Способ получения аминопроизводных глицерина или их солей
Союз Советских
Социалистических
Рвслублик
ОП ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К ПАТЕНТУ
<»I893128 (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 170879 (21) 2650899/23-04 (23) Приоритет - (32)18. 08. 77 (51) N. Кл.
С 07 С 93/04
С 07 С 85/1И
А 61 К 31/13
@аудэрвтвепьй кввнпвт
CCCP ав авлви азвбрвтввкй я еткрыткй (33) США (») 825535
Опубликовано 23.12В1. Бюллетень № 47 (53) УЙ1 547 ° 233..07(088.8) Дата опубликования описания 23.1231
Иностранец
Аллен Ричард Краска (CIA) (72) Автор изобретения! ЮЪнАМ 1л 1 Л@-! И: 11!Й !ЕСУГАЯ щ д 1@тк
Иностранная фирма
"Пфайзер ИНК" (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АИИНОПРОИЗВОДНЫХ
ГЛИЦЕРИНА ИЛИ ИХ СОЛЕЯ
Изобретение относится к способу получения аминопроизводных глицерина или их солей общей формулы
CH@Q
I 5
CHQ (1) I
СНОВ, где один из Q или Q является
"О-Y-NHR -группой, а другой - OQ-груп Io па;
R< и В являются алкилом С4 . или нормальным алкенилом С„ < не имеющим .двойной связи в положении 1;
Y - алкилен С „, причем две его 1а валентности отнесены к разным атомам углерода, о-, м-, или и-фенилендимс тилен, и о-, и-, и- (СН2) г
%1
q - целое число 1-3, а левая связь 20 присоединена к 0; водород wow aa Kva C 4 которые могут быть применены в качестве лекарственных средств, а именно в качестве противовирусных препаратов, Известна реакция получения аминов восстановлением соответствующих нит рилов (13.
Цель изобретения - получение новых соединений, обладающих ценными фармацевтическими свойствами.
Поставленная цель достигается те!4, что соединение формулы
СН -Q !
CHQ4
СН ОР у где один из Q u Q является В О, Ь
1 а другой - OY -CN-группа или ,-0YN -группа, где Y - алкилен С, Н2 где левая связь присоеди1
1 Н2 нена к 0 и где левая связь присоединена к О, и Rqводород, восстанавливают путем кагалитической гидрогенизации или комп1 лексным гидридом щелочного металла
89 и полученный продукт выделяют в виде: свободного соединения или соли или аккилируют в случае, когда К > в соединении формулы 1 означает алкил С, „, Пример 1. 1,3-Ди-О-(н-гексадецил)-2-0"(3 аминопропил)-глицерина гидрохлорид. а) 1,3-ди-О-(н-гексадецил)-2-0-(2-цианоэтил)-глицерин. Смесь 80 г
1,3-ди-0-(н-гексадецил)-глицерина (148 ммоль), 1,49 кг акрилонитрила (28,1 ммоль) и 1,2 л водной 2 н.гид" роокиси натрия нагревают до 50 С.
Медленно добавляют 19,2 г 403-ного водного раствора гидроокиси тетрабутиламмония (29,5 ммоль), в результате чего температура экзотермической реакции в смеси поднимается до 8090ОС. Реакционную смесь затем перемешивают в течение 20 мин без внешнего нагрева с последующим охлаждением до 20 С и добавлением 1 л воды.
Твердый материал 1смесь непрореагировавшего и цианоэтилированного
1,3-ди-О-(н-гексадецил)-глицерина) выделяют и вновь обрабатывают 1,49 кг свежего акрилонитрила (28,1 ммоль), 1,2 л водной 2 н.гидроокиси натрия и l9,2 г 40 ;-ного раствора гидроокиси тетрабутиламмония (29,15 ммоль) в течение 20 мин при перемешивании при 50 С, с последующим охлаждением и добавлением 1. л воды, Результирующий 1,3-ди-0-(н-гексадецил)-2-о-(2-цианоэтил)-глицерин в виде твердого вещества отфильтровывают, промывают последовательно водой, метанолом и ацетонитрилом и сушат. Выход 933 (82 г); т.пл. 45-46 С.
ИК-спектр (СНС1 ) : 2250 см .
ЯМР-спектр (COC1 >) : с 3,92 (й, 2
NCCH(CHg0-); 3,33-3,67 (n, 9, -ОСН ГСН ОСНлС 15Н „Э2); 2,62 (t, 2, МССН СН О-) и 0,75-1,58 (m, 62, алифатические протоны), б) Смесь 20,5 г 1,3-ди-О-(н-гексадецил) -2-О-(2-цианоэтил) -глицерина (34,5 ммоль), 200 мл тетрагидрофурана
10 мл этанола и 3 г скелетного никелевого катализатора (Ренея) насыщают газообразным аммиаком при 0-5 С, а затем гидрогенизируют при давлении
3,15 атм в гидрогенизаторе .Паара в течение 3 ч при комнатной температуре °
Затем смесь фильтруют, катализатор промывают 50 мл тетрагидрофураном и фильтрат в целом упаривают в вакууме до получения маслообразного продукта. Эту процедуру трижды повторя3128 4 ют со свежими реагентами и катализатором с получением всего 77 г масла.
Масло растворяют 500 мл диэтилового эфира и раствор промывают 21-ным водным раствором гидроокиси аммония (500 мл), сушат MgSO<,фильтруют и упаривают в вакууме с получением твердого вещества. Твердое вещество растворяют в 300 мл этанола и раствор насыщают газообразным хлористым водородом с последующим упариванием в вакууме до твердого вещества, перекристаллизовывают из этилацетата с получением искомого продукта с небольшими примесями (63 г); выход
723; т.пл. 69-70 С. Затем дважды перекристаллизовывают из смеси изопропанол-ацетонитрил (1:1). Получают
800 мл (47,5 г) готового соединения; выход 543; т.пл. 58-59 С .
ЯИР-спектр (СОС1 ): с 3.84 (t, .2, HgNCHg CHgCHg0); 3,55 (m, 9, -OCH/
/CHgOCHyC15Нр); 3,24 (t, 2, HgNCHgCHyCHy0-); 2, 04 (m, 2, HgMCHg=
СН СН О-) и 0,90 — 1,32 (m, 62, алифатические протоны) .
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ: С 72,04; Н 12,73;
N 2,21.
Найдено, ь: С 71,20; Н 12,41; и 2 30, Пример ы 2-7. Используя методику примера 1 при употреблении
1,3- или 1,2-ди-0-(н-высшеалкил)-гли35 церинов в качестве исходных материалов
СИ -ОlCH )> еН>
4 9 -O-С
1 Л.) — O— - СН получают соединения, приведенные в табл. 1.
Пример 8. 1,3-Ди-О-(н-гексадецил)-2-о-(2-аминоэтил) -глицерина гидрохлорид, а) 1,3-Ди-0-(н- гексадецил) -2-о-(2-карбоксиэтил) †глицер.
ss СCм е с ь 44,8 г 1,3-ди-0- (н-гексадецил) -2-о- (2-цианоэтил) — глицерина (8,1 ммоль), 50 мл концентрированной соляной кислоты и 50 мл муравьиной
28 d
Пример 9. 1,3-Ди-0-(н-гекса" децил)-2-0-(3-этиламинопропил)-глицерина гидрохлорид. а) 1,3-Ди-О-(н-гексадецил)-2-0-(З-ацетамидопропил)-глицерин.
1 г гидрохлорида 1,3-ди-0-(н-гексадецил)-2-0-(3-ацетамидопропил)-глицерина (1,6 ммоль) добавляют к смеси
830 мг карбоната калия (6,0 ммоль) и
75 мл бензола. Затем добавляют 150 мг ацетилхлорида (1,9 ммоль) и результирующую смесь перемешивают в течение
1 ч при кипении с обратным холодильником. Добавляют 150 мг ацетилхлорида (1,9 ммоль) и реакционную смесь перемешивают еще в течение 1 ч при кипении с обратным холодильником.
ТХС-анализ показывает полное завершение реакции. Реакционную смесь охлаждают, добавляют 75 мл воды и результирующую смесь трижды экстрагируют 100 мл диэтилового эфира. Комбинированный эфирный экстракт осушают
HgSO<, фильтруют и упаривают в вакууме. Получают 800 r промежуточного соединения; выход 79ь; т.пл. 53-54 С.
