Способ получения иммуноглобулинового препарата

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБР ЕТЕ Н И Я

К АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ "> 836831

Союз Советских

Социалистических

Ресиублик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 19.07.78 (21) 2651073/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М. Кл.

А 61 К 35/14

Государствеинык комитет ио делам изобресеиий и открытий

Опубликовано 23.04.82. Бюллетень ¹ 15

Дата опубликования описания 23.04.82. (53) УДК 612.398.132:

615.37 (088.8) (72) Авторы изобретения

И. В. Борисова, Н. В. Холчев и Н. A. Мухина

Н аучно-исследовательский институт эпидемиологий и микробиологии им. Г. Н. Габричевского (71 ) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ИММУНОГЛ ОБУЛ И НОВОГО ПРЕПАРАТА

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для профилактики н лечения заболеваний, г званных энтеробактериями, менингококками, Рзецс1огпопаь aeruginosa.

Известен способ получения иммуноглобулинового препарата путем обработки хлоридом натрия экстракта из осадка Б (111 фракции) плазмы крови, фракционирования экстракта, очистки центрифугата иммуноглобулинов <1).

Однако конечный препарат, полученный этим способом, имеет значительные примеси бета-глобулинов, содержание которых превышает 3 /0. т. е. уровень их содержания в обычных препаратах иммуноглобулина выше допустимого по IlpHHHт ям техническим условиям. Препарат обладает недостаточной активностью 75,5

Кроме того, фракцио«ирование этанолом оказывает денатурирующее воздействие на белковые растворы и вызывает их дополнительную агрегацию.

Данный способ требует применения специального оборудования, обеспечивающего работу при мпнусовых температурах. Прп получении препарата Hа производстве в низкотемпературных холодильных ка мерах условия труда усложняются.

Цель изобретения — повышение активности целевого продукта и упрощение процесса.

Это достигается тем, что к центрифугату добавляют хлороформ, затем декстрансульфат и полиэтиленгликоль.

Способ осуществляют следующим образом.

1 кг осадка Б экстрагируют в десяти10 кратном объеме 0,9%-ного охлажденного раствора хлорида натрия при постоянно и перемешивании. Затем смесь доводят до десятикратного объема, хорошо перемешивают и оставляют на ночь (18 ч) при

15 4 — 6 С рН смеси 5,5+0,3. На следующий день смесь центрифугируют в течение часа при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок удаляют и в полученном экстракте определяют содержание белка, которое составляет около 2%. Объем полученного экстракта составляет 10600 мл.

К экстракту осадка Б добавляюг

160 мл охлажденного до 4 — 6 С хлороформа (10% по объему). Смесь медленно перемешивают 2 ч вручную или шюттель-аппарате при 4 — 6 С. Затем добавляют 233 мл

5%-ного раствора декстрансульфата (конечная концентрация 0,1%) . Смесь энергично встряхивают 5 — 10 мин и цептрифузО гируют при 3000 об/мин на центрифуге с

836831

Составитель C. Малютина

Техред Л. Куклина

1)сдактор Л. Письман

Корректор Л. Слепая

Заказ 3080

Изд. № 126 Тира>к 717

ВНИИПИ Государственного комигета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Загорская типография Упрполпграфиздата Мособлисполкома охлаждением до получения прозрачного центрпфугата. Осадок удаляют. Объем цеитрифугата составляет 8 л, содер)кап Ic

0,4%. К 8 tl экстракта для концентрирования им му:1оглобулипов добавляю г )О".> -11лй раствор полиэтпленгликоля (мол. вес 6000) до конечной концентрации 5;о при постоянном перемешивании. Эту смесь оставляют на ночь (18 ч) при 4 — 6 С. После выста ива ьпя осадок иммуноглобулинов отделяют путем,ge! BHTBHIIEI и цсптрифугпровапия 15 — 30 )1ин при 3000 об/мин па центрифуге с охлаждением. Осадок промывают 300 — !00 мл дистиллированной воды, подкисленной ацетатным буфером до рН 5--0.2, пр;1 E) — 2-"С, растворяют в охлажденном 0,9%-ном растворе хлорида

1 атрпя 10 содержания белка 5% (200 ——

250 ),1), pII 6,3. После растворения осадка препарат центрифугируют 15 мип прп

3000 oo/ìèí па центрифуге с охлаждением для удаления нерастворимых примесей. С центрифугатом проводят реакцию на удаление полиэтиленгликоля с реактизом Неслера (на 3 мл реактива Неслера осторож11о наслаивают 0,1 мл иептрифугата), прн этом не должен образовываться слой белого осадка. После центрифугирования в препарате устанавливают рН 7,0 — 7,5

;;,ВОН

)ля удаления нестабильных примесей к 1)BcTBoph пмму1юглобул ннов добавляют фосфорнокпслый кальций Саз(РО4) 2 пз расчета 0,4 г на 100 мл. После перемешивапия и вь1стаиванпя в течение часа раствор центр ифугируют 30 м ин пр и

3000 oo/ì!1-1 на центрифуге с охлаждением. затем добавляют глюкозу до конечной концентрации 2% В качестве стаоилизатора, После стерилизующей фильтрации препарат разливают по ампулам и лиофнлизируют.

Предлагаемый способ позволяет получить комплексный иммуноглобулиновый препарат, с активностью 97,3 о, содержащий иммуноглобулины трех классов в следующих соотношениях: SgG 55 — 60%, Sg А 15 — 20% u Sg М 25 — 30%. Препарат обладает высокой серологической активностью в отношении энтеробактерий, мепингококка, Pseredomonas Beruginosa H характеризуется высокой степенью очистки От примесей иммупологически псактив,иых белков.

Количество примесей не превышает 3"о от общего белка, что регламентировано для препаратов иммуноглобулина человека.

Кроме того, способ пригоден для проИЗВОдства и экономически эффективен, так как помимо улучшения:,словпй труда оп

20 Нс нуждается H сложном технпчес1 Ом

1гащении производства. Применение способа предусматривает более рациональное использование отходов производства препаратов крови из плацентарной сыворотки.

Формула изобретения

Способ получения иммупоглобулипового препарата пугем обработки хлоридом нат30 рия экстракта из осадка Б (III фракции) плазмы крови, фракционировапия экстракта, очистки центрифугата и выделения иммуноглобулинов, отл ич а ю щ «EI c EI Te», что, с целью повышения активности целе35 вого продукта и упрощения процесса, к цептрифугату добагляют хлороформ, затем декстрансульфат и полиэтнленгл11коль.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Steinbuch-Prep chen:istry, 1973, 3 (4), 363 †3.