Способ получения -замещенных произ-водных блеомицина
<1797584
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
Союз Советскит
Социалистическик
Республик (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 27. 04 ° 72 (2т) 1779025/23-04 (23) Приоритет — (32) 28. 04. 71 (33) 27553/7.1 (33) Япония
Опубликовано 1 501.8 1„Бюллетень Мо 2
Дата опубликования описания 17.01,81 (я)м. кл.
С 07 Н 15/26//
А 61 К 31/70
Государственный комитет
СССР но.делам изобретений и открытий (53) УДК 547. 07 (088.8) Иностранцы
Хамао Имезава, Юя Иакаяма, Камору Кунисима и ДЩ До @ ацубара (Япония) (72) Авторы изобретен и я
Иностранная фирма
"Ниппон Каяку Кабусики Кайся" (Япония) (73) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ й-ЗАИЕЩЕННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ
БЛЕОМИЦИНА
1 н нн, с .. О сн, с
Си о си ит
3. - Х
HO-hit ОК О Н Й. га de,он
1 он
ы бн ! а С-мн
Изобретение относится к способу получения новых й-замещенных производных блеомицина, обладающих ценными фармакологическими свойствами.
Цель изобретения — получение новых полезных соединений, расширяющих арсенал средств воздействия на живой организм.
Цель достигается путем синтеза указанных соединений, основанного на известной реакции нуклеофильного замещения аминов 1).
Предлагается способ получения Й-замещенных производных блеомицина. общей формулы 1
797 .>84
-CooO"
10 — Qo-"
1н мн(Сн,) вн(н,)„вт н о б-ваа оо (Сн1)„
Н,С-d-Co о
Сн1-Со
60 соединения формулы
l к — Со — H где Q — группа формулы -COR, где
R — водород, C„ -C„„ — алкил, галоидзамещенный С -С -алкил, кро оноил, фенил, п-нитрофенил, бензил, п-нитробенэил, феноксиметил, цианамил, нафтил, никотиноил, иэоникотийоил, фурил или тиенил, группа формулы
-CO-(СН )п„ -СООН, где и„ = 2-7;
"Я
1 — Со- Сн — С вЂ” ооон, где R —; -СН-СН -СН(СН1)-СООН или -СО-СН -С(=СН )-СООН;
-в, где R -С -С4 -алкил, аллил, бензил или п-нитробенэил; группа формулы
-SО R, где R -С -С -алкил; группа формулы где Z. — водород, метил, атом хлора или нитрогруппа или нафтил; группа формулы - CONHR, где R"--CÄ -С4 -алкил, циклогексил, фенил, п-толил или наф.тил, группа формулы — С вЂ” К
5 с реагентом, выбранным иэ группы, содержащей соединения формулы R-,Y, где R имеет значения, приведенные выше;
Y — карбоксил, группа галоидангидрида; группа сложного. эфира, группа формул -СО-О-COR или -CON ; соединения формулы где n — 2-7, соединения формулы
eH — Со о, Сн -Со где R — водород, С, -CII-алкил, группа формулы -(СН ). NZ 21, где 2 и 2 водород или метил, группа формулы ч где Z+ — водород, метил, нитрогруппа или метоксигруппа, группа формулы где 24 — атом водорода или хлора или нитрогруппа, стирил или нафтилметил, группа формулы
Соон где R — водород или нитрогруппа, 6 эаключающиися в том,что проводят реакцию 3-(4-аминобутил) -аминопропиламиноблеомицина общей формулы II где R имеет значения, приведенные выше, соединения формулы р — С вЂ” CO
If о, 55
Сн-Со- где R имеет значения, приведенные выл ше, соединения формулы
797584
R.— С- OR
6 ч
ЯН
Таблица 1
Модель Реагент, взаимодействующий Продукт с В И-21Н
BLk""Nk-C0-R
То же
R""C00k
R-СОХ
R-СООТГ
Ib
R-СОН
R — Со о
3 — СО
R СΠ— 14
R— - Со о
R 0-СО
Вiм — - C-(Cx ) -dooH
СН-Со о
СН- СО
lk к — С вЂ” Со
0
Сн-Со
C00Í где R имеет значения,,приведенные внае соединения формулы R -Х, где R имеет значения,приведенные выше, Х вЂ” атом галогена.
Ъ
Ъ соединения формулы R 0 -Х
Ф где к и Х имеют значения, приведенные выше, соединения формулы R"-йсо, где R4 имеет значения, приведенные выше, соединения формулы
3Ф где R имеет значения, приведенные 35 вьиае, со (СН2) „0
СО
К1 !
Сн — Co
О
CHt СО
СН2=С вЂ” СО ! о
Сн2-Со
12 -С, -С -алкил; или соединения формулы где R — водород или нитрогруппа, в количестве 1-10 молей упомянутого реагента на 1 моль блеомицина при
10-65оС,в присутствии растворителя.
Пример реакции получения N-замеценных производных бле мнцина АВ в соответствии с изобретением может быть представлен, как показано в табл. 1.
ЗЬМ- МН- С- CM2 — СН-СООН
li
0 В
В! М вЂ” НН вЂ” O— - СН2-бк — C«H .
1!
О Й
Bi M- NH- N-сн=сн — С О он.