ИК-спектр (СНС1 g): 3400 и 1670 см ".
ЯМР-спектр (СОС1 ): 0 1,97 (s, 3, -HcocH 3) ° б) 700 r 1,3-ди-О- {н-гексадецил)-2-0- (3-ацетамидопропил) -глицерин (1,1 ммоль) растворяют в 100 мл диэтилового эфира и обрабатывают 500 мг литий-алюминий-гидрида (13 ммоль).
Затем добавляют 100 мл воды и смесь дважды экстрагируют 100 нл диэтилового эфира. Комбинированный эфйрный экстракт осушают HgSO, Фильтруют, обрабатывают газообразным хлористым водородом и упаривают в вакууме с получением 470 мг твердого продукта который перекристаллизовывают из горячего этилацетата, выход 663; т. пл. 61-620 С.
ЯИР"спектр (СОС1 ): о""1,47 (t, 3, -КНСН СН ).
Элементный анализ:
Вычислено, Й: С 72,51; Н 12,78; и 2,11.
Найдено, 3: С 72,47; Н 12,56;
М 2,03.
Пример 10. 1,3-Ди-О-(н-гекса. децил) -2-0- {3-изопропиламинопропил) "
-глицерина гидрохлорид. а) 700 r 1,3-ди-0-(н-гексадецил) 1
-2-О-(3-аминопропил)-глицерина гидрохлорида (1,1 ммоль) растворяют в растворе 1,05 мл уксусной кислоты, . 350 мг ацетата натрия (4,3 ммоль) 5 8931 кислоты перемешивают в течение 16 ч при нагревании до кипения с обратным холодильником, затем охлаждают и
3 раза экстрагируют 100 мл диэтило- вого эфира. Скомбинированный эфирный 5 экстракт промывают 200 мл воды, осушают HgSOy, отфильтровывают и упаривают в вакууме с получением 4,5 r
1,3-ди-О-(н-гексадецил) -2-о-(2-карбоксиэтил)-глицерина в виде твердого вещества, которое очищают громатографией на силикагеле (элюирование толуол-этанолом) . Получают 3,5 г промежуточного продукта; выход 713; т.пл.
43-45 С. 1$
ИК-спектр (СНС1 3): 1740 с г .
ЯИР-спектр (COCl 3): 0" 3,93 (t, J = 6 Гц, 2, -ОСН СН СООН) и 2,65 (t, J = 6 Гц, 2, -ОСН СН СООН), б) 3, 5 r 1, 3-ди-О- (н-ге ксадецил}"2" О- (2-картоксиэтил) -глицерина (5,7 ммоль) растворяют в смеси 55 мл бензола и 5,89 r концентрированной серной кислоты. Затем каплями добавляют 6,34 мл азотводородной кислоты (4,65 вес.3 раствора в бензоле;
6,0 ммоль) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре.
Анализ с помощью тон кослойной хроматографии (ТСХ) показывает приблизи- З© тельно 503-ную конверсию 2-карбоксиэтильного соединения. Каплями добавляют 6,34 мл азотводородной кислоты (5,65 вес.i бензольного раствора;
6,0 ммоль) и реакционную смесь пере- и мешивают еще в течение 16 ч при 40 С.
В этом случае ТХС-анализ показывают по существу полное завершение реакции. Затем добавляют 50 мол воды и водную 2 н.гидроокись натрия, и результирующую смесь 3 раза экстрагируют 200 мл диэтилового эфира. Скомбинированный эфирный экстракт осушают
NagSO фильтруют, насыщают газообразным хлористым водородом и упаривают в вакууме с получением твердого продукта. Твердое вещество очищают хрома" .тографией на силикагеле (элюирование хлороформом-метанолом) и перекристаллизовывают из горячего этилацетата
570 мг конечного продукта; выход 16 о; т. пл. 79-800С.
ЯНР спектр (СОС13): о 3,95 (m, 2, -ОСН СН МН ) и 3,22 (т, 2, "ОСН СН МН )
Элементный анализ:
Вычислено, ". С 71,62; Н 12,67;
N 2,26.
Найдено, Ъ: С 70,90; H 12,19;
N 2,05.
893128
20
25 и 1,3 мл ацетона. Небольшими порциями добавляют 1,25 r боргидрида натрия (33 ммоль) до тех пор,пока ТХСанализ не показывает, что израсходовано все 3"аминопропиловое соединение. Затем реакционную смесь обраба" тывают 20 мл водной 2 н. гидроокиси натрия и 20 мл воды и трижды экстрагируют 40 мл диэтилового эфира. Комбинированный эфирный экстракт осушают
MgSO4, фильтруют, обрабатывают газообразным хлористым водородом, а затем упаривают в вакууме с получением
210 г твердого продукта, который перекристаллизовывают из горячего этилацетата. Твердое вещество содержит около 1/2 моль Н О íà 1 моль продукта, выход 28 :; т.пл. 72-73 С.
ЯИР-спектр (CDClg): o 1,42 (d, б, tÑÍÉ.
Элементный анализ:
Вычислено, ; С 71,82; Н 12,79;
М 2,04.
Найдено, б: С 71 92; Н 12,46;
N 1 94.
Пример 1. 1,2-Ди-О-(н-гексадецил) -3-О-(2-изопропиламиноэтил)-глицерина гидрохлорид. а) 1,2-Ди-0-(н-гексадецил) -3-о-аллил-глицерин.
1,78 r гидрида натрия (50 вес.3 дисперсии в минеральном масле, 37 ммоль) добавляют при 60 С к раствору 10 г 1,2-ди-О-(н-гексадецил)-глицерина (18,5 ммоль) в 100 мл
N,N-диметилформамида и результирующий раствор перемешивают при 600С в течение 20 мин. Затем каплями добавляют 4,47 r аллилбромида (37 ммоль) и результирующую смесь перемешивают в течение 3 ч при 90 С, охлаждают, о осторожно разбавляют 200 мл воды для гашения реакции и экстрагируют диэтиловым эфиром (3x150 мл), Комбинированный эфирный экстракт промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, осушают MgS04, фильтруют и упаривают в вакууме с получением маслообразного продукта, который очищают с .помощью хроматографии на силикагеле (элюирование бензолом) 10 r; выход 93Ф (масло) .
ЯИР-спектр (CDC1 g) Ф 5,66-6,16 (m, 1, -ОСНОСН=СН ); 5,25 (d дублетов, 2, -ОСН СН=СН ) и 4,03 (d, 2, -ОСН СН=СНy) . б) 1,2-Ди-О- (н- гексадецил) -3-0-формилметил- глицерин.
90 Hl" тетроксида осмия (0,354 ммоль) добавляют к 4,5 г раствора 1,2-ди-О-(н-гексадецил)-3-О-аллил-глицерина (7,15 ммоль) в тетрагидрофуран/воде (3;1,120 мл) и результирующий раствор перемешивают в течение 5 мин при комнатной температуре. Затем добавляют 9 г периодата натрия (42 ммоль) и реакционный раствор перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре в атмосфере азота. Затем реакционный раствор разбавляют 150 мл воды и экстрагируют диэтиловым эфиром (2x150 мл). Комбинированный эфирный экстракт промывают 150 мл воды, осушают MgSO4 и упаривают в вакууме до маслообразного продукта, который очищают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом/этилацетатом), 2,6 r. Получают аморфное твердое вещество, выход 573.
ИК-спектр (СНС1 Z): 1735 см
ЯИР-спектр (CDC13): о 9,38 (t,,1=1 Гц, 1, -ОСН СН0) и 4,07 (d, 1 Гц, 2, -ОСН СНО).
I в) 0,1 г цианоборогидрида натрия (1, б ммол ь ) добавляют к раст вору
1,5 г 1,2-ди-0-(н-гексадецил)-3-0з0 -формилметил-глицерина (2,6 ммоль) и
0,89 r изопропиламина (15 ммоль) в метаноле/тетрагидрофуране (1:1,50 мл) и смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем рН доводят до б добавлением 5 н.метанольной хлористоводородной кислоты, добавляют 0,1 г цианоборогидрида натрия (1,6 ммоль) и реакционную смесь затем перемешивают в течение еще
40 60 ч при комнатной температуре,фильтруют, обрабатывают 3 г воды, 10 мл гидроокиси натрия и 200 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия и экстрагируют диэтиловым эфиром
45 (2x150 мл). Комбинированный эфирный экстракт осушают MgSO4, фильтруют и упаривают в вакууме с получением маслянистого твердого вещества, которое очищают хроматографией на сили50 кагеле (элюирование бензолом/этанолом) и растворяют в метаноле. Раствор обрабатывают газообразным хлористым водородом и упаривают в вакууме с получением твердого вещества, которое перекристаллизовывают из этилацетата, 55 получая 400 мг соединения, твердое вещество содержит около 1/4 моль НпО на 1 моль продукта, выход 231; т.пл, 71 72оС
3128
9
ЯМР-спектр (СОС1 ); а" 1,42 (с1, J = 6 Гц, 6, -МНСН(СН ) ).
