Способ получения тиротропина

 

Ф.Ю. Рьш ка, В. В. Крушинская, Е.И.Кандыба,. В. В. Кчвилшене и А.П.Жемайтите (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт i-ехнологии-.. кровезаменителей и гормональных препаратов (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТИРОТРОПИНА

Изобретение относится к фармацевтической (эндокриновой) промышленности и может быть использовано для производства гормональных препаратов °

Известен способ получения тиротропина путем экстракции свежемороженных гипофизов крупного рогатого скота, 27 раствором хлористого натрия с последующей очисткой ацетоном, ацетатом свинца и трихлоруксусной кисло10 той. Полученный целевой продукт диализируют и лиофилизируют.

Выход составляет 0,45 r/Kã при активности 1 ЕД/мг Pg.

Однако недостатком известного

15 способа является его длительность (280 час) и низкая удельная активность целевого продукта.

Цель изобретения — расширение

20 сырьевой базы и повышение активности целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения тиротропина путем экстракции KHBoTHQI сырья с последующей очисткой и вьщелениеч целевого продукта, в качестве источника сырья используют отходы, полученные после производства адренокортикотропного гормона, которые экстрагируют водно-спиртовым раствором при рН 5,0-9,0 в присутствии аммиачно-ацетатного буфера, сорбируют на карбоксиметилсефадексе,далее элюируют тем же экстрагентом и осаждают целевой продукт 75-90Х-ным спиртом.

Пример I. 1,2 кг отходов, полученных после экстракции 2 кг гипофизов свиней подкисленным ацетоном, экстрагируют 4 л 70Х спирта, содержащего IOX ацетата аммония, рН 8,á5, - в течение 3 час. По окончании экстракции экстракт отделяют от отходов и осаждают доведением концентрации спирта до 80Х. Выпавший сырец тиротропина промывают

858835 4

l2X этилового спирта, После сорбции гормона из раствора колонку промывают 0,25 М аммиачно-ацетатным буфером, а тиротропин элюируют 30 мл 1 М аммиачно-ацетатного буфера с рН 7,00, содержащим 507. спирта. Элюат охлаждают до 5 С и при перемешивании добавляют 120 мл абсолютного спирта, Через 12 ч осадок отделяют центрифугированием, промывают 2 раза 967.— ным спиртом, затем ацетоном и сушат до удаления запаха ацетона. Вес порошка — 118 мг, активность — 11

ЕД/мг. Выход составляет 650 ЕД из

1 KI I ипофи зов е

Предлагаемый способ позволяет использовать отходы от производства адренокортикотропного гормона, сократить продолжительность технологического процесса в 2 раза, увеличить выход целевого продукта с 200 ЕД/кг до 600 ЕД/кг, а также повысить удельную активность целевого продукта с 1 ЕД/мг до 10-!5 ЕД/мг.

Формула изобретения

ВНИИПИ Заказ 7395/13 Тираж 687 Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 спиртом, ацетоном и сушат на воздухе.

Вес сырца 5,2 r, активность 0,6 ЕД/мг

Берут 5 r сырца тиротропина и раст воряют в 0,8 л 0,1 И аммиачно-ацетатного буфера с рН 6,25 и проводят сорб цию через колонну объемом 50 мл, наполненную KM-сефадексом С-50,уравновешенным тем же буфером. По окончании сорбции колонну промывают исходным буфером, заполняют элюируюшей смесью, состоящей из равных объемов

2 М аммиачно-ацетатного буфера и этилового спирта, закрывают и выдержи вают 20 час. Затем тиротропин элюируэт и осаждают 3 объемами спирта. Выпа ший осадок тиротропина промывают этиловым спиртом, ацетоном и сушат на воздухе. Выход тиротропина составляет 1100 ЕД/кг гипофизов, активность 3 ЕД/мг. 0,55 г тиротропина растворяют в 0,05 л 0,005 N натрийглицинового буфера с рН 9,5 и пропускают через колонну обвемом 25 мл, наполненную ДЭА =сефацелем, уравновешенным тем же буфером. По окончании сорбции колонну промывают 50 мл исходного буфера, затем 50 мл 0,1 М натрий-глицинового буфера с рН 9,5 и элюируют гормон 0,05 M аммиачноацетатным буфером с рН 6,25, Тиротропин из элюата осаждают 5 объемами спирта, Выпавший осадок промывают спиртом, ацетоном и сушат на воздухе, Выход тиротропина составляет

600 ЕД/кг гипофизов, активность—

15 ЕД/мг.

Пример 2. Берут 800 r отходов, полученных после экстракции

2 кг свежезамороженных передних долей гипофизов крупного рогатого скота подкисленным ацетоном, заливают

4 л экстрагирующей смеси, состоящей из 2 М аммиачно-ацетатного буфера с рН=7,00 и этилового спирта,взятых в соотношении ll:1. Суспензию перемешивают в течение 3 час, нераст» воримую часть отделяют центрифугиро" ванием, а недосадочную жидкость разбавляют 3 объемами воды. Полученный раствор пропускают через колонку объемом 15 мл КМ-сефадекса С-50,. уравновешенного 0,25 И аммиачно-ацетатным буфером с рН 7,00, содержащим

Способ получения тиротропина пу30 тем экстракции животного сырья с последующей очисткой и выделением целевого продукта, о т л и ч а ю— шийся тем, что с целью расширения сырьевой базы и повышения активности целевого продукта, в качестве источника сырья используют отходы, полученные после производства адренокортикотропного гормона, которые экстрагируют водно-спиртовым pacTRo40 ром при рН 5,0-9,0 в присутствии аммиачно-ацетатного буфера,сорбируют на карбоксиметилсефадексе, далее элюируют тем же экстрагентом и осаждают целевой продукт 75-90К-ным

43 спиртом.

Исто ники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Leon S. Ciereszko. Preparation

of pituitary thyrotropic hormone.

J.Biol. Chem., 1945, 160, р ° 585.