Штамм @ 79-продуцент бактериоцина а79

 

(и) 877927

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Вава Воветсиии

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 22.11.79 (21) 2881409/28-13 (51) М. К.

С 12N 1./00//

//С 12Р 1/02 (С 12N 1/00, С 12R 1/23) с присоединением заявки №

Гоаударотееииый момитет

CGeP ло делам изобретений и открытий (23) Приоритет (43) Опубликовано 15.08.82. Бюллетень № 30 (45) Дата опубликования описания 15.08.82 (53) УДК 615.779.925 (088.8) (72) Автор изобретения

В. А. Филиппов

Полтавский медицинский стоматологический институт, (71) Заявитель (54) ШТАММ LACTOBACILLUS ACIDOPHILLUS

79-ПРОДУЦЕНТ БАКТЕРИОЦИНА А79

Изобретение относится к области микробиологии и касается получения нового штамма-продуцента антибиотика бактериоцина.

Известен штамм I actobacillus plantar um 109, продуцирующий 6актериоцин P 109 (11.

Однако спектр действия этого бактериоцина ограничивается подавлением роста ряда культур: L. acidophilus, L. nelveticus, 1.. jugurti, L. fermenti, 1. buchneri, L. lactis, L. salivarins, L. delbmesku, L. leIchmanuu, 1. cellobiosus и Ь. casei.

Цель изобретения — получение штамма

1. acidophilus 79, продуцирующего бактериоцин А79.

Хранится в музее культур ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов под № ЦМПМ В-1909.

Предлагаемый штамм Ь. acidophilus 79 выделен из слюны человека и характеризуется следующими признаками.

Морфология. Среда NPC-1 (48-часовая культура): полиморфные палочки

3 — 7 0,6 — 0,8 мкм, располагающиеся поодиночке и попарно-последовательно с закругленными концами. Волютиновых зерен не образуют. Грамположительны. Спор и капсул не имеют. Неподвижны.

Культурные признаки. Ацетатный агар.

Через 72 ч роста при 37 С в атмосфере углекислого газа образуют до 2 мм в диаметре круглые, серовато-беловатого цвета

5 колонии с слабо выпуклой, гладкой, блестящей влажной поверхностью, полупрозрачные, с ровным краем, зернистой структурой, мягкой консистенции.

Среда МРС-1. Через 24 ч при 37 С рав10 номерное помутнение и небольшой аморфный осадок.

1,5% агаровая скошенная среда МРС-1, Через 48 ч роста при 37 С налет сероватобеловатого цвета с гладкой, блестящей, 15 влажной поверхностью, полупрозрачный, мягкой консистенции, располагающийся на поверхности среды.

Среда МРС-5 (среда МРС-1 без цитрата аммония и ацетата натрия). Через 24 ч при

20 культивировании при 37 С равномерное помутнение и небольшой аморфный осадок.

Среда NPC-2 (среда МРС-1 с 0,15% агар-агара). Не растет при 50 и 15 С.

Среда MPC-2 с 0 4% типоля. Рост отсут25 ствует.

Обезжиренное молоко с 5% дрожжевого автолизата и 1% глюкозы. Створаживают на 2 — 3 сутки.

Среда Дейвиса (глюкоза 10 г, дрожже30 вой автолизат 50 мл, мел 100, хлорфеноло3 вый красный 40 мг, обезжиренное молоко до 1 л). Створаживание и пожелтение среды на 2 — 3 сутки.

Молоко створаживает на 4 — 5 сутки.

Физиологические и биохимические особенности.

Факультативный анаэроб.

Оптимальный рост при 32 — 27 С.

5Келатину не разжижает.

Нитраты и нитриты не восстанавливает.

Каталазу не образует.

Среда Гибсона и Абд-зль-Малека, Ферментируют глюкозу без образования газа.

Ферментирует целлобиозу, галактозу, мальтозу, сахарозу, маннозу, лактозу и салицин с образованием кислоты. Не расщепляет рамнозу, крахмал, сорбит и маннит.

Молоко. Через 14 суток содержание кислот достигает 0,58 /о.

Антагонистические свойства. Образует бактериоцин А79 на 1,5 /о агаровой и жидкой среде МРС-1, Получение бактериоцина А79 с помощью предлагаемого штамма.

Пример 1. Получение бактериоцина А79 на 1,5 /о-ной агаровой среде MPC-1.

Суточную культуру L. acidophilus 79 засевают уколом на чашку с 1,5О/о-ной агаровой средой МПС-1 и выращивают 3 суток при 37 С в вакуум-эксикаторах, в которых воздух заменен углекислым газом. Выращенную макроколонию стерилизуют парами хлороформа, после чего поверхность среды заливают вторым слоем 4 мл 0,8 "/оной агаровой среды МРС-1, расплавленной и охлажденной до 46 С, смешанной с 0,5 мл

4-часовой индикаторной культуры L. lactis АТСС 800. После застывания среды посевы выращивают при 37 С в течение 2 суток. Вокруг микроколонии L. acidophilus 79 наблюдается прозрачная, с не совсем четким краем зона подавления роста индикаторного штамма 19 мм в диаметре.