Элементный анализ:
Вычислено, 4:С 72,02; Н 12,76;
N 2,10.
Найдено, Ф: C 72,89; Н l2,34;
N 2,09.
Пример 12. 1,3-Ди-о-(н-гек". садецил) -2-0-(4-аминобутил) -глицери на гидрохлорид. а) 1,3-Ди-0-(н-гексадецил)-2-0"(З-гидроксипропил)-глицерин.
6,5 мл борано-метилсульфидного
>(БМС) комплекста (68,5 ммоль) добав- ляют при 0-5ОС к раствору 10,82 г
1, 3-ди-0-(н-гексадецил)-2-0-аллилглицерина (18,6 ммоль). Полученный аналогично примеру 11а в гексане ре зультирующий раствор (190 мл) затем снова охлаждают до 0-5 С и для разложения остаточного БМС каплями добавляют 17,3 мл этанола. Реакционный раствор затем обрабатывают 13 мл водной Зн. гидроокиси натрия и 30 вес.3 водной перекиси водорода (11 мл), перемешивают в течение 16 ч при кипении с обратным холодильником, охлаждают и выливают в ледяную воду, содержащую бисульфит натрия. Раствор в ледяной воде перемешивают до тех пор, пока он не дает отрицательную крахмало-иодидную реакцию на перекиси и затем экстрагируют диэтиловым эфиром (3x200 мл). Комбинированный эфирный экстракт промывают 200 мл воды, промывают 200 мл насыщенного раствора хлорида натрия, осушают HQS04, фильтруют и упаривают в вакууме.
Результирующий продукт очищают хро матографией на силикагеле (эллюиро- . вание бензолом/этанолом), 5 г; выход
453; т.пл. 29 С.
ЯМР"спектр (CDCla): Ф 3,80 (t, J = 5 Гц, 2, -ОСН СН СН ОН ) vt 3,75 (t, J = 5 Гц, г, -сн сн сн,он). б) 1, 3-Ди-0- (н-гексадецил) -2-0 Д-(п-тозит)окси)-пропил)-глицерин.
8, 0 г 1, 3-ди-0-(н-гексадецил) -2-0-(3-гидроксипропил)-глицерина (13,4 ммоль) добавляют при 10 С к
5,25 г раствора н-толуолсульфонилхлорида (27,5 ммоль) и 10 мл пиридина в 200 мл метиленхлорида и смесь перемешивают в течение 60 ч при комнатной температуре. Затем добавляют
200 мл воды, разделяют .метиленхлоридную и водную фазы и последнюю экстрагируют метиленхлоридом (2xt50 мл).
Три метиленхлоридных слоя комбиниру-
1О
55 ют, промывают водои (2x150 мл), осу-" шают МОЗОЛЕ, фильтруют и упаривают в вакууме. Результирующий тозилат очи щают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом), 3,0 г; выход
304, масло.
ИК-спектр {СНСl g): 1130 и 1350 см .
ЯИР- спектр (C DC l g): d" 7 53 (q, 4, протоны на фенильном кольце); 4,15 (», 2 «SOgCHgCHg0-) 3,63 (t 2)
-S0@CHgCH tLCH@0-); 3,42 (m, 9, -ОСН {СН ОСН С 4 Н ); 2,45 (s 3 )
Аг-СНЭ) р 1,90 {m, 2, -SOgCHyCH(CH@0-,)и 0,90-1,50 (m, 62, алифатические протоны). в) 1,3"Ди-0"(н-гексадецил)-2-о-(З-цианопропил)-глицерин.
3,0 г 1,3"ди-0-(н-гексадецил)-2-0-3-(и-тозилокси)-пропил"глицерина (4,0 ммоль) растворяют в 0,5 r раствора цианида натрия (610 ммоль) в
50 мп N,N-диметилформамида и результирующий раствор перемешивают в те- чение 16 ч при 80 С, охлаждают, разбавляют 100 мл воды и экстрагируют диэтиловым эфиром (Зх100 мл) . Комбинированный эфирный экстракт промывают последовательно 1н. соляной кислотой (Зх75 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (Зх25 м4 )
75 мл воды и 75 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия, затем осушают lgSOp, фильтруют и упаривают в вакууме с получением 2,0 г аморфного твердого вещества, которое ис" пользуют на следующей стадии без дальнейшей очистки; выход 833.
ИК-спектр (СНС1 }: 2250 см ". г) 800 мг литий-алюминий-гидрида (21 ммоль) добавляют к 2,0 r раствора 1,3-ди-О-(н-гексадецил)-2-0-(3"
-цианопропил)-глицерина (3,3 ммоль) в 100 мл диэтилового эфира и смесь перемешивают в течение .60 ч при комнатной температуре. Осторожно добав- ляют количество воды, достаточное для гашения реакции, с последующим добавлением дополнительных 100 мл воды. Результирующую смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, а затем экстрагируют диэтиловым эфиром (Зх100 мл) . Комбинированный эфирный экстракт промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия (Зх75 мл), осушают HgSOg, фильтруют и упаривают в вакууме до маслообразного продукта, который очищают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом/этанолом) и
12 ме до масла, которое очищают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом/этанолом), а затем растворяют в этилацетате. Раствор обрабатывают газообразным хлористым водородом, а затем упаривают в вакууме с получением 220 r твердого вещества, которое перекристаллизовывают из этилацетата; выход 213; т.пл. 88-90 С.
Элементный анализ; дычислено, 3: С 74,14; Н 11,87;
И 2,01.
Найдено, 4: C 74,35; H 11,54;
N 2,15.
Пример ы 14-25. Аналогично методике примера 13 при использовании в качестве исходных материалов подходящих 1,3- или 1,2-0-(-н-высшеалкил или алкенил)-глицерина и цианого бензилбромида сн О -сн г г
R,0-сн
1 г О t-"Hz
cHz NHz
893128 затем растворяют в этаноле. Раствор обрабатывают газообразным хлористым водородом и после этого упаривают в вакууме с получением 444 г твердого вещества, которое перекристаллизовывают из этилацетата; выход 2lr,; т.пл. 65-63,5 С.
ЯМР"спектр (CDCly): К3,67 (t, 2, -ОСНяСНя.СН2СН 4Н ) 3 55 (m 9
-OCHtCHPOCHgCpgH9$) 1 Зю10 (t p2 °
"ОСИ СН СНgCHyNHg); 1,50 - 2,00 (m, 4, -СОН СН СН CH>NH@) и 0,80-1,50 (m, 62,алифатические протоны) .
Элементный анализ:
Вычислено, 4: С 72 23; Н 12,74;
N 2,16.
Найдено, б: С 62,53; Н 12,42;
Г4 2,10, Пример 13. 1,2-Ди-О-(н-гексадецил) -3-0- (3-аминометилбензил) -глицерина гидрохлорид. а) 1,2-Ди-О-(н-гексадецил)-3-0-(3-цианобензил) †глицер.
1,056 г гидрида натрия (50 вес.Ф дисперсии в минеральном масле, 22 ммоль) добавляют 9,73 г раствора
1,2-ди-О-(н-гексадецил) -глицерина (18 ммоль) в 150 мл тетрагидрофуране и результирующий раствор перемешивают в течение 20 мин при комнатной тем30 пературе в атмосфере азота. Добавляют 4,0 г м-цианобензилбромида (20 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере азота.
Затем осторожно добавляют 200 мл воды и результирующую смесь экстрагируют этила цет атом (Зх150 мл), Комбинированный этилацетатный экстракт осушают MgSO<, фильтруют и упаривают в вакууме с получением 12 г масла, которое очищают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом/гексаном), 8,0 г; выход 683, масло.
