Способ получения простагландинагруппы e

 

О П И С А Н И Е (11,8I86IS

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 26.04.79 (21) 2774785/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 07.04.81. Бюллетень № 13 (45) Дата опубликования описания 07.04.81 (51) М. К.

А 61 К 35/12

С 07 С 177/00

Государственный комитет (53) УДК 615.45:615. .34(088.8) па делам изобретений и открытий

Л. В. Казанская, Р. В. Бобылев, М. Х. Турьянов, С. Г. Пак, T. В. Максимова и В. П. Иванов

1-й Московский ордена Ленина и ордена Трудового

Красного Знамени медицинский институт им. И.М. Сеченова (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОСТАГЛАНДИНА

ГРУППЫ Е

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается получения лека р стве нных веществ.

Известен способ получения простагландина группы Е путем аэробного инкубирования арахидоновой кислоты в фосфатном буфере в присутствии биокатализатор а, восстановленного глютатиона и гидрохинона с последующей обработкой раствора органическим растворителем, фильтрования, упаривания, подкисления и хроматографии (1).

Однако известный способ является трудоемким и многостадийным (10 стадий), требует большого расхода дефицитного сырья, и выход целевого продукта незначителен (10%).

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и упрощение технологии производства.

Эта цель достигается тем, что в качестве биокатализатора используют О-антиген бактерии Salmonella typhi (ТУ 42 КВС

9276) при соотношении биокатализатора и арахидоновой кислоты 10: 1 — 7: 1 и обработку раствора проводят этанолом.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. 80 мг арахидоновой кислоты (чистота 85% ) аэробно инкубируют с 700 мг 0-антигена Salmonella typhi в при- сутствии 400 мг восстановленного глютатиона и 15 мг гидрохинона в 100 мл 0,2 M фосфатного буфера рН 8,0 при температуре

37 С в течение 30 мин при постоянном встряхивании. Скорость пропускания воздуха составляет 600 мл/мин. Затем в реакционную среду приливают 700 мл этилового спирта, выдерживают массу при температу10 ре — 4 Свтечение1часа и белый осадокотфильтровывают. Фильтрат упаривают в вакууме до объема 100 мл в токе азота при температуре бани не выше 45 С. Остаток подкисляют 5 н. НС1 до рН 3 — 3,5 и экстра15 гируют диэтиловым эфиром (100 мл, 2) эфирные вытяжки объединяют, промывают водой (100 млх,2) эфирный слой отделяют и высушивают над прокаленным сульфатом натрия. Эфир упаривают в вакууме.

20 Отбирают пробы для биологического и спектрофотометрического анализов, а затем для очистки сухой остаток растворяют в бензоле и хроматографируют на колонке со специально обработанной кремневой кислотой. Элюируют последовательно растворителями: 1000 мл бензола, 500 мл смеси бензолдиэтиловый эфир (95: 5); смесью этилацетат-бензол (3: 7) (100 млх,3); смесью этилацетат-бензол (6: 4) (100 мл)(6);

30 смесью этилацетат-бензол (8: 2) (100 мл)(818618

Формула изобретения

Состави гель С.

Малютина

Редактор О. Иванова

Техред А.

Камышникова

Корректор Р. Беркович

Заказ 628/17 Изд. М 256 Тираж 694 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Сапунова, 2

Типография, пр.

X5), 300 мл этилацетата. Фракции упаривают и анализируют. Согласно данным спектрофотометрического анализа получают 40 мг простагландинов группы Е (ПГЕ1+ ПГЕ ) с чистотой 96 — 98%, Методом масс-спектрометрии установлено, что содержание простагландина Ег составляет 20 — 25% от содержания простагландина Еь Методы анализа. Биотестирование. Определение биологической активности образцов простагландинов с помощью изучения сократительной способности кусочка гладкой мышцы животных (матки, кишки) показало, что их активность находится на уровне простагландинов, получаемых известным способом.

Исследование образцов простагландинов методами тормо>кения гемагглютинации и аггрегат.-агглютинации не выявило антигенную активность.

Спектрофотометрирование образцов простагландинов, обработанных по известному методу, показало наличие поглощения при

278 нм, которое характерно для простагландинов группы E. Метод использован для расчета количества простагландинов по калибровочному графику.

Хроматография образцов простагландинов на пластинках Silufol в системе этилацетат-уксусная кислота-2,2,4-триметилпентан-метиловый спирт-вода 110: 30: 35: 10:

: 100 при проявлении иодом показала наличие пятен Rf=0,78 — 0,8 и Rf=0,67 — 0,7, что соответствует литературным данным и величинам Rf простагландинов, полученных известным способом. Строение простагландинов подтверждено методом масс-спектрометрии. Были сняты масс-спектры метиловых эфиров метокситриметилсилильных производных (Ме — Mo — ТМС) . Полученные из масс-спектров молекулярные ионы и фрагментация для Ме — Мо — ТМС вЂ” ПГЕ1 (541, 526, 510, 470, 451, 368, 420, 380, 368, 297, 308, 297, 225, 199, 173) и для Ме—

Мо — ТМС вЂ” ПГЕ2 (539, 524, 508, 468, 449, 366,418,378, 368, 295, 308, 295,225,199,173) соответствуют литературным данным.

Ионизирующее напряжение 75 эв и 22 эв.

Температура источников ионов и напуска

120 С.

4

Пример 2. 80 мг арахидоновой кислоты (чистота 85% ) инкубируют согласно примеру 1 с 480 мг О-антигена Salmonella

typhi и далее как в примере 1, Выход целевого продукта составляет 40 мг (56%).

Предлагаемый способ позволяет повысить выход целевого продукта. Так выход целевого продукта в известном способе составляет около 10%, в предлагаемом способе — 56 — 58%.

В известном способе в качестве биокатализатора используют гомогенат крысиных желудков, являющийся дефицитным, нестабильным и трудно получаемым продуктом, в предлагаемом способе вместо него используют доступный стабильный, выпускаемый промышленностью (ТУ-42КВС9276)

О-антиген микроорганизма Salmonela typhi.

Известный способ требует большого расхода сырья биокатализатора (желудки

21 — крысы на 210 мг арахидоновой кислоты) . В предлагаемом способе расход биокатализатора сокращен -в 1000 раз, а именно 700 мг 0-антигена расходуется на

80 мг арахидоновой кислоты. Кроме того, предложенный способ позволяет сократить количество стадий с 10 до 7.

Способ получения простагландина группы Е путем аэробного инкубирования арахидоновой кислоты в фосфатном буфере в присутствии биокатализатора, восстановленного алютатиона и гидрохинона с последующей обработкой раствора органическим растворителем, фильтрования, упаривания, подкисления и хроматографии, отли а ю щи и с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и упрощения технологии производства, в качестве биокатализатора используют 0-антиген бактерии Salmonella typhi (ТУ 42 КВС 9276) при соотношении биокатализатора и арахидоновой кислоты 10: 1 — 7: 1 и обработку раствора проводят этанолом.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. С. Расе — Asciak, 1. S. Wolfe. Biochim

Biophys. Acta, 1970, 218, 539 — 542.