Штамм lастовасillus асidорнilus 578-продуцент бактериоцина а-578
Союз Советскик
Социалистических
Республик
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ
«»896071 (61) Дополмительмое к авт. сеид-ву(22) Заявлемо 24.0380 (21) 2899389/28-13 с присоединением заявки М— (23) Г1риоритет— (51)М. Кл
С 12 P 1/04 С 12 P 1/04
С 12 R 1/23
Государственный комитет
СССР по делам нз брений и открытий
Опубликовано 070182. Бюллетень М1
Дата опубликования описания 0701.82 (53) УДК 576.8.094 (088. 8) (72) Автор изобретения
В.A. Филиппов (71) Заявитель
Полтавский медицинский стоматоло институт (54) ШТАММ LACTOBACILLUS АСХ0ОРНПЛ$
578 — ПРОДУЦЕНТ БАКТЕРИОЦИНА A-578
Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма — продуцента бактериоцина.
Известен штамм LactobaciKCus aciЙорЫ.сиз 574 — продуцент бактериоцина A-574 fl).
Однако известный штамм, продуцирующий бактериоцин, не проявляет активность в отношении культур.
Цель изобретения — новый штамм
ЬассоЬас10сцз qcidophifus,lnpopyцирующий бактериоцин активный против культур LpCantarum.
Предложенный штамм LactobaciCCus
acidophiCus 578 выделен из слюны человека.
Штамм LactobaciLCus acidophifus
578 (хранится в Музее культур йромыаленных микроорганизмов института ВНИИгенетика под номером
ЦМПМВ-1910) — продуцент бактериоцина A-578.
Культурально-морфологические признаки. На среде MPC-1 (48-часовая культура) представляет собой полиморфные палочки 5-7 0,6-0,8 мкм, располагающиеся поодиночке и попарно последовательно с закругленными концами. Волютиновых вверен не образуют.
Грамположительны. Спор и капсул не имеют. Неподвижны.
Ацетатный агар. Через 72 ч роста при 37 С в атмосфере углекислого газа образуют до 2 мм в диаметре, круглые, сероватого цвета колонии, со слабовыпуклой ., морщинистой, тусклой, сухой поверхностью, полупрозрачные, с волнистым краем, волокнистой структурой, плотноватой консистенции.
Среда МРС-1 ° Через 24 ч выращивания при 37 С равномерное помутнение и небольшой аморфный осадок.
1,5% агаровая скошенная среда
>S -МРС-1. Через 48 ч роста при 37 С налет сероватого цвета с шероховатой, тусклой, сухой поверхностью, полупрозрачный, плотноватой консистенции, располагающийся на поверхности среды. лО Среда ИРС-5. Через 24 ч при культивировании при 37 С равномерное помутнение среды и небольшой аморфный осадок.
Среда MIIC-2. Не растет при 50 и
15 С. Среда MPC-2 с 0,4% типоля.
Рост отсутствует..Обезжиренное молоко с 5% дрожжевого автолизаита и 1% глюкозы. Створаживает на 2-3 сут.
Среда Дейвиса. Створаживание и
3() пожелтение среды на 2-3 сут.
896071
Молоко. Створаживает на 4-5 сут.
Физиолого-биохимические признаки. Факультативный анаэроб. Оптимальный рост при 32-37 С. Желатину не разжижает. Нитраты в нитриты не восстанавливает. Каталазу не образует.
На среде Гибсона и Абд-эль-Малека ферментирует глюкозу беэ образования газа. Ферментирует.целлобиозу, галактозу, мальтоэу, сахароэу, маннозу, лактозу и салицин с образованием кислоты. Не расщепляет рамнозу, крахмал, сорбит и маннит.
Молоко. Через 14 сут содержание кислот достигает 0,38%.
Антагонистические свойства. Обрадует бактериоцин A-578 на 1,5%агаровой и жидкой среде МРС-1.
Получение бактериоцина A-578 на
1,5В агаровой среде МРС-1.
Суточную культуру L.acidophifus
578 засевают уколом на чашку с 1,5Ъ агаровой средой MPC-1 и выращивают 3
3 сут при 37ОС в ваКуум-эксикаторах, в которых воздух заменен углекислым
40 газом. Выращенную макроколонию стерилизуют парами хлороформа, после чего поверхность среды заливают вторым слоем 4 мл 0,8 агаровой среды MPC-1, расплавленной и охлажденной до 46 С, смешанной с .0,5 мл 4-часовой индикаторной культуры L.Kactis ATCC 800.