ИК"спектр .(СНС1 ): 230 см б) 1,О r раствора 1,2-ди-О-(н-гек- 4> садецил)-3-О-(3-цианобензил)-глицерина (1,5 ммоль) в 10 мл диэтилового эфира медленно добавляют в атмосфере азота к 0,057 r суспензии литий-алюминий-гидрида (1,5 ммоль) в 40 мл 50 эфира и результирующую смесь перемешивают в течение 1 ч при кипении с обратным холодильником в атмосфере азота. Затем охлаждают, осторожно добавляли 50 мл воды и смесь экстраги- у руют диэтиловым эфиром (Зх50 мл). Комбинированный эфирный экстрат осушают
MgSOg фильтруют и упаривают в вакууЕ10- СН
1 снРнг снг — 0-emz I а,o- сНг получают соединения, приведенные в табл. 2.
Пример 26. 1 2-Ди-0-(н-гексадецил) -3-0- (4-аминометилфенил) - глицерина гидрохлорид. а) 1,2-Ди-О-(н-гексадецил)-3-0-(п-тозил)-глицерин.
Аналогично методике примера 13б соединение получено по реакции 1,2-ди-О-(н-гексадецил) -глицерина с и-толуолсульфонилхлоридом. Очистку проводят перекристаллизацией из этилацетата; т.пл. 53-55 С.
ИК-спектр (СНС19): 1360 и 1180 сН б) 1,2-Ди-О- н-гексадецил -3-0-(4-дианофенил)- глицерин, Смесь 1,4 г 1,2-ди-0-(н-гексадецил)-3"0-(и"тозил)-глицерина (2,0 ммоль); 0,5 г 4-цианофенилята натрия (3,5 ммоль) и 100 мл ксилола перемешивают в течение 16 ч при кипении с обратным холодильником. Так как реакция не доходит до конца, ксилол отгоняют и заменяют 100 мл 14,N-диметилформамида и результирующий раствор перемешивают еще в течение
16 ч при 150 С. Реакционный раствор затем охлаждают, разбавляют 100 мл
93128 б) 2,0 г раствора 1,2-ди-0- (н-гексадецил)-3-0-(2,3-эпоксипропил)"глицерина (3,35 ммоль) в 40 мл изопропиламина нагревают в течение 16 ч при 100 С в бомбе из нержавеющей стао ли, охлаждают, концентрируют в ваку45 уме и растворяют в 100 мл диэтилового
13 8 воды и экстрагируют диэтиловым эфиром (2x100 мл). Комбинированный эфирный экстракт промывают последовательно
100 мл Зн. соляной кислоты (10 вес.Ф)
100 мл водного раствора бикарбоната натрия и 100 мл воды, осушают MgSO фильтруют и упаривают в вакууме до масла, которое очищают хроматогра" фией на силикагеле (элюирование бензолом), 0,65 r; выход 50 ; т.пл.
53-55О С.
ИК-спектр (СНС1 ): 2210 см ". в) 0,6 r 1,2-ди-0-(н-гексадецил)"
-3-о- (4 -дианофенил)-глицерина (0,93 ммоль) добавляют к 0,3 г суспензии литий-алюминий-гидрида (7,9 ммоль) в 25 мл диэтилового эфира и результирующую смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем осторожно добавля(ют 25 мл воды, разделяют эфирную и водную фазы и последнюю экстрагируют эфиром (Зх25 мл) и 25 мл этилацетата.
Пять органических экстрактов комби" нируют, осушают NgSO, фмльтруют и упаривают в вакууме до масла, которое растворяют в диэтиловом эфире. Раствор обрабатывают газообразным хлористым водородом, что вызывает осаждение 0,41 r твердого вещества, выход
64Ж, т. пл. 110-112 С.
ЯМР-спеКТр (С0С1 ): о 4,02 (s,2, СНУН ) .
Элементный анализ:
Вычислено, 3: С 73,91; Н 11,81;
Й 2,05.
Найдено, 3: С 73,62; Н 11,71;
N 2,14.
Пример ы 27-29. Аналогично методике примера 26, исходя из подходящего тозилата (полученного аналогично примеру 26а) и цианофенолята натрия я- гексадецил-О-Щ
О ! н-гексадец ил-0- ОНА
1О
25 зо
14
Аналогично методике примера 26 соединение получают при использовании 4-(2-цианоэтил)-фенолята натрия, T.ïë. 153-155 C.
Элементный анализ;
Вычислено, Ж:С 74,37; H 11,91;
N1,97.
Найдено, Ф: С 74,13; Н 11,44;
N 2,08.
Пример 31. 1,2-Ди-о- (н- гек-. садецил)-3-0-(3-изопропиламино-2-гидроксипропил)-глицерина гидрохлорид. а) 1,2-Ди-0-(н-гексадецил) -3-0†(2,3-эпоксипропил) -глицерин.
Раствор 5,8 г 1,2-ди-0-(н-гекса-, . децил)-3-аллил-глицерина (10,0 ммоль} и 1,86,г м-хлорпербензойной кислоты (10,8 ммоль) в 50 мл бензола переме" шивают в течение 16 ч при нагреве до кипения с обратным холодильником.
Реакционную смесь затем охлаждают, обрабатывают 10 мл насыщенного водного раствора бисульфита натрия и
50 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и экстрагируют эфиром (2х50 мл). Комбинированный эфирный экстракт промывают 100 мл воды, 100 мл насыщенного водного раствора натрия, осушают MgSOg, фильтруют и упаривают в вакууме до маслообразного продукта (4,93, выход 823;
ЯИР-анализ показал отсутствие олефиновых протонов), который очищают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом/этилацетатом), 4,2 г; выход 703, в ходе выстаивания масло затвердевало. эфира. Эфирный раствор промывают
100 мл 1 н.соляной кислотой, осушают
ИфО, фильтруют, обрабатывают дреK- гексайцил — СИг- О
I 1 I - "г иг
О СН и -гсксадеиия- О- Н получают соединения, приведенные в табл. 3.
Пример 30. 1,2-Ди-О-(н-гек садецил)"3-0-(3-аминопропил)фенилглицерина гидрохлорид.
55 весным углем, снова фильтруют, а затем охлаждают погружением колбы в ванну сухок лед-ацетон, в результате чего образуется осадок. Фильтрацией выделяют 1,3 r осадка и очищают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом/этанолом), 720 мл. Получают твердое вещество, содержащее около 1/2 моль НоО на 1 моль продукта, выход 31 1; т. пл. 55-57 С.
8931?8
ЯМР-спектр (СОС1 y): d 1 45 ("
-NHCH СН, ).
Элементный анализ:
Вычислено, 3: С 70,19; Н 12,50;
N 2,00. 5
Найдено, 4: С 70,10; Н 12,19;
N 1,87.
П р и и е р ы 32-25. Аналогично методике примера 31 путем реагирования подходящего 2,3-эпоксида (полу" 10 ченного аналогично примеру 31а) и алкиламина я — ге к са деи ил — 0 — СН
ОН ."О
Сч — СН-CH -N, Н вЂ” тек са дец ил — Π— QH у — г ексадецил — СН вЂ” Π— CHyLHCHyNHQy го
Π— СН
Ф и — аекси Оеиил — 0 — СН., получают соединения, приведенные в табл. 4, Пример 36. 1,2-Ди-О-(н-гексадецил) -3-0- (3-амино-2-гидроксипропил) -глицерина гидрохлорид. а) 1,2-Ди-О- (н-гексадецил) -3-0-(З-азидо-2-гидроксипропил)-глицерин.
Раствор 0,5 г азида натрия (77 ммоль) в 5 мл воды добавляют к нагревающемуся до кипения с обратным холодиль,ником раствору 3,3 г .1,2-ди-0-(н-гексадецил) -3-о- (2, 3-эпоксипропил) -глицерина (5,5 ммоль) в 100 мл 1,4-диоксана. Результирующий раствор перемешивают при кипении с обратным холодильником в течение 16 ч. Так как реакция не завершена, добавляют 0,5 г
40 азида натрия (7,7 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при кипении с обратным холодильником еще в течение 16 ч, Реакционный раствор затем охлаждают, концентрируют в вакууме, разбавляют 100 мл воды и экстрагируют эфиром (3х100 мл) . Комбинированный эфирный экстрат промывают 100 мл .воды, осушают MgSO, фильтруют и упаривают в вакууме до получения 2,2 г маслообразного продукта; выход 62
ИК-спектр (СНС1y): 2105 см ". б) 300 мг литий-алюминий-гидрида (7,9 ммоль) добавляют к раствору 2,2 г
1,2-ди-О- (н-гексадецил)-3-О-(3-азидо- ss
-2-гидроксипропил)-глицерина (3,4 ммоль в 100 мл эфира и результирующую смесь перемешивают в течение 1 ч при комC натной температуре, 5 мл этанола и
200 мл воды добавляют для тушения реакции, и смесь затем экстрагируют эфиром (2x100 мл) . Комбинированный эфирный экстракт осушают MgSO<,фильтруют и упаривают в вакууме. Результирующий продукт очищают хроматогра" фией на силикагеле (элюирование бензолом/этанолом), а затем преобразовывают в гидрохлоридную соль. Получают 800 мг твердого вещества, содержащегося около 2 моль Н20 на 1 моль продукта; выход 343: т,пл. 149-150 С.
