Русанов, А. Е. Киселев и Л. И. Скобелев

Центральный ордена Ленина институт гематологии и переливания крови (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЪ|ВОРОТОЧНОГО АЛЪБУМИНА

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам получения сывороточного альбумина.

Известен апособ,получсни:i сывороточного альбумина из белковых растворов, содержащих альбумин, путем разделения смеси белков этиловым спиртом. Однако известный спосоо не дает возможности получать чистый альбумин.

С целью повышения степени очистки препарата по предлагаемому способу этиловый спирт к белковому раствору добавляют до концентрации 18 — 35 об. /О, одновременно добавляют соль жирной кислоты, например каприлат натрия, в количестве 0,1 — 0,6% при

0 — 30 С и рН 2,0 — 5,0, выпавший осадок отделяют центрифугированисм, извлекают альбумин из осадка и центрифугата, концентрируют и отделяют от спирта известными приемами, Кроме того, с целью стабилизации целевого,продукта после удаления спирта из раствора снижают рН до 3,3 и вновь повышают до

7,0.

Пример 1. Берут 50,-. смеси плацентарной н абортной сыворотки. Путем фракционирования сыворотки liio Кону отделяют фракцию II+III, которую используют для,приготовления гаммаглобулина. Центрифугат «А», оставшийся после отделения осадка фракции

I 1+111, содержит 25 этилового спирта, около 2 белка, примеси гсмопигмента, пирогенпых суостапций, тканевые белки; рН раствора 7,2 — 7,8. I(полученному раствору дооавляют каприлат натрия до его конечной концентрации 0,3 /о, рН не коррегируют.

После растворения каприлата натрия рН смеси снижают до 3,3, тем(пературу раствора предварительно устанавливают 20 С. После

10 перемешивания в течение 30 мин при 20 С рН смеси смещают до 4,4, после чего раствор центрифугируют для отделения образовавшегося осадка. Центрифугат освстляют .фильтрацией и снижают етого темгературу до — 6—

15 8 С. 11ри таких условиях альбумин переходит в нераствори;,ioe состояние и его оделяют центрифугированием. Полученный осадок растворяют и дистиллированной апирогенной воде, смещают рН до нейтральных значений, 20 затем снижают рН до 3,3 и вновь (повышают до 6,8 — 7,2. После установления рН белковый раствор разливают по флаконам, пристеночно замораживают и лиофильно высу шива1от. Порошок альбумина растворяют в а(пирогенной

25 дистиллированной воде до требуемой концентрации, осветляют и стерплизуют фильтрацией, стерильно разливают по флаконам.

П р и м с р 2. Исходным сырьем служит донорская плазма. 50 л плазмы обрабатывают

30 методом Кона, включая стадию отделения

467536

Формула изобретения

С оста витель Т. Гол ови на

Техред Т. Зимина Корректор Т. Добровольская

Редактор Т. Блохина

Заказ 1317/6 Изд, 1Ге 1334 Тираж 630 Г1одп ис пое

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, >К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 осадка I I+ II I. В центрифугате, полученном после отделения осадка фракции II+III и содержащем 25 об. /о спирта, доводят концентрацию каприлата натрия до 0,3/о, рН снижают до 4,5. Раствор выдерживают при 20 С в течение 20 мин. Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием, который служит для дополнительного извлечения альфа- и бета-глобулинов и альбумина.

Осадок растворяют в дистиллированной воде, осветляют фильтрацией, рН довадят,до нейтральных значений. Полученный раствор содержит 15 /о альфа-глобулинов, 25 /о бетаглобулинов и 60% альбумина. В центрифугате снижают концентрацию водородных ионов до 3,3. После перемешивания B течение 30 мин рН доводят до 4,5, затем отделяют образовавшийся осадок. Процесс проводят при положительной температуре, Осадок содержит альбумин, бета-глобулины и денатурированные белки. Центрифугат охлаждают до — 8 С, оставляют для созревания осадка на 24 ч. Осадок, содержащий чистый альбумин, отделяют центрифугированием. Осадок чистого альбумина растворяют в апирогенной дистиллированной воде в соотношении 1: 4, лиофильно высушивают. Порошок альбумина растворяют в апирагенной дистиллированной воде до концентрации 20о/о, рН раствора снижают до 3,3 и выдерживают 30 мин. Затем раствор осветляют фильтрацией при рН 4,5 и среду нейтрализуют до рН 7,0. Полученный раствор содержит иммунофоретически чистый альбумин, устойчивый к,прогреву при 60 С в течение

10 ч с целью инактивации вируса гепатита, причем для стабилизации раствора не требуется .дополнительного добавления стабилизирующих веществ.

Пример 3. Сырьем служит экстракт ллаценты, содержа щий 2,5 /о белка, тканевые белки, гемоглобин до 50 /, от общего белка, пирогенные субстанции.

Процесс ведется аналогично примеру 1, за исключением количества каприловокислого натрия, используемого для фракционирования. Каприлат натрия добавляют до концентрации в растворе 0,2, что связано с пониженным содержанием белка в исходном материале.

Пример 4. Исходное сырье — плазма или сыворотка бычьей крови.

K 50 л такой сыворотки добавляют

96%-ный спирт до его конечной концентрации в растворе 25 об. %. Перед добавлением спирта в сыворотку вводят каприловокислый натрий до концентрации его в растворе 0,3%.

После растворения каприлата натрия рН раствора доводят до 3,3. В этих условиях белковую смесь выдерживают при 20 С в течение 40 мин, после чего рН защелачивают до 4,5. Образовавшийся осадок отделяют центрифугироваиием. После отделения осадка температуру центрифугата снижают до — 8 С и раствор выдерживают в течение 48 ч для образования осадка. Отделенный осадок содержит альбумин и следы тлобулинов. Осадск разводят апирогенной дистиллированной водой в соотношении 1: 4 и подвергают лиофилизации.

Сухой порошок альбумина растворяют апирогенной дистиллированной водой до требуемой,концентрации. В,полученном растворе рН доводят до нейтральных значений, затем смещают концентрацию водородных ионов до

3,3. После 20 мин выдержки рН среды доводят до нейтральных значений. Обработанный таким образом раствор фильтруют для осветления и отделения следов глобулипов, стерилизуют фильтрацией и стерильно разливают по флаконам.

1. Способ получения сывороточного альбумина из белковых растворов, содержащих альбумин, путем разделения смеси белков этиловы м спиртом, о т л и ч а ю:шийся тем, что, с целью повышения степени очистки прспарата, этиловый спирт добавляют к белковому раствору до концентрации 18 — 35 об. о/о, одновременно добавляют соль жирной кислоты, например каприлат натрия, в количестве

0,1 — 0,6 "/е ири 0 — 30 С и рН 2,0 — 5,0, выпавший осадок отделяют центрифугироваиием, извлекают альбумии из осадка и центрифугата, концентрируют и отделяют от спирта известными приемами.

2. Способ 1110 п. 1, отл II ч а ющий с я тем, что, с целью стабилизации целевого продукта, после удаления спирта снижают рН до

3,3 и вновь повышают до 7,0.