Способ выявления сосудов гемоциркуляторного русла

 

ОПЙ(:АНИЕ

<11767611

Союз Советских

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное и авт. свид-ву (22) Заявлено 221178 (21) 2687494/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 30.0980. Бюллетень № (51)М. Кд.

G 01 N 1/28

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (3) ПЖ 615.475 (088.8) Дата опубликования описания 300980 (72) Автор изобретения

Н.А. Колесова

Киевский медицинский институт им. A.A. Богомольца (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ СОСУДОВ ГЕМОЦИРКУЛЯТОРНОГО

РУСЛК конечная концентрация

0-4 М

8,0 10 М

3,6- 10 М

1,7. 10 М

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для морфо-функционального изучения гемато-гистиоцитарных барьеров и 5 транскапиллярного обмена органов и тканей в физиологических условиях, а также для морфологической диагностики препатологических и патологических процессов различного генеза, 1(» связанных с изменением обмена, структуры и функции гемомикроциркуляторного русла.

Известен способ выявления сосудов гемоциркуляторного русла путем приготовления срезов в криостате с а последующим определением активности аденозинтрифосфатаэы.

Однако известный способ не обес- 2() печивает высокой точности.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Эта цель. достигается тем, что после определения активности адено- 25 зинтрифосфатазы производят окрашивание срезов пикрофуксином в течение от 4 до 7 мин и по структуре баэальных мембран определяют сосуды гемоциркуляторного русла.

Способ осуществляют следующим образом.

Иэ исследуемого кусочка ткани (биопсийный, экспериментальный или секционный материал) без предвари,тельной фиксации в криостате или на замораживающем микротоме изготавливают серийные срезы толщиной 10 мк и монтируют их на чистые обезжиренные и)предварительно охлажденные предметные стекла. Срезы подсушивают на воздухе при комнатной температуре в течение 8-10 мин.

Инкубацию срезов проводят в термостате при 37 С в течение 45-60 мин в инкубационной среде следующего состава:

20 мл 125 мгВ АТФ (двунатриевая соль)

20 мп 0,2 М трис-НС1 буфера рН 7,2

3 мл 2Ъ раствора

Ро(н0З4

5 мл 0,1 М раствора

М9504

2 мл дистиллированной воды

767611

Составитель С.Малютина

Редактор Г.Прусова техред ж. кастелевич корректор м.демчйк

Заказ 7184/39 Тираж 1019 Подписное

ВНИИПИ государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Тщательно промывают в дистиллированной воде. Затем обрабатывают 1%ййм водным раствором желтого сульфида аммония .в течение 1 мин. Споласкивают в дистиллированной воде. Фиксируют срезы в 10%-ном растворе нейтрального формалина в течение 5-10

Мин. После этого промывают в дистиллированной воде в течение 1-2 мин.

Обрабатывают пикрофуксином следующего состава: 10 частей насыщенного на холоде водного раствора пикриновой кислоты и 1 часть 1%-ного водного раствора кислого фуксина — в течение

4-7 мин. Быстро обезвоживают в 96 -нсм сйирте, просветляют в ксилоле и заключают в канадский бальзам.

Эндотелнй сосудов гемомикроциркуляторного русла приобретает разлнчнйе оттенки коричневого цвета в за-, висимости от количества конечного продукта реакции, т.е. от активности аденозинтрифосфатазы; базальные мем; брайы"cocygos и волокна соединительной ткани воспринимают красные тона, а при нарушении химизма коллагена— различные переходные оттенки от красного, через оранжевый к желтым тонам.

" Параллельйо выявляется активность аденозинтрифосфатазы перицитов и кле точных элементов периваскулярйой" соединительной ткани.

Результаты гистохимической реак Ции дценивают количественно либо цитоснектрофотометрически, либо путем вычисления гистохимического показателя. Наряду с этим, определяют толщи ну баэальной мембраны одним из адекватнйх для данного исследования морфометрических методов и ее химизм, а также состояние волокнистого компонента периваскулярной среды обмена (по количественной характеристике коллагенообразования и качественным свойствам коллагена).

Применение предлагаемого способа

;позволяет реально оценить существующие s ткани сосудисто-тканевые взаимоотношения и состояние транскапил19 лярного обмена за счет получения но вого эффекта — одновременного опре.!деления энергетического обмена в эндоТелии и перителии микрососудов, а также информации о структуре и химизме базальной мембраны и периваскулярной среды обмена. Предлагаемый способ, помимо значительной информативности, отличается большой экономией времени, позволяющей применять его для срочного морфологического исследования и диагностики препатологических и патологических процессов, связанных с нарушением транскапиллярного обмена.

Формула изобретения

Способ выявления сосудов гемоциркуляторного русла путем приготовления срезов в криостате с последующим определением активности аденозинтрифосфатазы, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, после определения активности. аденозинтрифосфатазы производят окрашивание срезов пикрофуксином в течение от 4 до 7 мин и по структуре баэальных мембран определяют сосуды гемоциркуляторного русла.