ЯПР-спектр (coc13): б" 4,00 — 4,35 (m, 1, -OCHg CHPCHCH@NH g); 3,33-3 73 (m, 11, Слр Н лСН ОСН СН ОСН С ф Н ОСН )
3,03-3,25 (и, 2, -OCH CHOHCHgNHg) и
0,87-1,67 . (m,62, алифатические протоны), Элементный анализ:
Вычислено, 3: С 66,48; H 12,33;
N 2,04.
Найдено, 3: С 66,68; Н 11,85;
N 2,02.
Пример 37. 1,3-Ди-О-(н-гексадецил)-2-0-(3-амино-2-гидроксипропил)-глицерин.
Аналогично методике примера 36 из 1,3-ди-О-(н-гексадецил)-2-0-(2,3
-эпоксипропил)-глицерина (получено аналогично примеру 31а) получают своо бодное основание; т.пл. 61-63 С.
Элементный анализ:
Вычислено, 1: С,4,3; Н 12,96;
М 2,28.
Найдено, б: С 74,49; H 13,10;
N 2,12.
П р и и е р 38. 1,2-Ди-О-(н-гексадецил) -3- О-(2-аминопропил) -глицери на гидрохлорид. а) 1,2-Ди-О-(н-гексадецил) -3-0-(2-(и-тозилокси) -пропил)-глицерин
Аналогично методике, описанной в примере 12 1,2-ди-0-(н-гексадецил)-3-о-аллил-глицерин вводят в реакцию с БНС и результирующие 2-гидроксипропильное и 3-гидроксипропильное соединения преобразовывают до их соответственных тазилатов. На этой стадии разделения не производят, так как смесь тозилатов непосредственно используют на следующей стадии. б) 1,2-Ди-0-(н-гексадецил) -3-0-(2-азидопропил)-глицерин., 3,0 г результирующей смеси тозилатов (4,0 ммоль) растворяют в 50 мл
N,N-диметилацетамида и обрабатывают раствором 0,326 г азида натрия (5,0 ммоль) в 5 мл воды в течение
89312
35
16 ч при 90 С. Реакционный раствор затем охлаждают, разбавляют 200 мл воды и экстрагируют эфиром (2x150 мл).
Комбинированный эфирный экстракт промывают водой, осушают MgSO,фильтруют и упаривают в вакууме до получения 2 г масла (выход 813; ИК-спектр (СНС1 ) 2 100 см ") - смеси 2"азидо-. пропилового и 3-азидопропилового соединений, которые без дальнейшей очи- 1о стки используют на следующей стадии. в) 2 г результирующей смеси азидов (3,2 ммоль) растворяют в 100 мл эфира, обрабатывают 0,4 г литий-алюминий-гидрида (10,5 ммоль) и продолжают t5 перемешивать в течение 2 ч при комнатной температуре. Избыток гидрида разлагают осторожным добавлением
10 мл этанола и 150 мл воды. Затем смесь экстрагируют эфиром (2x100 мл).
Комбинированный эфирный экстракт осушают MgS04 фильтруют и концентрируют в вакууме до получения 1,8 r масла, которое очищают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом/этанолом), а затем преобразуют до гидрохлоридной соли растворением и обработкой газообразным хлористым водородом. Соль перекристаллизовывают из этилацетата и получают 0,21 r зо т вердого веще ст ва, содержащего около
1/2 моль Н О на 1 моль названного продукта; выход 10i; т.пл. 56-58 С.
Элементый анализ:
Вычислено, I: С 71,03; Н 12,70;
14 2,18.
Найдено, <о С 71,11; Н 12,91;
14 2,16.
Пример 39, 1,2-Ди-О- (н-октадецил) -3-0- (2-аминопропил) -глице40 рина гидрохлорид, Аналогично методике, описанной в примере 38 а, 1,2-ди-0-(н-октадецил)-3-О-(2-гидроксипропил)-глице,рин получают из 1,2-ди-О-(н-октадецил)-3-О-аллил-глицерина. Из 1,2"ди45
-0- (н-октадецил) -3-0- (2- гидроксипропил)-глицерина путем, аналогичным описанному в примере 38 получают твердое вещество, содержащее около 1 моль
Н О на 1 моль продукта; т,пл. 65оС
Элементный анализ:
Вычислено, б: С 71,19; Н 12,80;
М 1,98.
Найдено, /: С 71,12; H 12,52;
N 1,93.
Пример 40. 1,2-Ди-0-(н-гексадецил) -3-0- (3-(1-гидрокси-2-трет8 18
-бутиламиноэтил) -бензил1-глицерина гидрохлорид. а) 1,2-Ди-О-(н-гексадецил) -3-0-(3-Формилбензил)"глицерин.
5 г раствора 1,2-ди-О-(н-гексадецил)-3-О-(3-дианобензил)-глицерина (7,6 ммоль) и 1,17 г диизобутилалюминийгидрида (8,2 ммоль) в 25 мл бензола перемешивают в течение 16 ч при температуре окружающей среды.
Реакционную смесь обрабатывают 4,22 мл метанола и 2,5 мл воды и перемешивают при разложении непрореагировавшего гидрида, а затем фильтруют и экстрагируют бензолом (3x25 мл). Комбинированный бензольный экстракт осушают Ма 504, Фильтруют и упаривают в вакууме до масла, которое очищают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом), 2,0 г; выход 40 масло.
ИК-спектр (СНС1 ) : 1700 см .
ЯМР-спектр (C0C1 ): d" 10,1 (s,1, .
-АгСН 0) . б) 1,2-Ди-Î- (н-гексадецил) -3-0-(3-(1,2-эпоксиэтил)-бензил)-глицерин.
Суспензию 3,23 r гидрида натрия (57 вес.4 дисперсии в минеральном масле, 67 ммоль) в 117 мл диметилсульфоксида нагревают в атмосфере азота при 70-75 С до тех пор, пока не прекращается выделение водорода (45 мин) .
Добавляют 88 мл тетрагидрофурана и смесь охлаждают до О-5 С. Затем порциями добавляют 13,67 г триметилсульфонийиодида (67 ммоль) с последующим быстрым добавлением раствора 7,0 r
1,2-ди-О-(н-гексадецил)-3-0-(3-формилбензил)-глицерина (10,6 ммоль) в 58мл тетра гидрофурана. Ре зул ьт ирующую смесь перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре, выливают в 200 мл воды и экстрагируют эфиром (3x180 мл) . Комбинированный эфирный экстракт промывают водой (2х100 мл) и 100 мл насыщенного водного раствора . хлорида натрия, осушают MgS04, фильтруют и упариваат в вакууме до получе>ния 7 г масла (выход 9U ) ° которое достаточно чисто для использования на следующей стадии. в) Смесь 30 мл трет-бутиламина и
2 г 1,2-ди-О-(н-гексадецил)-3-0-3-(1,2-эпоксиэтил) -бензил-глицерина (3,0 ммоль) нагревают в течение 9 ч при 1000С в стальной бомбе. Реакцион" ную смесь охлаждают, трет-бутиламин удаляют отгонкой в вакууме, и резуль19
89312
К-О-СН !
R - О - СН г
СН НН
Н С енил
55 тирующее масло ощичают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом/эт анолом), а затем растворяют .
Раствор насыщают газообразным хлористым водородом, а затем упаривают в вакууме с получением твердого вещества, которое перекристаллизовывают из этилацетата. Получают 630 мг твердого вещества, содержащего около 1 моль
Н О на 1 моль продукта, выход 27ь; 1о т. пл. 49-51 С.