И
З1.м-ян-C- Сн- С вЂ” Соон
1! 11
0 3 6
Вьм — NH — CO
Продолжение табл. 1
Продукт
R -Х
R --5О Х
R "NCO
BLED †NH-R 1
В И-NH-SO -R
Ъ 2
Вьм-ин- б-мн-R
lI о
Я вЂ” 1 — OE
5 б
ЯН
BLM — NH- С вЂ” R
П
МН
Модель Реагент, вза модействующий с В М-Нн
В приведенных формулах BLM означает остаток блеомицина без его конечной боковой аминогруппы, R -R 26
7 имеют приведенные значения, R низший алкил, замещенный или незамещенный фенил.
Представлены также реагенты (представители реагентов) за исключением д случаев, когда R соответствует формуле R-Y.
Из приведенных моделей реакция 1а представляет способ .непосредственного N -ацилирования блеомицина А карбоновой кислотой в присутствии карбодиимида. Модели Ib-1g представляют способы И-ацилирования блеомицина А> галоидангидридом кислоты, эфиром карбоновой кислоты, азидом карбоновой кислоты, ангидридом карбоновой кислоты, ацилимидазолом и смешанным ангидридом, получаемым реакцией алкоксигалогенформиата с карбоновой кислотой. Модели 1h-11 представляют способы N-ацилирования блеомицина 40
А интрамолекулярным (внутренним) айгидридом двухосновной кислоты.
Представителями соединений, ко торые,можно испольэо!ать в качестве реагентов в соответствии с изобре- фЯ тением, являются: муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, масляная кислота, валерьяновая кислота, каприловая кислота, лауриновая кислота, кротоновая кис- $Q лота, бензойная кислота, фенилуксусная кислота, 2-нафтойная кислота, п-нитробензойная кислота, ацетилхлорид, пропионилхлорид, хлорацетилхло.рид, хлорпропионилхлорид, бромацетилхлорид, бензоилхлорид, п-нитробензоилхлорид, фенилацетилхлорид, феноксиацетилхлорид, этилциннамат, этилкаприлат, бензоилазид, азид пропионовой кислоты, азид масляной кислоты, уксусный ангидрид, пропионовый ангид- d0 рид, ангидрид масляной кислоты, ангидрид октановой кислоты, ангидрид лауриновой кислоты, кротоновый ангидрид, фенилуксусный ангидрид,.феноксиуксусный ангидрид, бензойный ангид- Я рид, ангидрид и-нитробензойной кислоты, ангидрид никотиновой кислоты, ангидрид иэоникотиновой кислоты, ангидрид фуранкарбоновой кислоты, ангидрид тиеновой кислоты, ацетилимндаэол, ангид лд янтарной кислоты, малеиновый ангидрид, метилянтарный ангидрид, итаконовый ангидрид, цитаконовый ангидрид, глутаровый ангидрид, адипиновый ангидрид, пимелиновый ангидрид, ангидрид пробковой кислоты, аэелаиновый ангидрид, фталевый ангидрид, 3-нитрофталевый ангидрид, метилхлорид, метилиодид, этилбромид, бутилбромид, аллилбромид, 1-нитробензилхлорид, бензилбромид, н-ннтробензилбромид, метилсульфонилхлорид, этилсульфонилхлорид, бензолсульфонилхлорид, п-толуолсульфонилхлорид, п-хлорбензолсульфонилхлорид, п-нитробензолсульфонилхлорид, р -нафталиносульфонилхлорид, бутилизоцианат, этилиэоцианат, фенилизоцианат, циклогексилизоцианат, п-метилфенилизоцианат о -нафтилизоцианат, Р -нафтилизоциайат, гидрохлорид этилформиата, гидрохлорид метилацетамида, гидрохлорид метилпропионимида, гидрохлорид метилизобутироимида, гидрохлорид метилвалероимида, гидрохлорид метилпеларгонимида, гидрохлорид метилового эфира З-метиламинопропионимида, гидрохлорид метилового эфира 3-диметиламннопропионимида, гидрохлорид метилбензнмидата, гидрохлорид нафтилового эфира)Ь -метоксибензимида, гидрохлорид метилового эфира п-толуимида, гидрохлорид метилового эфира м-нитробензимида, гидрохлорид метилового эфира п-нитробензимида, гидрохлорид метилового эфира фенилацетамида, гидрохлорид метилового .эфира м-толуимида, гидрохлорид метилового эфира п-толуимида, гидрохлорид метилового эфира и-хлорфенилацетамида„ гидрохлорид метилового эфира имида коричной кислоты., гидрохлорид метилового эфира 0 -нафтилацетимида.
Предложенный способ осуществляют в среде растворителя, выбираемого
797584 из группы, включающей воду, спирт, например метанол и этанол, кетон, например ацетон, н их смеси. Растворитель подбирают в соответствии с применяемым реагентом.
При использовании в качестве реа- гента алкилгалогенидов, например этилиодида, ацилгалогенида, алкилсульфонилгалогенида, реакция протекает быстро и загрузка избытка компонента приводит не только к целевому монозамещению аминогруппы в боковой . © концевой цепи блеомицина Ag, ио также к замещению внутрикольцевой аминогруппы и к дизамещению (введению двух заместителей) у концевой аминогруппы боковой цепи (или аминогруппы в кон- 35 цевой боковой цепи) . Поэтому целесообразно вводить эти компоненты в соотношении 1-1,5 моля на 1 моль блеомицина А5. Однако менее реакционноспособных реагентов, не вызывающих р побочных реакций, можно вводить в количество до 10 молей на 1 моль блеомицина.
