Штамм продуцент ингибитора -лактамазы

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

{61) Дополнительное к ввт. свид-ву (22) Заявлено 070579 (21) 2764099/28-13 с присоединением заявки М9 (23) ПриоритетОпубликовано 230681 Бюллетень М9 23

Дата опубликования описания 23,0681 5 М К„з

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий

A 61 К 35/70 (53) УДК 615.779. 94 (088.8) 3К.Д. Мазунина, Е.П. Яковлева, В.М. Прокопенко

Т.И. Рожанская, Ю.E. Конев, М.С. Поляк, И.М. Те Евин и И.И. Белоусова .

1

Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) IIITAMN STREPTOMYCES OLIVACEUS VAR.ITURUPYCUS

SP, NOV.-ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА р-ЛАКТАМАЗЫ

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения нового штамма.

Известен штамм Streptomyces А-271, продуцируюший антибиотик-ингибитор

Р -лактамазы (1) .

Однако ингибиторные свойства этого штамма проявляются только в отношении пенициллинаэы rpa -отрицательных микроорганизмов.

Цель изобретения — создание нового штамма, проявляющего ингибирующую активность в отношении

Р-лактамаэ грамм-положительных мик— роорганизмов.

Предлагаемый штамм выделен из почвенного образца Курильских островов, его номер 10359/3.

Штамм Streptomyces о11часеч5 var.

iturupycus sp.nov. — продуцент ингибитора -лактамаэы хранится в коллекции

ВНИТИАФ пбд номером ЛИА 0945.

Культурально-морфологические признаки.

На большинстве использованных питательных сред штамм JIIIA 0945 имеет спиральные спороносцы, спирали с 1 завитком, выраженные не всегда четко, иногда неполноценные — с

0,5 завитками. Споры овальные с гладкой оболочкой. Культура темнооливковая до темно-бурой, выделяет в среду светло-оливковый пигмент, меланоидов не образует.

Среда Чапека с крахмалом. Рост обильный. Воздушный мицелий от серого до темно-серого. Субстратный мицелий коричнево-бурый до темнооливкового. Растворимый пигмент светло-бурый или очень светло-зеленовато-оливковый.

Среда Чапека с глицерином. Рост обильный. Колонии слегка вЫпуклые с гладкими краями, темно-бу15 рые, почти черные. Воздушный мицелий темно-серый. Растворимйй пигмент отсутствует.

Крахмало-аммиачный агар. Рост хороший. Воздушный мицелий мышино20 серый. Субстратный мицелий от синевато-серого до темно-серого. Растворимый пигмент отсутствует.

Овсяный агар. Воздушный мицелий серый. Субстратный мицелий от светло-апельсинового до бледно-медового. Растворимый пигмент желтоватый.

Аспарагино-глицериновый агар.

Воздушный мицелий обильный, се30 рый с черными вкраплениями. Коло839545 нии темно-оливковые и даже черные, с волнистыми краями. Растворимый пигмент выражен слабо, оливково-серый.

СР1 по Красильникову. Воздушный мицелий обильный, серый, колонии плоские темно-бурые. Растворимый пигмент слабо-буроватый.

Среда минеральная по Гаузе. Рост хороший. Воздушный мицелий обильный, мучнистый, зеленовато-серый до темно-серого. Субстратный мицелий темно-оливковый. Культура образует зеленоватый растворимый пигмент.

Синтетическая среда Ваксмана.

Рост обильный. Воздушный мицелий пушистый от палевого до светло-серого. Субстратный мицелий от охристого до темно-оливкового. Растворимый пигмент светло-охристый.

Мясо-пептонный агар. Воздушный мицелий в виде слабого беловатого налета или отсутствует. Субстратный мицелий восковидный. Колонии мелкие, блестящие. Среда не окрашена.

Органическая среда с переваром

Хоттингера. Воздушный мицелий умеренный, от бледно-сероватого до темно-серого, субстратный мицелий темно-оливковый..Среда не окрашена.

Физиологические признаки.

Меланоидного пигмента не образует, на ломтиках картофеля растет хорошо, образуя серый воздушный мицелий.

Культура желатину разжижает быстро, молоко пептонизирует без коагуляции, сахарозу инвентирует, сероводород не образует, нитраты до нитритов не восстанавливает, на клетчатке рост слабый.

На среде Придхэма-Готтлиба штамм хорошо развивается, если в качестве единственного источника углерода добавляют арабинозу, ксилозу, маннит, Фруктозу, рамнозу, не растет в присутствии сахарозы и раффинозы.

Антагонистические свойства.

Штамм проявляет антагонистические свойства в отношении некоторых видов грамм-положительных бактерий (Baci11us subtiiis, Sarcinalutea) микробактерий, грибов, не действует на грамм-отрицательные бактерии и дрожжи, Условия образования ингибитора

-лактамазы.

Штамм Streptomyces olivaceus

var.iturupycus sp.nov.. ЛИА 0945 выделяют ингибитор(-лактамазы в нативный раствор.

Для получения ингибиторра актиномицет культивируют при 27+10 С на качалке (П = 180 об/мин) в колбах емкостью 750 мл, содержащих 100 мл среды следующего состава, г/л: соевая мука — 10, глицерин — 10, хлористый натрий — 5, углекислый кальций — 1.

Продолжительность ферментации

96 ч. AKTHBHocTb ингибитора ф -лактамазы определяют модифицированным методом йодометрического титрования. Величина ингибирующего эффекта на активность ф -лактамазы

Васillus licheniformis 749/С, выз- ванного 1 мл фильтрата культуральной жидкости штамма Streptornyces olivaceus var.iturupucus sp.nov. JINA 0945

10 составляет 35-40 ИЕ.

Ингибитор хорошо растворим в воде, физиологическом растворе, не растворим в ацетоне, этаноле, бутаноле, этиловом эфире.

При гельхроматографии на сефадексе g-25 ингибитор элюируется в виде одного симметричного пика.

Ингибитор обладает способностью сорбироваться на анионитах с различными Функциональными группами.

Ингибитор может использоваться при стафилококковой инфекции и сочетаться с. бензилпенициллином, наиболее .доступным и дешевым антибиотиком, который чувствителен, однако к стафилококковой пенициллиназе. Последнее определяет устойчивость к пенициллину 70-90% культур стафилококка.

39 В таблице представлены изменения

NIIK пенициллина для пенициллиназообразующих штаммов стафилококка в результате действия нативного раствора, содержащего ингибитор (ЕД/мл по пенициллину) Штамм

Исследуемое вещество 132 179 158

Пенициллин 1000

500 1000

Пенициллин+ингибитор 25

50

Ингибитор (контх/ роль) Не активен Не активен Не активен

Примеч а н и е . Указано действие на стафилококк в использованном разведении.

Предлагаемый штамм может найти широкое применение в медицинской практике при лечении стафилококко65 вой инФекции.

839545

1. Патент СССР по заявке

Р 2596895/28-13, кл. С 12 0 9/14, .1977 °

Составителль С. Малютина

Редактор О. Малец Техред С.Мигунова Корректор Ю. Макаренко

Заказ 4584/5 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Формула изобретения

Штамм Streptomyces î l i vace us ча r .

| tv ru p u c u s s р. no v . -продуцент ингибитора -лактамазы.

Хранится в коллекции ВНИТИАФ под . номером ЛИЛ 0945.

Источники информации. принятые во внимание при экспертизе