Пример 2. Получение бактериоцина А79 на жидкой среде МРС-1. Культуру L. acidophilus 79 засевают на жидкую среду

МРС-1 и выращивают при 32 С 2 суток.

Для стерилизации к культуре добавляют

10 /о хлороформа, перемешивают и выдерживают при 37 С в течение 30 мин, после чего жидкость отделяют от хлороформа и центрифугируют. Из надосадочной жидкости готовят двухкратные серийные разведения. По 1 петле каждого разведения наносят на поверхность чашки с 1,5 /о-ной агаровой средой MPC-1, засеянной 4-часовой индикаторной культурой L. lactis

АТСС 800. После выращивания при 37 С в течение 2-х суток производят учет. Титр бактериоцина А79 на жидкой среде

МРС-1 1:4.

Спектр действия бактериоцина А79. Подавляет рост ряда культур: L. acidophilus, L. helveticus, 1 . jugurti, 1. fermenti, L, buchneri, L, lactis, L, salivarins, L. delb877927

rneskQ, L, leichmanuu, 1. cellobiosus u

L. casei, а также L. brevis. Не ингибирует рост культур L. plantarum и L, viridescens.

Бактериоцин А79 инактивируется трипси5 - ном, химотрипсином, пепсином и папаином, не разрушается дезоксирибонуклеазой, рибонуклеазой и лизоцимом, При автоклавировании при 15 атм частично разрушается через 30 мин. Бактериоцин А79 не репли10 цируется на индикаторном штамме L. lactis, АТСС 800 и хорошо диффундирует в агар. Не диффундирует через целлофан.

По чувствительности к бактериоцину А79 (бактериоцинотипирование) культуры

15 1, acidophilus, L. helveticus, L. jugurti, L, fermenti, L. buchneri, L. lactis, 1. salivarius, L. delbmeskQ, L. leichmanuii, L. cellobiosus, L. casei, а также 1. brevis, подразделяются на 2 бактериоцинотипа: 1) — чув20

65 ствительный к бактериоцину А79 и 2)— устойчивый к бактериоцину А79.

При бактериоцинотипировании 587 культур лактобацилл разных видов получены следующие результаты, Из 187 культур L. acidophilus, -135 культур относились к 1 бактериоцинотипу и 52 ко 2; из 65 культур

L. salivarius 5 относились к 1 бактериоцинотипу и 60 ко второму; из 16 культур

L. jugurti 15 относились к 1 бактериоцинотипу и 1 — ко 2; из 4 культур L. helveticus, 1 относилась к 1 бактериоцинотипу и

3 — ко 2; из 84 культур L. fermenti 36 относились к 1 бактериоцинотипу и 48— ко 2; из 13 культур L. buchneri 3 относились к 1 бактериоцинотипу и 10 — ко 2; из

43 1. brevis 29 относились к 1 и 14 — ко.

2 бактериоцинотипу; из 2 культур L. leichmanuu 1 относилась к 1 бактериоцинотипу и 1 — ко 2; из 144 культур L. casei 18 относились к 1 бактериоцинотипу и 126— ко 2 бактериоцинотипу; 1 культура L. delbmeskQ, 2 культуры L. lactis, и 2 культуры

L. cellobiosus относились к 1 бактериоцинотипу.

24 культуры L. plantarum u L. viridescens были устойчивыми к бактериоцину А79.

По способности продуцировать бактериоцин А79 (бактериоциногенотипирование) культуры лактобацилл указанных выше видов подразделяются на 2 бактериоциногенотипа: 1 — продуцирующий бактериоцин

А79 и 2 — не продуцирующий бактериоцин А79.

Предлагаемый штамм L. acidophilus. 79 по сравнению с известными обладает преимуществом — продуцирует бактериоцин А79, который активен против других видов лактобацилл, что может быть использовано для бактериоцинотипирования и бактериоциногенотипирования не только культур

L. acidophilus, L. helveticus, L. jugurti, L. fermenti, L. buchueri, L. lactis, salivarins, 1. delbruechQ, 1. leichmanuQ, L. cellobiosus, L. casei, но и культур L. brevis.

877927

Составитель Л. Чаплина

Техред А. Камышникова Корректор Л. Расторгуева

Редактор II. Горькова

Заказ 1179/12 Изд. Мв 206 Тираж 505 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, OK-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Формула изобретения

Штамм Lactobacillus acidophillus 79— продуцент бактериоцина А79 (хранится в музее культур ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов под № ЦМПМ В-1909).

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

5 по заявке № 2685277/28-13, кл. С 12D 9/22, 1978.