Реакцию, осуществляемую в соответствии с изобретением, можно рассматривать как реакцию нуклеофнльного замещения концевой амнногруппы блеомицина А5 и ее целесообразно осуществлять в щелочной среде. Для этой цели можно употреблять пиридин, бикарбонат. натрия, триэтнламин и т.п;
При употреблении в качестве реагента имидатов реакцию целесообразно вести при рН 8,5-9,5 путем добавления более сильного основания - триэтиламина. Следует, однако, избегать продолжительной реакции при рН 10 или выае, учитывая стабильность блеомицина й5.
Высокомолекулярные замещенные производные, например лауроилблеомицин
А5, слабо растворимы в воде. Поэтому в таких случаях реакционную жидкость (массу, смесь) следует подвергнуть очистке путем хроматографии, применяя фильтрацию через гель органического растворителя, например, через сефадекс Е-й-20, процесс обессоливания при этом необязателен.
В табл.. 2 приводятся данные о свойствах получаемых предлагаемым способом гидрохлоридов й-замещенных производных блеомицина Ar
12
1 с с а г-!
C) (М
OQ с о 3
1 о
СО
Ю о
О1 гс о
О) 7 (4:1
C) (-1
\Р (с4 (О о о (4
an (ч
Я с
«о о (Ч
Ю С 4
lg i
-о о— н ф (с4
Ц) со
Q -1
СО СЧ
\ф с
° о о м м (ч с
-о о т-4
О (с4 ! о о (-4 (с4 (с4
ЧР
-о о—
М (4 сУ CIa (4 С 4
М (с4 с3 О (СЧ СЧ х
cS о (-1 и к т !
D х юс
1 у о о
u u х:Г
u u о
\D х мй
° Т с 4 х
О х т ((1 с4
Х и х л
1 х
X о
Э ! (О
3 к х о
Х (4Ъ о<
С4
r! х
I и
z о
О
u u х У с4
u u
Г
С( х и х и (41 с4
X (1
Х
ЛК
1!
Е о
1 аА
44 ((44! Х
I Ж
z о
/ о о
u u х (((С (Э о д
D Z х О
«Т е4 х (> х
1 х
X о
Э
Ц
1: х о ох ! Ж
z 1 о
/ о о
u u, с,Q (сч х х и и
Ф ((a х х.
u u
«Ф с4
О (а х
ХО х (С 1
1! с4х
О ио (1 хк
z z! I
1 х
Е о
Э
Ц
О
1 х о
К1 о<
0 х х
I Х лг М о! о о
u u
u u х х
u u
1 х
Ю сто
Х CD
О с4 х
2 ,о х (1 с4 х
О О
О
sr я т
I 1
1 х
Е о
Э
Ц
Ю
Ц х ,Г) с
» и х
I Х
z Л о о
u u
1 с4 с4 х х
u — с) «7 с4 Х
z ю ио
Т
Z О,(; I l х
С4 (-1
X 1
ОО
z x
z z
I 1
1 ж
Е о
Е х
I Х
2- «1 о о
u u х х
u== u
Е
Ч.Э О
I4 (( н
ТЭ !
Ф
Ю т
Х
I
I х
1-»
Э (О д, (I! х х о х
Г о х х
Э О
Э
1 Ц
;г IO о о
797584
1 »
Ю с о
ГЧ
Ol с,о
П3
ch 1 с
CD м
I с о
1. с о
Ю
Ю
° Ф
\ ь
aD
Г»
Ю м ао СЧ
Я с
-о о
%-1 о сч с с Ю
Ю м
° Ф 1Ч
1» о о м
6\ (Ч
Я
-о о
an
N СЧ
Я с сО о
° Ф с-1 (Ч
-о о— -4
an сч аО о о м
Ю СЧ
Ю
-Ю
Ю» о я а Ch (Ч (Ч
СО СЧ Ф Ch
СЧ СЧ
an N м оа
П) N
Г- Ю с1 CO (Ч (Ч е о
Ж
113 Р
Ki
lI1l
l о
I
Ц
Ц
Ф aII
Ее М, 3 х (н
1.К
z aD
ID о< х х
Ф х
О d о х
А Е но х Ф
Ж 1 ! lD
1 I
1 х
Ц х о х р н о х х х
g N х х
oz я о
Ж Ф
I Ц
z aD
1 х
2 о
CI1
lD
Ц х о х Q
Ф м х
I Х
z 5
Е о
Ц х
1 р
6 х
1 Х
z f (1 /3 о о
Ю cl о о
-1Ф 1 U О фО а«а
ФЪ
° а р
-Р
Ж
I ! l з е4 о о.
014 ж ф Ф !
Е о
Цс х5!
1 ф м Ю
Й ю С.Э юм
-с1 О. кт р
au о В хо В
И а ю» а 1
p1 еО
Ф р
lD 1
Ц
« х ц (ч Ж . х е .ОХ 1Х сч х
Х «1
Й х!
Ж
Д р
Ж Ж М
Р
I м
0 Э О о у (о р
Ч>.
Х
Д
М !
797584
1Е
° "4
C3l
\ ь
Р 3
03
Ю!
C3l
Ю
СЧ
О\
Ю! !