ЯМР-спектр (CDCIg): d" 1,47 (s,9, -С СН1,) .
Элементный анализ:
Вычислено, Ф: С 71 99; H 11,83;
N 1,75 °
Найдено, б: С 71,86; Н 11,30;
N 1,69 °
Пример .41. 1,3-Ди-О-(н-гексадецил) -2-0- (3- (1- гидрокси-2-трет-бутиламиноэтил)-бензил)-глицерина гидрохлорид.
Аналогично методике, описанной в примере 40, 1,3-ди-О-(н-гексадецил)—
-2-0-(3-цианобензил)-глицерин, полученный аналогично методике примера
14, преобразовывают до 1,3-ди-О-(н-гексадецил)-2-0-(3-(1,2-эноксиэтил)-бензил1-глицерина. По реакции указанного эпоксидного соединения с трет-бутиламином с использованием методики примера 48в получают твердое вещество, содержащее около 1 моль
Н О на 1 моль продукта; т.пл. 4345 С
Элементный анализ:
Вычислено, 3: С 71,99; Н 11,83;
N 1,75.
Найдено, Ф: С 72,06; Н 11,43; и 1,71.
П р и и е р 42. 1,2-Ди-Î-(н"гексадецил)-3-0- (3-гидрокси- (2-изопропил аминоэтил)-бензил1-глицерина гидрохлорид.
Аналогично методике, описанной в примере 40в, при использовании изопропиламина вместо трет-бутиламина получают твердое вещество, содержащее около 3/4 моль Н00 íà I моль продукта; т.пл. 53-55 С.
Элементный анализ;
Вычи слено,:!: С 72, 17; Н 11, 79;
N 1,79.
Найдено, 3: С 72,11; Н 11,55;
N 1 92 °
8 20 а) 1-(2, 3-Ди- (н-гексадецилокси)--пропил)-4-циано-4-фенилпиперидин, Смесь 6,96 г 1,2-ди-О-(н-гексадецил)-3-0-(и-тозил)-глицерина (10 ; 1.13 r 4- диано-4-фенилпиперидина гидрохлорида (10 ммоль);
2 мл триэтиламина и 40 мл N,N-диметилформамида перемешиваот в течение
16 ч при 95-100 С . Реакционную смесь затем охлаждают, разбавляют 200 мл воды и экстрагируют этилацетатом (3x150 мл) . Комбинированный этилацетатный экстракт осушают Ид504 . Фильтруют и упаривают в вакууме до получения 6 г масла, которое очищают хроматографией в колонке (элюирование бензолом/этилацетатом).
ИК-спектр (СНС1 ): 2220 см б) Раствор 2,5 г 1-(2, 3-ди-(н-гексадецилокси)-пропил} -4-циано-4-фенилпиперидина (3,6 ммоль) в 100 мл диэтилового эфира обрабатывают 0,4 r литий-алюминий-гидрида (10,5 ммоль) и результирующую смесь перемешивают в течение 4 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь осторожно обрабатывают 100 мл воды и экстрагируют эфиром (3x100 мл). Комбинированный эфирный экстракт осушают HgS04, фильтруют и упаривают в вакууме до масла, которое очищают хроматографией на силикагеле (элюирование бензолом/этанолом), а затем растворяют.
Раствор обрабатывают газообразным хлористым водородом, а затем упаривают в вакууме с получением твердого вещества, которое перекристаллизовывают из этилацетата и получают 1, 1 г твердого вещества, содержащего около
3/4 моль Н О на 1 моль продукта; выход 404; т.пл. 132-134 С.
Элементный анализ:
Вычислено, Ф: С 70,60; Н 11,53;
3 50 °
Найдено, ь: С 70,74; H 11,35
П р и м е .р ы 44-46. Аналогично методике, описанной в примере 43, исходя из подходящего 1,2-ди-О-(н-алкил или алкенил)-3-0-(и-тозил)-глицерина
П р и м, е р 43. 1- (2,3-Ди(н-гексадецилокси) -пропил)-4-аминометил-4-фенилпиперидина дигидрохлорид. полученного по методике примера 26а, получают соединения, представленные в табл. 5.
35
Противовирусная активность выражается как относительная выживаемость
Sr в экспериментальных группах в сопоставлении с контрольной на десятые сутки после заражения и определяется
50 по формуле
<о
5 + Х
S = " ""«100
100+100 где Sr - коэффициент относительной выживаемости;
8931
Соединения, полученные предлагае-: мым способом, проявляют противовирусную активность по отношению к широкому диапазону разновидностей вирусов
1п vivo в организме млекопитающих и
in v1tro для культур тканей млекопитающих. По меньшей мере в значительной части эта активность связана со способностью указанных соединений индуцировать выработку интерферона щ в клетках, т.е. эндогенного интерферона.
Il р и м е р 47. Активность in vivo
1,3-ди-0-(н-гексадецил)-2-0-(3-аминопропил)-глицерина гидрохлорида в отношении ЭИК-вируса.
Препарат в виде эмульсии получают путем сплавления и смешивания равных частей названного соединения, поли" сорбата-80 и глицерина с последующим диспергированием смеси в горячей воде при интенсивном перемешивании.
Препарат затем доводят до окончательных концентраций добавлением 0,1 И хлорида натрия и 0,01 И фосфата натрия, рН 7. Дальнейшее разбавление производят буферным раствором рН 7, смесью О, 14 И хлористого натрия и
0,01 И фосфата натрия.
Трем группам по десять самок белых мышей (вес тела 20-25 r) внутрибрюшин« но делают инъекции 0,5 мп препарата, содержащего дозировки 1 5; $ и 15 мг названного соединения на 1 кг веса тела, соответственно. Четвертой, контрольной, группе мышей инъекций не делают. Спустя 18-24 ч, всем четырем группам делают подкожно инъекции 0,2 мл препарата, содержащего
20- кратную дозу L Р кп вируса энцифаломиокардита (ЭИК) . На протяжении
10 сут. регистрируют данные на выживаемости и рассчитывают коэффициент относительной выживаемости Sr, приведенный в табл. 6.
28
s - процент вйживания спустя десять суток в экспериментальной группе;
x; - число выживших особей на !
-e.сутки в экспериментальной группе;
Ы - число выживших особей на
i å сутки в контрольной группе.
Примеры 48-70.
8 соответствии с методикой примера 47 проводят определение активности in vivo в отношении 3МК-вируса для соединений, приведенных в табл.7.
Пример 71. Снижение выхода вируса нв человеческих полипозных клетках 1п ч 1 го под действием 1,3-ди-0"(н-гексадецил}-2-0-(3-аминопропил)-глицерина гидрохлорида.
Среда для выращивания получена дополнением 100 мл минимальной питательной среды Игла, 2 мп концентрированного 100х раствора антибиотикафунгицида, 1 мл 200 «И раствора глютамина, 1 мл концентрированного
100 Х раствора несущественных аминокислот, 1 мл 100 «й раствора натриевой соли пировиноградной кислоты и
104-ной термоинактивированной сывороткой плода стельной коробы. На каждую ячейку 96-ячеечных микротитровальных чашей высевают около 50 000 человеческих полипозных клеток носовой полости, суспендированных в
0,2 мл среды для выращивания, Чашки затем инкубируют в течение 8-10 сут при 37 С в атмосфере 53 COg для формирования монослоев клеток. К концу
8- 10 суточного периода выращивания клеток сливающиеся монослои на чашках промывают четырехкратно фосфатным буфером и непосредственно после этого обрабатывают 0,2 мл на ячейку поддерживающей среды, содержащей
10; 5,6; 1,0; 0,5; 0,1 и 0 мкг/мл названного соединения, соответственно. Поддерживающая среда идентич" на,среде для выращивания, за исключением того, что уровень содержания сыворотки плода стельной коровы сос-, тавляет 23.
Чашки инкубируют в течение еще
18 ч при 37 С, и монослои затем четыо рехкратно промывают фосфатным буфером для удаления названного соединения, контактируют с составом, содер" жащим приблизительно 1000-кратную дозу ТС1к, вируса пузырькового стоматита (ВПС) в течение 2 ч при
23 89
37 С периода адсорбции, четырехкратно промывают фосфатным буфером для удаления неадсорбированных вирусных частиц и вновь наполняют 0,2 мл поддерживающей среды на ячейку. 3атем чашки инкубируют в течение 7 ч при 37 С и с каждой чашки снимают культурную среду с 5-8 ячеек-дубликатов, хранят в замороженном виде в пробирках, а затем титруют на определение количества инфекционного вируса, присутствующего в микротитровальных чашках мышинных фибробластов.
