Способ определения пероксидазной активности на гистологическом препарате

 

CoIo3 Саветскик

Социвпистическик

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6l ) Дополнительное к авт. саид-ay— (51)М. Кл.

G 01 N 1/28

А 61 В 10/00 (22) Заявлено 18. 01. 80 (2l ) 2887186/28-13 с присоединением заявки J4 (23) Приоритет ф1оудорстееный комитет

СССР оо лелем изобретений м открытнй

Опубликовано 1 5. 02. 82. Бюллетень №

Дата опубликования описания 1 7. 02 . 82 (53) УДК 616-091. .8(088.8) (72) Авторы изобретения

В. А. Иайский и Б. А. Ройтруб * /

Ордена Трудового Красного Знамени институт физиоЪен:Йи / им. А. А. Богомольца б (7l) Заявитель (54) СПОСОБ. ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕРОКСИДАЗНОЙ АКТИВНОСТИ

НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОИ ПРЕПАРАТЕ

Изобретение относится к гистохи мии, а именно к методам исследования пероксидазноактивных биологических структур.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к изобретению, является способ определения пероксидазной активности на гистологическом r,ðåïàðàòå путем его окрашивания в растворе бензидин дигидрохлорида с перекисью водорода (11.

Недостатком известного способа является то, что окрашенные бензидин дигидрохлоридом пероксидазноактивные структуры можно наблюдать только в проходящем свете оптического микроскопа. Это усложняет метод, снижает его точность и приводит к увеличению времени исследований.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Цель достигается тем, что соглас" но способу определения пероксидазной активности на гистологическом препа рате путем его окрашивания в растворе бензидин дигидрохлорида с перекисью водорода, гистологические препараты после окраски обрабатывают

0,25-0,5i-ным раствором 1,-цистеина при 37-40 С в течение 10-20 мин и микроскопию ведут в темном поле мик" роскопа.

На чертеже показаны микрофотографии в темном поле микроскопа меченых пероксидазой хрена нервных клеток мозга кошки, окрашенных бензидин дигидрохлоридом, соответственно до обработки препаратов и. после их обработки 0,53-ным раствором ь-цистеи15 на.

Способ осуществляют следующим образом.

Из фиксированной в формалине тка, ни изготавливают срезы тол еиной 5020

60 мкм на замораживающем микротоме ° .

Полученные срезы окрашивают в

0,023-ном растворе бензидин дигидрохлорида на трис-буфере (рН 7,21 с

Формула изобретения

Составитель В. Матвеева

Редактор Н. Ромжа Техред О.Легеза Корректор Н. Швыдкая

Заказ 352/58 Тираж 882 Подписное

ВНИИПИ Гдсударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. д, 4/5

Филиал ППП нПатент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

9 добавлением 0,01 -ной перекиси водорода. Окрашивание срезов проводят при 37-40 С в течение 30 мин. После окраски препарат промывают в дистиллированной воде и обрабатывают

0,25-53-ным раствором f-цистеина при 37-40 С в течение 10-20 мин. При этом 1-цистеин после взаимодействия бензидин дигидрохлорида с перекисью водорода в присутствии Фермента пероксидазы хрена вступает в восстановительную реакцию с конечным продуктом реакции. В результате обра" ботки препаратов после окраски раствором f-цистеина конечный продукт гистохимической реакции представляет соЬой оптически прозрачные гранулы, хорошо рассеивающие свет.

Обработанные f,-gvc ewsow препараты промывают в дистиллированной воде

У обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и на предметных стеклах заключают в бальзам. Микроскопию ведут в темном поле микроскопа.

Использование предлагаемого изобретения позволяет расширить воз05699 . 4 можность исследования пероксидазноактивных биологических структур, делает возможным их изучение в темном поле оптического микроскопа, упрощает метод исследования, повышает его точность.

Способ определения пероксидазной активности на гистологическом препарате путем его скрашивания в растворе бензидин дигидрохлорида с перекисью водорода, о т л и ч а ю щ и йс н тем, что, с целью повышения точности способа, гистологические препа-. раты после окраски обрабатывают 0,250,53-ным раствором f-цистеина при

37-40 С в течение 10-20 мин и микро" скопию ведут в темном поле микроскопа.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Пирс Э. Гистохимия. М., Изда- . тельство иностранной литературы, 1962, с. 461-462.