Ul ! с
Ю
Ch с
М
ВЬ ь
3Ч
Р3 СЧ
Я
Ю г
3Ч
М 3Ч
Р )
-Ю
Г
О3
О1 т-3 39 ъ с С,>
3Ч
3Ч .М
С3 (Ч
333 3Ч с
-Ю
СЧ
О1 (Ч
3 ) Ю оО1
Р3 с-3
Я с
-Ю о
3Ч
МР ГЧ (93
-Ю
o— 3
СЧ
М
-Ю
Ю!. (Ч о
РЪ 3Ч Р 3 3Ч Р 3 П) . 0 3 (Ч c3 Ch с3 Ch сФ 331 сй Ch
<Ч (Ч 3Ч Р1 3Ч <Ч 3Ч 3Ч
i!3 Ф 3 ct 00
3Ч 3Ч
3А 3Ч
Ю С33
3Ч 3Ч
l !
33Ъ Г
Ж
33
Ж Ж ф ч и х
М В
1 I
1 Ж чэ=М
Х
Д
II
Р ill е °
1 .Ф М о
В ч
Ю
Х
О о, Ж
433 ф
ЪЭ ф Я д .3 Р
Р.
Ф
В
Ф4 о о
1 ISl о<
Е
33I Х
3О Ж о и
333 Х
3 во е 1
z g! о
Э
Х И
O 3!3
4 Ц ож
3:О х3х
С ЗО и
0d и3 1
I l.
Ц 3
Ц Ж
g Я
Н
3!3 Ж
И X
<о
1 и 3 )
I о цх
g 1
И I
Ц
X Х s/
Х
Х
О К
Р
О
Д !! к ж
М
Х о ж о 3 хо
333 л 3
Ю 3О о
Ь 3
1 О а
3" ч ф7 Ф
С3 ж
Х О т ! е4 рЦ 34Ъ
Д
Ж У3
Я ) ф
Х е4
-О Я
Х1
4 7
l о" ,% Ж о z ао
333 Э
5 30 !
33I I
\ лс g о Э
С3 е р
Щ
g Ц
1 Ж ае хм
333 3О 333 Й1 х
3!3 3 : 9 5
333 О
Ж Ж 311 ох
x QQ xf
Х
Х
Р
С7
20
CO с
CO
СО с
Ю!
Ch с
О\
ОО
)с
CO с
1
Ch с
Ю ч-(О1 с
СО
О\ с
CO (Ч ч-С
° ф с сЮ
СЧ
В СЧ
° фю с
Ю
С«)
РЪ СЧ тф с
-Ю
Ю—
СЧ
ГЧ СЧ с, ф сЮ
Р4
СЧ с
О
СЧ с"< ГЧ
Р ) -Ю
Ю—
СЧ
СЧ СЧ
С«)
Ю
СЧ
Ю СЧ
«ф с
-Ю
О ) lA
СЧ N :3 О\
СЧ СЧ аА
РЪ СЧ Ф Ch
<Ч f4
CO СЧ tl Ch
СЧ СЧ
A CO Ч Со
СЧ СЧ
ЧР Yl сй СО
СЧ СЧ!
Э
1 ! 10
М 1 о
Х Ц ох
I Ois
I ух
И х х
N Е
v,î о э н
I О
1:
Z Я
СС о< х х
И х
Ж 5 ох
Е Е е о х э х Ц
Х О
1 Ц
z x
СС«
I оэо Э
Хп38
1 О д х (1 Э 4
z 6 х аОО м 1
A 4
ЮФ =@i О.о Ф 4
Ж
Ю 3 Х
I й
Ф о ф И
° СС
Ж Ж о
, Ж
Ю, ф
С7
=у и
Ц
4 j о ф 5
Ж
Ж
Х
С«б т> Х C7 М
Д
Д
Х 1
1
Ц о в
XK х
1 Х оы
ЕС М
Ко
1 Ц
Z О
797584! о м
Ф Ж р В
Ж I
М
Ф
Я ж5и уо<
-iI* ж 5
Щ О I
«с с«4
Х
О
1 Х
Ж
3 В
1
«5 о б Э
Ц 1:, З ! о.
Z 1:(м а«
СД
Qw. g
Х В ф
1 о
М
О
Ж д м
Ж
С
Х вЂ” + A
Ж 2 м
1
1 О
Э
Ц Ц
3 1 я х
& 5 л х х< х у
1 Х Х
Э И
1 И Ж и Э
Ю х
EV
1 U
%Э ф
С С
3СЪ
О4
-О=. 11
Х Х
3 д
21
797534
22! !
О
1О с о
01 с о! с! О\
ОО I» с с с е о о сй
CO
LA
-о о (с! ct СЧ
Л о о—
ln Ю
О\ Сс4 о
-о
o с:3
<с! Сс!
О
-о о о (O РЪ
Ф
-о о
l ж
Й(! X х х
X х х хои
I XO
ФИ Э
roe х оо
3=(И.! ! о х 5» ! xo
zrd Ц
1 Е Ю!
: : х х
I OX
Э х «5
2z 2 х х !.о
Э Ф! Ы Ц! Лс (бО м
О
ЖЩ
М .сэ Ф
1 !!. Ф юЬд
У
/X
Г Я р V
Ж
Д Е я I tJ A — 1 В
Х
Д
Ж
Фъ
Х 7 .! Х
Я а
Л!.
Дг ф!
34Ъ
Нф
ЯИХ Ю -(Ю
Ж . Ж
1 1 ! Ц
С Ъ ! I
I 8 Сс 8 Х . ц х !: 3. о
IO I Oue цхо,õо4 ххххххххо
Н М Х Х I Z Х О
Ф4 Фэ Ех (/X
6 м
Ф 4 у 2 къ о A
С4 Ч„) () о
И но!:
Фслх
М !» ! ops х и !
