Способ получения препарата глюкоамилазы

 

(72) Авторы изобретения

И. M. Грачева, М. В. Гернет, Н. Н. Гаврилова, Г. Е. Инднсова н Л. А. Корнева

1

1 те ологнческий. (71) Заявитель

Московский ордена Трудового Красного Знамени институт пищевой промышленности с — 1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ГЛЮКОАМИЛАЗЫ

1О

Изобретение относится к мнкробиологнчеБ кой промышленности, а именно к производству ферментных препаратов.

Известен способ получения высоленного препарата глюкоамилазы, предусматривающий концентрирование культуральной жидкости вымораживанием и последующсе высаливание фермента сульфатом аммония (1).

Однако этот способ включает энергоемкий и малопроизводительный процесс вымораживания (на 1 ккал холода затрачивается энергия значительно больше, чем на l ккал тепла), требующий специального уникального оборудования.

Наиболее близким к предлагаемому явля1j ется способ получения препарата глюкоамилазы, предусматривающий концентрирование культуральной жидкости вакуум-выпариванием и последующее высаливание фермента сульфатом

20 аммония илн спиртом. Активность глюкоамилаэы, полученной после 12 — 15 ч культивирования продуцента — Endmsycopsi s ibu1 iger, составляет 8120 ед (21

Недостатком известного способа является значительная потеря активности фермента в процессе вакуум- концентрирования.

Цель изобретения — снижение потерь активности, а также получение более очищенного препарата.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения препарата глюкоамилазы, предусматривающем концентрирование культуральной жидкости вакуум-выпариванием и последующее высалнвание фермента сульфатом аммония, процесс высалнвания осуществляют в две стадии, причем первую проводят в процессе вакуум-концентрирования путем введения в фильтрат культуральной жидкости сульфата аммония в количестве 5 — 15% от. насыщения, после чего определяют выпавший осадок и проводят вторую стадию введением остального ко. личества сульфата аммония до 60 — 65% от насыщения.

Сущность способа в том, что дрожженадобиый микроорганизм Endomycopsis species 20 — 9 выращивают глубинным способом, после чего культуральиую жидкость отделяют от биомассы.

908796

Составитель Е. Воробьева

Техред Э.Фечо

Редактор Е. Дичинская

Корректор Г. Огар

Подписное

Заказ 749/27

Тираж 505:

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филяал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

В фильтрат культуральной жидкости вносят

5 — 15% от насыщения сульфата|аммония, раствор концентрируют методом вакуум-выпаривания при повышенной температуре.

Концентрат культуральной жидкости после выпаривания, содержащий 25 — 30% от насыщения сульфата аммония, охлаждают до 5—

10 С и вносят дополнительно, если необходимо сульфат аммония до 30% от насыщения, вьтдепживают 1 — 5 ч и отделяют осадок, содер- 1в жащий балластные вещества и остатки гликозилтрансфераэы, К центрифугату добавляют сульфат аммония до 60% от насыщения, полученный осадок отделяют центрифугированием, высушивают в вакуум- сушильном шкафу и на распылительной сушилке. Пример. Лрожжеподобньй организм

Endomycopsis species 20 — 9 выращивают в 20 л ферментере, содержащем 10 л оптимальной питательной среды следующего состава, %: кукурузный экстракт 3,0; кукурузная мука

1,5; олеиновая кислота 0,2; рН среды 4,0

Время стерилизации 1 ч при 120 С..Длительность культивирования 32 — 36 ч при величине аэрации 1 л Qg /л ч и перемешивая 180—

220 об/мин. По окончании выращивания культуральную жидкость с глюкоамилазной активностью 20 ед/мл отделяли oz биомассы сепариров ание м.

В фильтрат культуральной жидкости вносят сульфат аммония в количестве 15% от насыщения при постоянном перемешивании и смесь подают на вакуум-выпарную установку. Температура выпаривания 36 С, степень концентрирования 2. Получают 4,5 концентрата с глю35 коамилазиой активностью 38,3 ед/мл. Выход

95,7% с содержанием сульфата аммония 30% от насьпцения. Полученный концентрат охлажда4 ют до 10 — 15 С, выдерживают 1-2 ч и выпавший осадок отделяют сепарировзнием. В фильтрат 4,1 л с глюкоамилазной активностью

37,1 ед/мл вносят при непрерывном перемешивании необходимое количество сульфата аммония до 60% от насыщения, смесь выдерживают 5 — 10 ч, Выпавший осадок отделяли сейарнрованием, высушивают в вакуум-сушильном шкафу. Выход препарата 32 г с глюкоамилазной активностью 2878 ед/мл.

Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить активность глюкоамилазы и получить более очищенный препарат.

Формула изобретения

Способ получения препарата глюкоамилазы, предусматривающий концентрирование культуральной жидкости вакуум-выпариванием и последующее высаливание фермента сульфатом аммония, отличающийся. тем, что, с целью снижения потерь активности, а также получения более очищенного препарата, hpo. цесс высаливания осуществляют в две стадии, причем первую проводят в процессе вакуумконцентрирования путем введения в фильтрат культуральной жидкости сульфата аммония в количестве 5 — 15% от насьпцения, после чего отделяке выпавший осадок и проводят вторую стадию введениеьт остального количества сульфата аммония до 60 — 65% от насьпцения.

Источники информации, припятью во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР Р 402541, кл. С 12 0 13/10, 1973.

2. Авторское свидетельство СССР И 340690 кл. С 12 0 13/10, 1970 (прототип).