Иышинные (L-929) культуры подсчитывают под микроскопом и анализируют три-четыре дня спустя с выявлением следующего процентного снижения выхода вирусов (относительно контроля) для пяти концентраций испытанного соединения:
Процентное снижение выхода вируса показано в табл. 0.
Пример ы 72-99. С использованием методики, описанной в примере 71, снижение выхода вируса на человеческих полипозных клетках in
vitro определяют для соединений, перечисленных в табл. 9.
Пример !00. Способность 1,3-ди-0-(н- гексадецил)-2-0-(3-аминопропил)-глицерина гидрохлорида индукцировать циркуляцию интерферона, Смесь равных весов соединения, полисорбата-80 и глицерина сплавляют, а затем гомогенизируют в горячем 0,14 И хлориде натрия, содержащем 0,01 И фосфат натрия (фосфатный буферный солевой раствор - ФБС), рН 7. Результирующую эмульсию типа масло в воде легко разбавляют перед употреблением ФБС-раствором.
Самкам белых мышей (весом тела 2026 г) внутрибрюшинно делают инъекцию
0,5 мл эмульсии, содержащей 25 мг исследуемого соединения на 1 кг веса тела ° У четырех мышей отбирают и накапливают образцы плазмы через 8,12, 16 и 20 ч после инъекции. Последовательно разбавляя в среде Лейбовина
L-15, содержащей сыворотку плода стельной коровы, образцы инкубируют в микротитровальных чашках на протяжении ночи при 37 С, на сливающихся монослоях мышинных (L-929) фибропластов. Ионослои затем промывают депротеинизированной средой, контактируют с 10-кратной TCl О р вируса пузырькового стоматита (ВПС) на протяжении одночасового периода адсорбции при
3128 24
37 С, промывают, вторично обрабатывают средой L-15, содержащей 5i-ную сыворотку плода стельной коровы, а затем инкубируют снова при 37 С в течение 48 ч. Культуры L-929 затем подсчитывают под микроскопом на предмет выявления вирусной цитопатологии и анализируют с целью определения по уровню содержания интерферона в плазме обратной величины разбавления плазмы, обеспечивающего 504-ную защиту монослоев L-929.
Второй эксперимент проводят в соответствии с описанной методикой, исключая то, что мышам делают инъекцию 10 мг исследуемого соединения на
1 кг веса тела и у четырех мышей отбирают образцы внутрибрюшинной жидкости с их накоплением через 6,9 и
12 ч после инъекции. Образцы отбирают путем обнажения диафрагмы, инъекции
1 мл сбалансированного солевого раствора Ханка, содержащего 100 ед/мл пеницилина и 100 мкг/мл стрептомицина, в брюшную полость, короткого массажа живота и засасывания внутрибрюшинной жидкости.
Результаты приведены в табл. 10
Пример ы 10 1-105. Используя методику, описанную в примере 100, определяют способность индуцировать циркуляцию интерферона для соединений, приведенных в табл. 11.
Пример 106. Усилие под действием 1,3-ди-0-(н-гексадецил) -2-0-(3-аминопропил) -глицерина гидрохлорида индуцированной полиинозиновой-полицитидиловой кислотой (поли 1:1) клеточной резистивности в отношении вирусной инфекции.
1О
20
35
4О
Среда для выращивания получена дополнением 100 мл минимальной пита = тельной среды Игла 2 мл 100х концент45 рированного антибиотик-фунгицидного раствора, 1 мл 200 мИ раствора глютамина и 5i термоинактивированной сыворотки плода стельной коровы, Иышиные фибробласты L-929 суспендируют в среде для выращивания, и каждую
50 ячеику 96-ячеечных микротитровальных чашей засевают 0,2 мл указанной суспензии, содержащими 20 00030 000 клеток. Чашки инкубируют в течение 2-4 ч при 37 С в атмосфере
55 c"";
СО для формирования монослоев клеток. Чашки четырехкратно промывают фосфатным буфером непосредственно
I перед обработкой.
25
Полиинозиновую-полицитидиловую кислоту (поли 1: 1) подготавливают с концентрацией 5,0; 1,0; 0,2 и
0,04 мкг/мл в описанной среде без телячей сыворотки. 0,1 мм каждого разбавления комбинируют на решетчатой конструкции на монослоях клеток
L-929 с 0,1 мл разбавлениями, содержащими 20,0; 4,0; 0,8; 0,16 и 0,032 мкг исследуемого соединения на 1 мл бессывороточной среды. Контрольные ячейки заполняют только либо поли (1:С), либо названным соединением. Чашки инкубируют в течение 6 ч при 37 С в атмосфере 53 СО, четырехкратно промывают фосфатным буфером, и снова заполняют 0,1 мл на ячейку среды для .выращивания, содержащей 24 сыворот" ки плода стельной коровы. Спуся 18 ч инкубирования производят подсчет с целью определения токсичности, а затем заполняют ячейки 0,1 мл на ячейку суспензии вируса пузырькового стоматита, содержащей 10-30-кратную дозу ТС1 о . Чашки инкубируют в течение еще 3-4 сут, а затем под микро893128 скопом подсчитывают цитопатогенный эффект (ЦПЭ), Защищенные от вирусной инфекции клетки не характеризуются наличием ДПЭ. Определяют минимальную защитную дозу (ИЗД) для поли (1:С), а также величину усиления противовирусной активности, вызванного комбинированием с исследуемым соединением и зарегистрированную для каждого разбавления соединения.
Усиление индуцированной поли (1:С) клеточной реэистивности в отношении вирусной инфекции под действием соединения приведено в табл. 12. .П р и м е ч а н и е: комбинирование поли (1:С) с соединением обеспечивает тот же противовирусный эффект; что и увеличение концентрации поли (1:С), укаэанное по кратности.
Пример ы 107-132, С использованием методики, описанной в примере 106, определяют усиление индуцированной поли (1:С) клеточной резистивности в отношении вирусной инфекции соединений, приведенных в табл.13.
ОЪ (V
С4 л
Ю
Р4
СО С(С4
СО л
СЧ
Л 0Ъ
CV CV
С
30 (g
1л
СЧ ъ.0
СЗЪ
CV л
« л
Ю л
tV л
Ю л (.3\
0 Ъ л
Ю л
LA
OO
ЪСЪ
См 1 л
Ф О
Ю
С (-4
СМ
ЪО л
Ю
LA
СЧ
0Ъ
CV о
СЧ
-:т
С3О л
С (л л
°
ОЪ
МЪ (3
CD
CO
СЧ
-аC) (""\ л
CD
ЪО л
ЪСЪ
О о
LA
Ю л
Ю
ЪО
Ю л
LA
I (л
ССЪ
LA
ЪО
-3
ЪО
CO л
"0 л
0Ъ
Ю
01 о с с
С )
° СЪ
I—
СЦ (g
CL
К с
Оо х ((3 с
С(с
>Ъ
X а о
СЭ х о .о( аоЪ
Ю
СХ1 4 и
С Э х х оСЪ
Ю тt х
° 3
ССЪ
С ) I
I
1
1
I
I
1
Г с
Х
Э ч а (Э
I(S
=т
Э
С-Г
Щ о
Э
I
z с
Э ч
fg
IФ
I—
z (S т
Э а
Щ (М
cj
z с
g3 ч (g
3М
Ю
Ц
Э ч о
С-"Т
z („
Э ч
Cg
1»
Э
31
z с
Э ч
Э
I
z с
Э ч
Cl
IЭ
II
z с
Э а
1х
C)
1 х (S
Э (а
Ir
Ю
С
Э ч о са
1 а о х
О
K о
S а
1
1
1
I
I
l
I
I
I
I
I
1
1
1
I оФ л
Сс3
S с
tg
fg
)S
2i
Iz
Э
Э
Ц
СЪЪ
1 1 (1
I Z !
1 1 э х а ь
>Я 1 I (33 9(z ! 1
1 о
1 1
1 !
1 1
l 1
3 I
Э 1 с
v х
S I I
1 3
С(Ь. 1
d! l I
1 1
1 О l
1 I
1 I
1 I
1 ! 1
I Э
ЭХЭ
OS S l
О cK z
l а
ЭЪ с
C) 4
С (ССЪ
СЭ х лГ
° СЪ
Ю
° оЪ
О х
893328
Ю 4
X:
С 3 х
ССЪ
C)
Ъl х
ЪСЪ (3 сI х
-э.