Э с Я
dP Ф о О, о
8 х н
Э Х
Н Э
Ф
° Я е о
Ф х
1 &<
Ф Д е ( х о !
:4 !!! г о о! х х м о и о о
Ф 3 III
Д III X х а3 х 1 я Р х
Э а Е н о
О жЭ х х Й
o ° хо
М с -! Х д
Д » 3! !
:о о
4о38
ы!о х х о, х м и
g !II Ц хgto оо аа ! !!! f» (ч х к ос
ЭФхо
9О 4 Ф !
6+$4 охи В эхx!o
g(oo
X III nl 3
Э Н %!!I хйЭ3, оахн !
" .х д о53х ххое хцх оома
Е фОх
ЪС. х
7С
797584
24
Получаемые предложенным способом й-замещенные производные блеомицина А не имеют четкой точки плавления, точки разложения или точки киения. Они растворимы в воде и меаноле, образуют соли с кислотами и хелатные соединения (комплексные) с медью, дают положительную реакцию Паули, Эрлиха, Драгендорфа и с перменганатом, дают отрицательную реакцию Молища, Биурета, Элоон-Моргана, Мальтола, Фелинга, Толленса и на хлорное железо. N-замещенные производ. ные блеомицина А5 обнаруживают в области инфракрасного спектра зону по4 глощения при следующих волнах,см
1040-1075, 1710-1735, 1625-1680 и
2910-2940.
Пример 1. Получение й-хлорацетилблеомицина А6Растворяют 1 г гидрохлорида блеомицина А8 в смеси 13 л воды и 20 мл ацетона. В раствор вносят 520 мг бикарбоната натрия и 330 мг хлорацетилхлорида при помешивании. Смесь оставляют на 1 ч 45 мин. Соляной кислотой доводят рН смеси до 4,5. Ацетон отгоняют под вакуумом. Остаток разбавляют водой и пропускают через колонку с суспензией 110 мл CM-сефадекса
С-25 в 0,02 М водном растворе хлористого аьеюния для адсорбции целевого продукта. Адсорбировавшийся продукт элвируют последовательно 230 мл 0,1 М водного раствора хлористого аммония и 580 м 0,2 М водного раствора хлористого аммония. Собирают фракции с целевым продуктом и обессоливают при помощи амберлита СС-50. Элюат упаривают досуха и получают 439,6 мг й-хлорацетилблеомицина А . Выход
41,7%.
Аналогично из п-нитробенэоилхлорида полуючат й-(п-нитробензоил)-блеомицин А5.
Пример 2. Получение й-октаиоилблеомицина А6.
Растворяют 100 мг блеомицина А в смеси 2 мл этанола и 0,5 мл воды.
В раствор вносят 50 мг этилкаприлата и смесь выдерживают 16 ч при 37 С.
По завершении реакции растворитель отгоняют под вакуумом. В остаток приливают 10 мл воды. Смесь экстрагируют 10 мл эфира. Водный слой пропускают через колонку с суспензией
2ф мл CM-сефадекса С-25 в 0,02 М вводном растворе хлористого аммония с целью адсорбции целевого продукта.
Адсорбировавшийся продукт элюируют последовательно 120 мл 0,1 М водного раствора хлористого аммония и 44 мп
0,3 М водного раствора хлористого аммония.
Собирают фракции, содержащие целевой продукт, и обессоливают амберлитом СС-50. Элюат упаривают досуха, получают 28,2 мг N-октаноилблеомицина А5. Выход 5,5%.
Пример 3. Получение N-пропионилблеомицина Ar.
Растворяют 100 мг блеомицина Ag ,в смеси 2 мл ацетона и 0,5 мл воды.
В раствор вносят 1 мл ацетонового раствора, содержащего 10 мг азида пропионовой кислоты, полученного из гидразида пропионовой кислоты. Смесь оставляют на 26 ч. По завершении реакции ацетон отгоняют.под вакуумом.
В остаток приливают 10 мл воды. Смесь пропускают через колонку с суспензией 20 мл СМ-сефадекса С-25 в
0,02 M водном растворе хлористого амЩ мония для адсорбции целевого продукта. Адсорбировавшийся продукт элюируют последовательно 0,1 M водным раствором хлористого аммония и 0,2 М водным раствором хлористого аммония. Со- . бирают фракции, содержащие целевой продукт, и обессоливают амберлитом.
Полученный элюат упаривают досуха и получают 21,4 мг N-пропионилблео-. мицина А5. Выход 20,6%.
Пример 4. Получение й-ацетилблеомицина А5.
Растворяют 1 г гидрохлорида блеомицина А5 в 50 мл метанола. В раствор вносят 0,78 мл пиридина и 0,58 мл уксусного ангидрида при помешивании;
Смесь оставляют на 5 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь упаривают под вакуумом. Концентрат растворяют в небольшом количестве воф) ды. Раствор пропускают через колонку с суспензией 110 мл СМ-сефадекса
С-25 в 0,02 М водном растворе хлористого аммония для адсорбции целевого продукта. Голубую полосу поглощения (содержащую целевой продукт) элюируют
0,2 М водным раствором хлористого аммония. Собирают фракции элюата, содержащие целевой продукт, и пропускают через колонку с 70 мл суспензии активированиого угля в воде для ад® сорбции целевого продукта. Адсорбировавшийся продукт промывают водой и элюируют системой ацетон — 0,02 н. соляная кислота (1:1) по объему.Элюат упаривают досуха и получают
55 552,3 мг гидрохлорида N-ацетипблеомицина Ag. Выход 53,6%.