После .застывания среды посевы выращивают при 37ОС в течение 2 сут. Вокруг макроколонии L.acidophifus 578 наблюдается .прозрачная с не совсем четким краем. зоны подавления роста индикаторного. штамма 16 мм в диаметpeв
L.brevis, L.bucheuri, а также L.pCantarum.
Получение бактериоцина A-578 на жидкой среде MPC-1.
Культуру L.acidophi По одной петле каждого разведения наносят.на поверхность чашки с..1,5% .агаровой.средой МРС-1, засеянной 4часовой .индикаторной культурой L.6 actiq.ATCC 800. После выращивания при 37 С в течение .2 сут производят учет. Титр бактериоцина A-578 на жидкой орое МРС-1 †. 1:4. Спектор действия бактериоцина A"578. Подавляет рост ряда культур L.acidophi us, L.hefveficus, L.sa8ivarins, 1 Р L. jugurti, 1., actis, L. Peichmannii, L.delbmeckii, L.casei, L.fermentum, Бактериоцин А-578 инактинируется трипсином, химотрипсином, пепсином и папаином, не разрушается дезоксирибонуклеазой, рибонуклеазой и лоэицимом. При автоклавнровании при 1,5 атм разрушается через 30 чин. Диффундирует через целлофан. Бактериоцин A-578 реплицируется на индикаторном штамме Ь. Cactis ATCC 800. Предлагаемый штамм L.acidophifus 578 по сравнению с известными продуцирует бактериоцин А-578, который может быть использован не только для бактериоцинотипирования и бактериоциногенотипирования культур L.acidopИця, L.he8veficus, L.sa8ivarins, L,jugurti, L. 8actis, L.bichmannii, L.defbmeckii, L.casei, L.fermentum, 1 цспцеГ1 Но и культур L.pgantarum. По чувствительности к бактериоцину A-578 (бактериоцинотипирование) культуры перечисленных выше видолактобацилл подразделяются на следующие бактериоцинотипа: первый — чувствительный к бактериоцину A-578 и второй — устойчивый к бактериоцину A-578. При бактериоцинотипировании 586 культур лактобациил разных видов получены следующие результаты. Из 187 культур L.acidophiCus 155 относятся к первому бактериоцинотипу и 32 культуры — ко второму..Иэ 65 культур L.safivarius 15 относятся к, первому бактериоцинотипу и 50 — ко второму. Из 16 культур Ь.jugurti 15 относится к первому бактериоцийотипу и 1 культура — ко второму. Иэ 84 культур L.fermentum 49 относятся к первому бактериоцинотипу и 35 культур — ко второму. Из 13 культур L.burchueri 4 относятся к первому ьактериоцинотипу .и 9 культур †.ко второму. Из .144 культур L.casc1 82 относится к первому бактериоцинотипу и Ь2 культуры — ко второму, из 23 культур L.pfanterem 2 относятся к первому бактериоцинотипу и 21 культура — ко второму. 4 культуры L.hå våticus, 2 культуры L.Яас11я и ?.Ве1chmannii, 1 культура L.Qefdmeckii и 43 культуры L.brevis принадлежат к первому бактериоцинотипу. 2 культуры L. се Моы.ояця устойчивы к действию бактериоцина A-.578 . Использование предлагаемого штамма, продуцирующего бактериоцин A-578, дает возможность по генетическим меткам проводить дальнейшее, более глубокое и детальное внутривидовое,подразделение не только культур L.acidophi(us, 1 .пейче 1сия, L.sa61variця.. L.jugrti, L,Cactis, L,,«Âåichmànп11, L,defbmeckii, L.casei, Ь.fermentum, L.brevis u L.buchneri, но и культур L.p0anturum, обладающих одинаковыми биохимическими и физиологическимй свойствами, на бактериоцино896071 Составитель С. Малютина Техред А.Ач Корректор A. Дзятко Редактор М. Келемеш Заказ 11ь31/10 Тираж 504 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-ЗЬ, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 типы и бактериоциногенотнпы (бактериоцинотипирование и .бактериоциногенотипирование), .а такие находит .приме-. нение.в исследованиях по генетике н физиологии бактериоциногении лакто. бацилл, при изучении химического строенйя и механизма действия.бактериоцина A-578. Формула изобретения Штамм LactobaciCCus acidophitus 578 (хранится в Музее культур промыаленных микроорганизмов института ВНИИ .генетика . под номером, .ЦМПМ В-1910) — продуцент бактериоцина А-578. 5 : . Источники информации, принятые во.внимание при экспертизе 1, Авторское свидетельство СССР по заявке В 2685277, кл. С 12 D 9/22, 9 1978.