О Ъ
Л
СЪ х (ЪЪ
Ю
I» х
СО о4 ъ
С 3
Ю 4
С.Э о й
ССЪ
СО х 4
-3(Э
893128
1Ч о а м м. Ф
t4
CI
Ch.м
Ф
° О
» м Ф м
Ю м м
Ф
МЪ
O м
° »
1Ч
0Ъ
Ф
O и с (CI ф (ЫЪ
1Ч
IA иЪ
° «
OI
ФЪ о
С1 м
Ю м л
OD
Ф
° «
Ф л л
-Ф
0Ъ
Ф м л м м
»
° Ф л о
МЪ
Ф
Ф л л в
til а о
Ю
ФЧ
Ф
1Ч о
Ф м
Ф м м
4Э л
CCI
° ь
1Ч
t«I
».э
» м л
К) о
° 4Г л о.IA
В л о м м
1« м л м
1 м м
РЪ
1«
1«
° с
1 л
СЧ Э з о, -з;.
IJ
° Ю
LJ а
СЭ
Ж
° 2 в4Ъ о
° A . CO
М
Ф
Ф.Э к
Ъ
Р
3t.1J х
Ъ т
С3 т
D
CD
Х ф
CL
O о О О
Л о о8
Ф а
С
Ф
Ф
8 з
Ф
5
IJ х
Ф
1 х
1
O
I а и х
I»
В х ° М о о
1O
1»
Z (1Ч
°
Ф ° иЪ
4Ч
Ж
° 1Ч р с
1 1
I о
И
° Ф
Ф,Э
Д
О з
° Ф ъ
IJ з л о бЪ Ф
Ф В
«Ф л л о о м аФ- . tX и
1- е
Ю УЪ
1
Ф
В о м
Ф
3 й
Ф 5 о
1 1 з и .Ф
«Ф м
LJ х
М 43 о
МЪ х
У
Ф
О
Ф о
1
32
893128
Таблица 3
«««««« « «
° «« «
Элементный анализ
««\ «««ЮВ«
Струк
Фура
Температураплавnews, С
Иолекулярна формула найдено с 1н (н
27 1 Мета
28 1 Пара
78-80 73н91 11 ° 81 2,05 74 11 11 64 2,44
120-122 73э91 11,81 2,05 73,94 11,37 2,04
29 2 Мета
84-86 73,91 11,81 2,05 74,00 11,34 2,04
Таблица 4, Элементный анализ Ф
Молекулярная формула
Т.пл.
ОС
Струк" тура рассчитано найдено
1 1 (Г
С Н N С Н й
68,97 12,44 2,01 69,35 12,08 1,94
32 1 СН СН 1, С40 Н8Ъ04М. НС1 53 "54
33 1 "СН (СН й-С+1-Н8504N, НС1- - 67-68
34 1 -С(CHA C4gH3704N.НС! 60-61
7 I,10 12,52 2,02 70,54 12,18 2)05
71,39 12 55 1 98 71н55 12 35 1 79
35. 2 -С(СН ) 01Щ Н т04 1.HC1.,. .1/2 К О 50 51
70,49 12,53 1;96 70,66 12,31 1,83
Таблица 5
° Ф
Элементный анализ, Ф
Темпе" рату" ра плаа" ления оС рассчитано
Молекулярная формула
С H й
«««Ю «««««««««
\ 44 н-Тетрадецил 04 КоаО И .2НС1 . 140-142 9,46 11,25 3,75 69,45 11,00 3,45
71,95 11,60 3,29
45 н-Октадецил С „Н 8 00М .2НС1 115-117.
46 н-Октадец"9" енил С, H< Q
71,17 11,23 3,25
Таблица 6
Sr (средняя величина по 7 опытам) Доза соединенияя, м Г/ кг
При" ме р, (Пример, Ф и/п
Пример, И . и/и г
Замещение на фенильном кольце
СПH790SNo НС1
С40 Н780 йe НС1
Cq@H7)0 N. НС1
°,\щ «« рассчитано с (н н
61
71,67 11 19, 3 38
71,06 1о,84,,3 09
34
893128
Таблица 7
Соединение, полу- Sr (для дозировки, мг/кг
При" мер, Р n/п ценное в примере
М .. 15 5 1 5 05
13
17
20
22
24
26
33
27
29
43
44
46
16
20 6
26
32
28
Таблица 8
Концентрация соединения,мкг/мл 100 5,0 1,0 0,5 0,1
Снижение выхода вирусов, 94 90 84 75 68
48
49
51
52
53
54
56
57
58
59
61
62
63
64
66
67
68
69
71 49
62 47
80 72
74 46
57 42
64 58
74 44
46 7
45 5
70 36
37 31
44 30
68 43
66 45
68 28
60 63
53 34
56 35
77 58
76 85
52 42
79 72
99. 26
20 6
20
15
4
12 0
17
36
893128
Т а б л и ц а 9
Соединение, полученное в примере
Пример
Р и/и
ND
ND
ND
ND
13
17
ND
+.МО
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
Примеч
72
73
74
76
77
78
79
81
82
83
84
86
87
88
89
91
92
93
94
96
97
98
19
21
22
27
29
31
32
33
3"
36
38
39
41
42
43
44
Процентное снижение выхода вируса для концентрации, мкг/мл) н и е: + - снижение более 684; + - снижение около 68О;; снижение менее 68 ;; NO - не определялось.
38
893128
Табли ца 10
Содержание интенферона ед/мл
Источник интерферона анутрибрюшинная жидкость 16 - 768 320 448
448
Таблица 11
Содержание интерферона во времени после инъекции, При- Соединение мер, полученное
N в примере и/и
6 9 12 15 18
109 284 312 224
100 120 100 (13
Таблица 12
Усиление резистив ности
125Х 125Х 125Х 5Х 5Х
Таблица 13,0
107
108
13
109
110
101 13
102 14
103 15
104 . 23
105 . 43 период времени после инъекции,ч
6 8 9 12 15 16 18 20
Плазма - 34 - 67 - 52 - 40
Содержание интерферона во времени после инъекции, ед/мл (20 23 75 90 (13 (1 3 39 35 72
20 71 54 68 (1 8 (1 8 43 59 32 (18 138 217 163 (1 3 (1 3 43 92 57 (20 28 60 70 (1 3 (13 91 109 50
Соединение,мкгlмл 20,0 4,0 0,8 0,16 0,032
893128
Продолжение табл 13
112
113
114
18
1g
l l6
117
118
119
120
121
122
123
124
126
127
128
129
131. 132
При ме чан и е:+-усилениеболее5;
+ - усиление около 5;
- усиление менее 5. формула изобретения
23
24
26
27
28
29
38
39
43
44
Способ получения аминопроизводных глицерина общей формулы 1 " сНг © сн, a
СМ,ORZ где один из Q" или Q является
-0-Y-ИИВ -группой, а другой - ORãðóïna;
В1 и Ry являются алкилом С11»10или нормальный алкенилом С о, не имеющим двойной связи в положении 1;
Y - алкилен Сг,, причем две его валентности отнесены к разным атомам углерода, о-, м-, или п-фенилендиметилен и о-, м-, и- 1 (CHg) где q - целое число 1-3, а левая связь присоединена к 0;
R g- вОДОрОД или эл кил С г или их солей, отличающийся тем, что соединение формулы
Ргг я.
СН.— Q"
СН OR2, 893128
1 (сыг)% 1!
Составитель Н. Анищенко
Техред A. Савка Корректор М. Пожо
Редактор Г. Кацалап
Заказ 11292/88 Тираж 446 Подписное
8НИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент",г. Ужгород, ул. Проектная, 4
41 где один из Q u Q является R„=0, 4 а другой - OY -Сй-группа или -OYtlg1
CR группа, где J -алкилен С, 1 где левая связь присоединена к 0 и где левая связь присоединена к О, и R -водород, восстанавливают путем
4 г каталитической гидрогенизации или комплексным гидридом щелочного металла и полученный продукт выделяют в виде свободного соединения или соли или алкилируют в случае, когда R ú в соединении формулы 1 означает алкил
С2-ф"
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Авторское свидетельство СССР
N 565350,.кл. С 07 С 93/00» 19.04.74.
