Способ сенсибилизации эритроцитов

 

О Il И С А Н И Е 857875

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсник, Социвлистичесник

Реслублин (61) Дополнительное к авт.свид-ву— (22) Заявлено 06.07.79 (21) 2792570/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (51) М. Кл.

G01 N 33/92 (53) УДК 615.361 (088.8) Опубликовано 23.08.81. Бюллетень № 31

Дата опубликования описания 03.09.81 по делам лзобретений и еткрмтий (72) Авторы изобретения

И. Е. Ковалев, О. Ю. Полевая а Н. П. Давалов

:а

I I

Научно-исследовательский институт по биологическим ( испытаниям химических соединений;" (71) Заявитель (54) СПОСОБ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ

Гасударственный камитет (23) Приоритет—

Изобретение относится к иммунохимическим исследованиям.

Известен способ сенсибилизации зритроцитов путем инкубации их в среде, содержащей производное холестерина (1).

Однако известный способ не обеспечивает высокой стабильности конечного продукта.

Цель изобретения — повышение стабильности конечного продукта.

Эта цель достигается тем, что инкубацию эритроцитов ведут при 0 — 10, рН 8—

8,5 забуференным трис-буфером изоосмотическом физиологическом растворе, а в качестве ее производного холестерина используют хлорформиат холестерина в концентрации 1 10 — 5:10 кммоль на 1,810 эритроцитов.

Пример 1. К суспензии 1 мл 100%-ных эритроцитов барана (1,810 оклеток) в40 мл изоосматического физиологического раствора, забуференного трис-буфером до рН 8—

8,5 (0.02 М трис, 0,15 М хлористый натрий, рН 8 — 8,5) добавляют при 0 — 10 С раствор

2 мг (1.10 ммоль) хлорформиата холестерина в 0,03 мл диоксана. Смесь инкубируют в течение 18 ч при 4 С. Затем полученные сен2 сибилизированные ковалентным связыванием с холестерином эритроциты барана отмывают центрофугированием от непрореагировавших низкомолекулярных продуктов реакции физиологическим раствором до получения прозрачного супернатанта и .хранят в виде 2,5%-ной суспензии в растворе, содержащем на 1 объем нормальной декомплементированной кроличьей сыворотки 74 объема раствора, приготовленного из расчета

100 ммоль глюкозы, 80 ммоль хлористого калия и 20 ммоль двузамещенного фосфата натрия на 1 л дистиллированной воды, причем рН этого раствора доводят до рН 8—

8,5 добавлением 1 М раствора соляной кислоты. Устойчивость сенсибилизированных холестерином эритроцитов определяют визуаль11 но по появлению помутнения и окраски в надосадочной жидкости, в которой хранят эритроциты. Окрашивание надосадочной жидкости наблюдают только на 7 — 8 день с момента их приготовления. зт Пример 2. Процесс осуществляют аналогично примеру 1, но реакцию 1,8 10. оэритроцитов проводят с 5 10 ммоль хлорформиата холестерина. Окрашивание надосадоч857875

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор О. Малец Техред A. Бойкас Корректор М.Шароши

Заказ 7234/74 Тираж 907 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», r. Ужгород, ул. Проектная, 4 ной жидкости не наблюдают в течение 7 дней с момента их получения.

Предлагаемый способ позволяет получить стабильный конечный продукт, который используют для определения титров антител к холестерину.

Способ сенсибилизации эритроцитов путем инкубации их в среде, содержащей производные холестерина, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности конечного продукта, инкубацию эритроцитов ведут при температуре t 0 — 10, рН 8 — 85 забуференном трис-буфером изоосматическом физиологическом растворе, а в качестве производного холестерина используют хлорформиат, холестерина в концентрации

1.10 з — 5-10 з ммоля íà 1,8 101а эритроцитов.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ковалев И, Е,, Шайдаров В. В. Рубцова Е. P. и Полевая О П. «Фармакология и токсикология», № 3, с. 331 — 333, 1975.