Аналогично получают соединения, приведенные в табл. 3.
797584
25 м с
an м t«t
СОс аГЪ с
1Л ое
1с с Ф
Г Ъ CO с с
I«l ОЪ м «Ф
«« сГ
«-1 an с с
t &
o an
«-1 о
«ф с
- «-1 ю In л б м ch с
« ID
«-«
ОЪ «-! с о ао о
1ъ,б
Г«! с с МЪ
ОО an
«-1 с
r1 ««I с с оо
I ! !ГЪ с с оо! 1 .«1 М «-1 ГЧ «-1 с с с с
ОО ОО О
«-1 ГЧ с ою
1 («1 сУ с с ою
«"! an с с оо
Ю м
C)
ГЧ
Ю м
v о
Г«! М
In аА
Ю
1А с
ГЧ
ГЧ
«-1 с
Ю г«-,1
Ю Р
Г«!
Г 1
« -1
1
«1 с
«-1
«« с
Ю х
ГЧ
1Ю м
«1
«-«
In
«.«
О :1 м
C) Г Ъ
ГЧ м
/X /1
Х"
11 !! O
/X
/X о Э р
3 « т) о о
О о с о о
О а
И Ъ) р О у тЭ
Ж 1
u u
O O
> C3 х
Ю х.о
Х р«« о х о
Ф
Е х о
Е х о
Э
О
С1 м о
ah
ГЧ о о о
Ю
Г«! о ь
Г«!
1 о
Э
1 !
«« х х о !!ъ х с !
» о х ах
1 х
Е о
Э !.", Ц х
ItI
b «4
Ь х ж о о о о
«-« Г«4
«! о, х!а х о<
II!
Е о
g х
) «41. и их ! Ж
g ы
1 . с х
Э ао 0 мх 33 х"
1 ж
3 о
1:, lO
Ц х о х м, Жх
1 Х
Х l
797584
f О Ъ
eel Ю
М ОР
О«
О1 с ГЧ
«n «A
aAЦ ОГ
Ю ГЧ
Юа
ГЧ О"!
«-4
Г
Г
Г сО «
««
ГЧ
Г
«!
«-1
H Ch
Г М м «о
« /
«-1
Ю м
М ГЧ
ГЧ P.
Г «-1 за
rA м
« lQ е н
Ф о ж е эжце аале> н
v>
ЮЮ
«-4 LA
М
ЮЮ
«-1 М с
ЮЮ
1 о
1
«-< м с
ЮЮ
1 Ю
Ю Ю
«-1 М с
ЮЮ
«-1 м
ЮЮ
«-!
К
Ц о
1
1 Х 4 н0ЭЕ
0 0Ц еоеэ
x me o
I ж
3 о
Ф4
Ю м
1 1
М окмц ценжр ! НОЮ
ekz3, о о
О \ О"Ъ с ф
О"\
О1 с м
I о ж
Э Ф
Й Г1! ж оож о.
О 4 о Е
Г
ЕЮ
x an
«
ГЧ
Cl т3
<Ч
Ю м
ГЧ с
1О
Ю
D м
ГЧ
Ю м
1 I 4 жнЕ
К0оэо
Х 1 III
Ю Q О
«
f4
Х Г О Ю
A о в
«.« \4
Х
Ю"
Ю Ю
«-1! I бв о,ж о
1-(о>
« х о
Е х о и х о
Е х о
Е х о е
Е х о
Э
Е х о
Э
I ф
Ю
1«) 4I
III х ж
Ю
Ю
ГЧ
Ю
Ю 4
Ю м
Ю
Ю
«-4
Ю
Ю (Ч
Ю
C)
«-1
Ю
«-«
Ю
Ю
ГЧ
1 I 4 жнЕ
К0 се о
И «Ф
Ц ж ж
Э an
О< о ах н ж ж 5 хж
Е цо е
I 1
1 ж
Е о о о, ьО
>, с
Э
Р ж
1 ж
g u
I ж
Е о
Ц ж о
О an х 4 ж. х ж
I ж д 1
Г:« ж о о ж х ж ж ц
L ж о Е
m o
Ж Э
I Ц у О
1 1 о о е е
Ц Ц 1
1 1 Е
Ц Г о
Э ж ж
3, 11 ж
:лФ, Э C (ч ж ч ж н
- ц « и 8 ж
1 ж 1 ж 1 ж ф
Ц ! : (6 all н е
8 х н ц ж g х Е о
w Э
I р 10 о и
0 ж
Ц о 4
797584
30
Таблица 4
EtOH 4
200 Н О 1,6
N-Аллилблеомицин Аб
СН -СНСН В r 60
E NOH 4
200 Н 0 1,6
Н-Этилблеомицин А5
С Нб Вг
Продолжение табл
М-Аллилблеомнцин А .25 0,1- 70
0,25 (34,0) 1,6
М-Этилблеомицин А
25 0,1- 840,25 (41 5) 30.
Л р и м е р 5. Получение й-бутирилблеомицина А5..
Готовят раствор 100 мг блеомицина
АБ в смеси 3 мл ацетона и 2 мл воды.
