Способ получения препарата "трансфер-фактора
н :что;я т" ";- а
Союз Соаетскик
Социалистических
Республик
ОПИСАЙИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ (u>787033
К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТИЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22).Заявлено 20. 02. 79 (21) 2727051/28-13 (51) М. КЛ.
А 61 К 35/16 с присоединением заявки Нов (23) Приоритет—
Государственный комитет
СССР по делам изобретений н открытий
Опубликовано 151?.80. Бюллетень Йо 46
Дата опубликования описания 151280 (53) УДК 578.085.1 (088. 8) (72) Авторы изобретения
A.Н.Мац, Н.П.Перепечкина,О.В.Протасова и М.А.Гладус
Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ
ПРЕПАРАТА "ТРАНСФЕР-ФАКТОРА"
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано при получении иммунологических стимуляторов.
В современной терапии иммунодефи- 5 цитных состояний, аллергических и аутоиммунных заболеваний, а также при лечении хронических инфекций и в онкологической практике в качестве вспомогательного средства применя- tO ются низкомолекулярные (ниже 3000010000 дальтон) компонены лимфоцитарных лизатов, называемые препарат. ми
"трансфер-фактора" (фактора, переносящего реципиенту клеточный имму ни- 15 тет от донора лимфоцитов). Подобный препарат может быть использован с диагностическими целями и в экспериментальной эммунологии.
Известны способы получения препарата "трансфер-фактора" из лимфоцитов донорской крови, лимфоидных органов, например миндалин, из которых тем или иным способом (эаморажи- 2S вание и оттаивание, фенольная экстракция, экстракция детергентами) готовят экстракт или лизат. Полученные лизаты или экстракты подвергают диалиэу или ультрафильтрации для выде- 30 ления низкомолекулярной фракции, которую затем лиофилизируют 11).
Известен также способ полученйя препарата "трансфер-фактора" для индукции клеточного иммунитета:препарат зкстрагируют с помоиью тритона Х-100 из культивированных лимфоцитов, разрушенных замораживанием и оттаиванием, затем вьщеляют низкомолекулярную фракцию экстракта с помощью ультрафильтрации на полых волокнах ХМ-50, PM-10 и М-2 (Амикон, США) и лиофилизируют f21.
Однако указанный способ предусматривает в качестве исходного сырья только лимфоциты, источники которых могут быть ограничены. Кроме того, применение детергента (тритона Х-100) для оптимизации условий зкстракции не обеспечивает получения препарата без привнесенных примесей: в конечном продукте остается тритон
Х-100, обладаиший побочной биологической активностью, поскольку способ не предполагает условий для его удаления.
Цель изобретения — расширение сырьевой базы для получения препарата.
Поставленная цель достигается тем, что в предлагаемом способе полу787031
7 0 .
Стафилокок- Иакрофаги ковый анти- морской фагин свинки
Из лимфоцитов миндалин, полученный по известному способу
Перитонеальные клетки морской свинки
76i (отличие не досто- верно) Из плазмы по предлагаемому способу
Те же
Тот же
Тот же у)
;Прединкубация, препаратом "трансфер-фактора " in vitro
90 мин при комнатной температуре.
+>)
Миграция из капилляров в течение 18 ч культивирования.
Т а б л и ц а 2
PPD Стабилиэитуберку- рованные лина эритроциты
Клетки крови туберкулиннегативного донора
Из лимфоци тов миндалин по известному способу
Тот же Те же
16 (отличие не достоверно) Те же
Иэ плазмы по предлагаемому способу )Прединкубация, как в опыте, представленном в табл.1
" ) Оценка реакции с помощью цитоферометра (Оптон). чения препарата "трансфер-фактора" в качестве биологического материала используют.плазму донорской крови, экстракцию проводят этанолом при конечнсй концентрации его 3,0-3,5В и насыщении раствора двуокисью углерода, а в качестве газа, создающего давление при ультрафильтрации, использукт двуокись углерода при раба чем движении его 0,15-0,20 МПа.
Пример . После обычной подготовки к ультрафильтрации (центрифугирования и фильтрации через мембранный фильтр Владипор МФА-0„55) 482,5 см плазмы донорской крови помещают в ячейку для ультрафильтрации. При постоянном перемешивании без вспенивания прибавляют 17;5 см этанола (96 ). Воздух иэ ячейки вытесняют с помощью сжатой углекислоты, после герметизации ультрафильтрационной системы устанавливают рабочее давление углекислоты 0,2 МПа. Ультрафильтрацию ведут в течение 4 ч (мембрана Владипор УЛМ-150, рабочая площадь
150 см"). Содержащийся в фильтрате активный продукт разливают по 2 см в ампулы и лиофилизируют.
Тестирование полученного препарата проводят по измерению его цитоиммобилиэующей активности.
Результаты реакции торможения активной миграции макрофагов морскбй свинки представлены в табл.1, а иэ15 менение электрофоретической подвижности индикаторных клеток — в табл.2.
Таблица 1
787031
Составитель О.Домнышева
Редактор Т.Веселова Техред Н.Граб Корректор Н.Швыдкая
Заказ 8215/4 Тираж 673 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Ю
Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул. Проектная,4
Как видно иэ приведенных результатов тестирования, препарат "трансфер-фактора", полученный по предлагаемому способу, сообщает лимфоцитам нормальной морской свинки и туберкулин-негативного донора способность выделять лимфокины в ответ на антиген (антифагин — в реакции торможения миграции макрофагов морской свинки и РРΠ— в реакции замедления электрофоретической подвижности индикаторных клеток).
Использование предлагаемого способа получения препарата "трансферфактора" позволяет привлечь дополнительный источник сырья, свободный от микробной контаминации (например, по сравнению с лимфоцитами миндалин).
Препарат "трансфер-фактора" может быть добавочным продуктом при производстве донорского гамма-глобулина и антилимфоцитарного глобулина.
Формула изобретения
Способ получения препарата "трансфер-фактора" путем зкстракции биоло/ гического материала с последующей ультрафильтрацией экстракта под давлением газов, о т л и ч а ю щ и и — . с я тем, что, с целью расширения сырьевой базы, в качестве биологического материала используют плазму донорской крови, экстракцию проводят этанолом при конечной концентрации его 3,0-3,53 и насыщении раствора двуокисью углерода, а в качестве газа, создающего давление при ультрафильтрации используют двуокись углерода при рабочем далвении его
0,15-0,20 МПа.
Источники информации, 3Я принятые во внимание при экспертизе
1. Лоуренс Х. и Эль-Аскари С. Приготовление и очистка фактора переноса. Методы изучения in vitro клеточного иммунитета. М., 1974, с.256.-272.
2. Патент Великобритании
Р 1443948, кл. А 61 К 45/00, 20.10.1972.
