Состав геля для электрофорезамышечных белков
Союз Советских
Социалистических
Республик
ОП ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
<о817591
1L г ф (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 24,0779 (21) 2833352/30-15 я)м. кл.
G 01 и 33/48
6 01 и 33/12
G 01 й. 27/26 с присоединением заявки ¹â€”
Государственный комитет
СССР но делам изобретений и открытий (23) ПриоритетОпубликовано 300381. Бюллетень ЙЯ 12 (53) УДК 543 545 (088 ° 8) Дата опубликования описания 300381 (72) Авторы изобретения
Л.В. Богданов, Г.Д. Флусова и В.A. Ч оивайоЪ" " л
Й
TF Х1(,„"1
Тихоокеанский научно-исследовательский стИЩИ .. -., рыбного хозяйства и океанографии (71) Заявитель (54 ) СОСТАВ ГЕЛЯ ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА
ИЫШЕЧНЬБ БЕЛКОВ
Изобретение относится к биохймии, конкретно к области электрофоретического разделения белков.
Известен гель-носитель для электрофоретического разделения. белков, содержащий крахмал и буферный раствор. Для разделения животных белков гель-носитель готовят на буферном растворе, состоящем из смеси двух буферных растворов, один из которыХ содержит трис-(оксиметил)-аминометан и лимонную кислоту, а другой, так называемый электродный, содержит борную кислоту и гидрат окиси лития t1).
Для разделения молочных белков крахмальный гель готовят на буферном растворе, содержащем мочевину и меркаптоэтанол..Основным компонентом геля является крахмал, так как именно он является студнеобразующим веаеством (2 ).
Однако гель-носитель, приготовленный на основе крахмала, является мало пригодным для разделения мышечных белков рыб и морских млекопитающих, т.е. в данном геле разделение белков недостаточно. цель изобретения — улучшение разделения белков и получение достаточ-. но полного белкового спектра.
Поставленная цель достигается тем, что состав геля дополнительно содержит альгинат натрия при следующем соотношении компонентов, вес.%:
Крахмал - 11,0,- 14,0
Альгинат натрия, 0,180- 0,190
Буферный раствор Остальное
П р н м е р 1 Для электрофоретического разделения мышечных белков микижи (Sa imo mykiss), дальневосточ15 ной -сардины (Sardinops sagax meianostict), лахтака (Eriqnathus bor<
ba tus nout i cus) испольэовали гельноситель, содержащий,вес. Ъ:
Крахмал . 11
20 Альгинат натрия 0,180
Буферный раствор Ост аль ное
Буферный раствор с рН, равным 8,65, представляет собой смесь двух буферных растворов, один из которых содержит 0,867% трис-(-оксиметил)аминометан и 0,15% лимонной кислоты, другой содержит 1,18% борной кислоты и 0,29% гидрата окиси -лития, причем эти растворы взяти в соотноше30 нии 1:0,19.
817591.Формула изобретения
Составитель A. Макаров
Редактор М. Лысогорова ТехредН.Майорош . Корректор С. Шекмар
° Ь
Заказ 1337/59
Тираж 907 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
Гель-носитель приготовляют следующим образом.
В 1 л буферного. раствора растворяют вначале навеску альгината натрия в течение суток при комнатной температуре, затем добавляют навеску крахмала, размешивают и заваривают в колбе над открытым пламенем при постоянном перемешивании. После
,того, как гель закипит, из колбы отсасывают воздух для удаления пузырьков.воздуха из смеси с помощью 1О водоструйного насоса. Приготовленную смесь заливают в ванночки для остывания и созревания на 10-12 ч. После этого гель готов к работе.
При вышеуказанных концзнтрациях крахмала и альгината в геле происходит резделение белков на максимальное количество фракций, но фореграмма получается не достаточно четкая.
Пример. 2. Для электрофо- 2О ретйческого разделения мышечных белков сардины, лахтака и микижи испольэовали гель, содержащий вес.Ъ:
Крахмал 14
Альгинат натрия О, 190
Буферный раствор Остальное
Гель такого состава также позволяет получить достаточно полный спектр белковых фракций.
При более высоких концентрациях крахмала и альгината натрия гель 30 приобретает более высокую вязкость и скользкость, что вызывает трудности в работе с ним.
Пример 3. Оптимальный состав геля для электрофоретического 35 разделения мышечных белков, вес .%:
Крахмал 14
Альгинат натрия 0,188
Буферный раствор Остальное
При таких концентрациях крахмала 4О и альгината натрия гель обладает достаточно большой разделяющей спо" собностью и удобен в работе. ПолУчаемое фореграммы четкие, хорошо читаемые.
Эффективность разгонки оценивается визуально по количеству четких фракций в анодной и катодной частях электрофоретического спектра.
По числу белковых фракций разрешающая способность электрофореза после введения в гель альгината натрия при разгонке мышечных белков микижи и лахтака повысилась на 30%, при разгонке мышечных белков сардины на 503, за счет более тонкого разделения в анодной части электрофоретического поля, а также за счет того, что часть белков приобретает способность двигаться к минусовому полюсу и образует спектр в катодной части фореграммы.
Использование геля для электрофореза с добавлением альгината натрия позволяет на 30-50% повысить разрешающую способность эЛектрофореза мышечных белков рыб и млекопитающих и открывает новые воэможности для генетических и биохимических исспедований животных белков.
Состав геля для электрофореза мышечных белков, содержащий крахмал и буферный раствор, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью улучшения разделения белков, состав, геля дополнительно содержит альгинат натрия при следующем соотношении компонентов, вес.Ъ:
Крахмал 11,0 -14,0
Альгинат натрия . 0,180- 0,190
Буферный раствор Остальное
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Smithies О., Biochem J. 61, 1955, р. 629-641.
2. Make R. Y. and Balduen R.L..
Bioch. et Biophys. Aqta. 47, 1961, р. 225-239.