В раствор вносят 12 мг гидрохлорнда
1-этил-3-диметиламинопоопилкарбодиимида и 8 мг масляной кислоты. Доводят рН смеси до 4,7 и смесь оставляют на 16 ч. Реакционную смесь упаривают до трети первоначального объема под вакуумом. В концентрат приливают 10 мл воды. Смесь пропускают через колонку с суспензией 20 мл
СМ-сефадекса С-25 в 0,02 М водном растворе хлористого аммония. Адсорбировавшийся продукт элюируют 0,1 M 1З водным раствором хлористого аммония.
Собирают фракции, содержащие целе- вой продукт, и пропускают через колонку с 20 мл амберлита CC-50 (Н-ти-,Щ па) для адсорбции целевого продукта.
Адсорбировавшийся продукт промывают последовательно 100 мл воды, 100 мл
0,5Ъ-ной уксусной кислоты и 100 мл воды и затем элюируют системой ацетон-
0,02 н. соляная кислота (1:1 по объему). Элюат упаривают досуха и получают 32 мг N-бутирилблеомицина А5.
Пример б. Получение N-(п-нитробензнл)-блеомицина А5. г гидрохлорида блеомицина А растворяют в смеси 20 мл воды и 60 мл этанола. В раствор вносят 0,58 мл триэтиламина и 600 мг п-нитробенэилбромида при помешивании. Смесь оставляют на 35 ч при комнатной температуре. Реакционную жидкость упаривают и нерастворившееся вещество отфильтровывают. упаренную жидкость пропускают через колонку с суспензией
150 мл сефадекса С-25 в воде для адсорбции целевого продукта, 35 мл начальных фракций элюата отставляют и 27 мл последней части фракций пропускают через колонку с 50 мл СМ-сефадекса С-25 для адсорбции целевого продукта. Адсорбировавшнйся продукт элюнруют последовательно 0,1 М водным раствором хлористого аммония и 0,25 М водным раствором хлористого аммония.
Собирают фракции элюата с целевым продуктом и обрабатывают активированным углем. Полученный раствор упаривают и получают 120 мл гидрохлорида .Н вЂ” (п-нитробензил)-блеомицина А . Выход 11Ъ.
Аналогично получают соединения, приведенные в табл. 4.
797584
Пример 7. Получение N (ìå тилсульфонил)-блеомицина Ag.
Растворяют 100 мг пидрохлорида блеомицина А5 в смеси 4 мл ацетона и 8 мл дистиллированной воды. Б раствор вносят 160 мг бикарбоната натрия и 104 мг метансульфонилхлорида, по каплям, при помешивании. Смесь оставляют на 19 ч при комнатной температуре.. Реакционную смесь нейтрализуют и пропускают через колонку с
5 мл амберлита IRA 400 (Cl-типа) в дистиллированной воде для адсорбирования целевого продукта. Адсорбировавшийся продукт промывают 100 мл дистиллированной воды. Собирают элюат и промывную жидкость. Смесь пропускают через колонку с суспензией
20 мл сефадекса С-25 в 0,02 M водном
Таблица 5
34 6 н о
200 Ацетон 4
М вЂ” Бе н з олсуль фонилблеомицин Ar н!о 4
„o с1
200 Ацетон 4 НЗ " 81,7
N-(и-Толуолсульфонгл)-блеомицин А5
N-(и-Хлорбензолсульфонил)-блеоА5
200.N-(P-Нафталинсульфонил)-блеомицин А> 200
Н О 3
Ацетон 4
Продолжение табл. 5
30 . 0,1- 27,6
0,2 (12,6) N-БенэОлсульфО нилблеомицин Ag
N-(п-Толуолсульфонил)-блеомицин А
20 0,1- 19,5
0,3 (3,8) 22
75,9 (35,8) 0,1—
0,1
24 (У-Нафталинсуль- 40 фонил)блеомицин А.
М-(п-Хлорбензол4 сульфонил)-блеомицин А5 растворе хлористого аммония. Адсорбировавшийся продукт элюируют последовательно 200 мл 0,1 M водного раствора хлористого аммония и 78 мл
0,2 И водного раствора хлористого аммония. Фракции элюата, содержащие целевой продукт, собирают и пропускают через слой 5 мл амберлита СС-50 (Н-типа). Слой смолы промывают последовательно 25 мл воды, 25 мл о 0,5%-ной уксусной кислоты и 25 мл воды, целевой продукт элюируют системой ацетон — 0,02 н. соляная кислота (1:1 по объему). Элюат упаривают досуха и,получа!!т 16,2 мг гидрохпорида й-(метилсульфонил)-блеомицина
>> А5. В од 15 3З.
Аналогично получают соединения, приведенные в табл. 5. нно 3.5 ei О I!О,нх
Ацетон 4 2 45
F02 1
4,25 50 0,1- 47,1
0,2 (20,7) 797584
33
Пример 8. Получение И-(этилкарбамоил)-блеомицина А>.
Растворяют 200 мг гидрохлорида блеомицина А6 в 10 мл воды. В раствор вносят 60 мг бикарбоната натрия и по каплям 0,1 мл этилизоцианата при помешивании. Смесь выдерживают 4 ч
45 мин при комнатной температуре, отфильтровывают, доводят рН фильтра.та до 4. Фнльтрат пропускают через колонку с 30 мл СМ-сефадекса С-25 для адсорбции целевого продукта. АдТаблица 6
Н О 20 Мб=О 0,08
200 Н О 100 1 = 0 0,05
И-(Циклогексилкарбамоил)-блеоми- цин А5
Продолжение табл. 6
50 0 1- 80
0,5 (15) И-(Циклогексилкарбамоил)-блеомицин А>
Пример . 9. Получение И-(ацетимидоил)-блеомицина А6.
Растворяют 600 мг гидрохлорида блеомицина А5.в 15 мл воды. В раствор вносят 90 мг гидрохлорида метилацетимидата. Добавлением триэтиламина доводят рН смеси до 8,8. Смесь перемешивают 4 ч при комнатной тем- пературе и затем упаривают до трети первоначального объема. Доводят рН концентрата до 7. Реакционную жидкость пропускают через колонку с
60 мл CM-сефадекса С-25. АдсорбироN-(Фенилкарбамоил)-блеомицин A> - 500
N-(Фенилкарбамоил)-блеомицин А 120 сорбировавшийся продукт элюируют последовательно 0,1 М водным раствором хлористого аммония и 0,25 M водным раствором хлористого аммония. Соби- . рают фракции элюата с целевым продуктом и обрабатывают активированным углем. Полученный раствор упарнвают н получают 100 мг гидрохлорида N-(этилкарбамоил)-блеомицина А6.
Выход 28,6%.
Аналогично получают соединения, представленные в табл. 6.
1 1/3 30 О, 1- 60
0,25 вавшийся целевой продукт элюируют
417 мл 0,3 М водного раствора хлористого аммония и 320 мл второй половины элюата пропускают через колонку с 40 мл активированного угля, .
Угольный слой промывают водой и элюируют системой ацетон -0,02 н ° соляная кислота (1:1 по объему). Элюат .упаривают и получают 410 мг гидрохлорида N-(метилацетимидоил)-блеомицина А8. Выход 65%.
Аналогично получают соединения, пере чсленные в табл. 7.
79 /584
Зб с
Ц !!!
<Л с
Ю <Ч
Р ) Ю г ! с
a l
CO сО с
Г Ъ
ЮЕ ф
Ю Q
1»Ъ Ф
LA ! о
Ю
\! с
Ю и!
С»! с
О")
С»!
Ю сП (Ч
Ul
<»! с
C) I л
»"4 СЧ с с
ЮЮ
С 4 с
C) Ю
СЧ
Ю
Р !
C) (»3
СЧ с
iA л с ! е
Э с о к о @ш
I i!I
О М хох ацх
Ю
C) с
01 .
1 1 хай
К U оео
О 1 с 3 л
Ю
Р Ъ
Х .О о =A
Ж„
U т!
Ю
CJ X
ФЧ .у о =1 м
Ж .у О о
М=Х о У Ъ
К
О кхн ецио ноео
ХХ XIII м
<»!»»
LA
СЧ
LA
<»!
iA
С»! о !
» о о о е
О - с(г Ц х х х< о (ч о е
c4 Q х< ое 4 «! х<
Р»
Е а ох ек о 4 х о 4 х о х о
g4 х! I Гл х
К 0 с оео
Х й
7С
Ю
Ю
Ю (»!
Ю
C)
%-»
C)
C) Ю
Ю
%»
Ю и л
Ю
Ю
»-11 х
Ц о х и х
iI! 1 а, х
1 Е ЕЯ ххххх оехке
Х Ця Н
l Е х Н U 5
К 0 Ц с оеоам
Х W III e O
I I к 4 о к Ац ц е н о! ое ахое и%ха
iII с
1 х х
Е х х Р" к
Я х 0 о е х ц
И О о !
Q, к
-х о
Ц ч о
I ф,Завов Д
М Ф
/3
Г
-у t3 с ! х х е х х ох а е хо
Н Э I
О.О
О I х к х о
Ц о о
ЮюФ Д
ФЪ
Р
ЧЭ
Ц V
1 к х о
Ц IA х Q
Е х о х а х е «Г к х
Щ
mo е
I К ф н
-1! U о Х
I т Х
Ю т.>! о о
Ц к х
Е х х х х И э х
1- Е ао е е к к
Е О
И 1 ! I х
1» х о 1
Ц rC х
Z x х х (0 х е Х шс
Э
1 Ц
Ю
Ю с
t х х
Р) х .z э х
О Е хо
o e
Х !»
ОО
Н I
Э
Я !»
1 Х хо
Ц
1 Х
I ! х о
Ц
Е in
Z K х к х о х х ! 7. г о
: e к
О» э
1 к х о
Ц
z Р х
> X
1» ох е х
I Z
ZO
Э
1 К
x Q
I u2 х Ф.
Е х х
Л х ы э х
О 3 ос ае нк
Х О ! ! е к — х о
37
797584
Ю с
\ Ч
Ю Е
1 » (с1 с
Ю 1
M с
Ю 1
Ю
«-1 (Ч с (Ч
Ю о г-—
О1 с
C) O lA ф
CO с
CO
Ю СЧ
IM
Ц, 10 е н
I ю
<с1 lA
ЮЮ lA (Ч с
Ul
1 1 с
lA
П1
111 (Ч
tll
< 1
lA (Ч с
Ю ф х х ф
М
Ц о
Ц о а
М
lA
Ю
М ц 1
Ю
М с
М
A Ю о
17 1
УД
C) «« .7 «1 о м, сф а
ЧЭ
Х о
I О
1 ж
LA Ж
Г 4 «-1 х о о е
С1 « х< х о н о ф
С1 «1 х < х о н ое
С« " х х х о
1-< о ф
С1 « х <, о х о
el х о
С1 х
Ф
Ю
Ю
«
Ю
C)
«1
Ю .Ю
Ю
C)
Ю
%-1
Ю
Ю
СЧ
° 4 о
