Способ сенсибилизации белковых частиц

Авторы патента:

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Совхоз Советскик

Соцмапмстмческнк

Респубттнк

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6! ) Дополнительное к авт. свнд-вувЂ” (22) Заявлеио06.07.79 (2I ) 2792564/28-13 (5()M. Кл. (3 01 hl 33/. )О с присоединением заявок М 2821670/28-13, . 2821671/28-13, 2821669/28-13 (2 !) Приоритет

3Ъе74арстеенаы0 комитет ее делам еэобаетенкк

N открытий

Опубликовано 28.02.82). Бюллетень Ют 8 (53) УД К 611-.

-01 8.51 (088.8) Дата опубликования описания 28.02.82 (72) Авторы изобретения

И. К. Ковалев, О. 10. !!Олевая, H. П. Данилова и Л. А. 1 ашарова

) ! Iаучно-исследовательский институт по бпологиче им испытаниям химических соединений (7! ) Заякнтель (5 1) С!1ОСОГ) СЕ!1СИГИЛИЗАБИИ Е>1:ЛКО!ЗН1 EACTI1II

Изобретение относится к медииние и биологии и может быть использовано для иммунохимпчсских методов выявлении антител к барбитуратам реакцп:.й торможения пассивной гемагглютннацтпт определения низких концентраций барбитуратов в биологических жидкостях, а также для изучения фармакодинамики лекарственных препаратов ряда барбитуратовой кислоты.

Известен способ сенсибилизации белковых частиц путем их инкубации с ре!

О акционно-способным производным гаптена при pl! 7,0-9,0 и С-10ОС (1).

Однако известный способ не позволяет повысить устойчивость белковых ча!

5 стиц.

Бель изобретения вЂ” повыше)ше устойчивости белковых частиц.

Указанная цель достигается тем, что способ сеисибили.-иции белковых частиц

20 осушествляют путем их пнкубации с реакционноспособным производи) п«гаптена при pll 7,0-9,0 и 0- !. 0 С, в качестве

0 белковых частиц использ Y)T эритроциты, 2 а в качестве реакционноспособных производных гаптена вЂ” диазониевую соль и-аминодифенилазоморфина, диазоноевую соль п-амннодифенилазоаминазина, хлорформиат 5-(1-метилбутил)-5- (2>-окси«пропил)-барбитуровой кислоты или диазониевую соль 5-этил-5-(м-амино-фенпл)-Gaрби Гуровой кислОты в сООтнпцп ппи соответственно 4 ° 10 -8.10 41,5», к10 -2,0. 10, 4,0-1С) -8 10 р 1. 10 - 8 10 на 1,8 10 эритроцитов, а инкубацию проводят в забуференном трис-буфером и оосматическом физиологическом растворе.

Пример 1. К суспензии 1 мл то

100",4-ных эритроцитоп барана (1,8 ° 10 клеток) в 40 мл трис-буфера (0,02 M трис, 0,15 M хлористый натрий, pEI 88,5) добавляют прн 0-10 С 0,1 мг (4 10 4ммоля) диа.-юниевой соли 5-этил-5-(м-аминофс пил)- бар Гуровой кислоты, поддерживая pll 8,0-8,5 добавлением 0,14 М раствора гилроокиси натрия. !

>еакционную массу пикуле>ируют при 03 Г10Г 03

10 Ñ в течение 1 ч. Сенсибплпзированные эритроциты отм .иммот цонтрифугированием несколько ра..f тряс-буфером до получения прозра пюго нс окрашенного супернатанта и хранят в видс 2,5",Г-ной суспензии в растворе, содержащем на

1 объем нормальной декомплементиро»ванной кроличьей сыворотки 74 объема раствора, приготовленного из расчета

100 ммолей глюкозы, 80 ммолей хлористого калия и 20 ммолей двузамешен ного фосфата натрия на 1 л дистиллированной воды, причем рН этого раствора доводят до 8,0-8,5 добавлением 1 М раствора соляной кислоты. Устойчивость сенсибилизированных ковалентным связыванием с фенобарбиталом SpHTpolIHToB offределяют визуально по появлению окраски в надосадочной жидкости. Окрашивание надосадочной жидкости наблюдают только на 8-9 после их получения.

Пример 2. Процесс осуществляют аналогично примеру 1, но реакцию 1,8 й10"0эритроцитов проводят с 1 мг (4 с

-3

1 0 ммоля) свежеприготовленного раст- д вора диазосоли 5-eTHn- -(м-аминофенил)-барбитуровой кислс ты. Устойчивость сенсибилизированных фенобарбиталом эритроцитом проводят как в примере 1. Окраши вание надосадочной жидкости не наблюда-30 ется в течение 7 дней.

Пример 3. Процесс осуществляют аналогично примеру 1, но реакцию 1,8 >

10"о эритроцитов барана проводят с 2 мг (8 10 ммоля) диазосоли 5-етил-5-(м35

-амннофенил)-барбитуровой кислоты. Окpal ltHBaHHc падосадочной жидкости В ко» торой хранят эритроцитыf, не наблюдают в течение 8-9 дней с момента . их приготовленияф

Предлагаемый способ позволяет повысить устойчивость белковых частиц.

Ф ормула изо бретения

Способ сенсибилизации белковых частиц путем их инкубации с реакционноспособным. производным гаптена при рН 7 0о

90и0-10С, отличаюши йся тем, что, с целью повышения устойчивости белковых частиц, в качестве белковых частиц используют эритроциты, а в качестве реакционноспособных производных гаптена - диазониевую соль и-аминодифенилазоморфина, диазониевую соль и-аминодифенилазоаминазина, хлорформиат

5(1-метилбутил)-5-(2-окси-пропил)-барбитуровой кислоты или диазониевую соль

5-этил-5-(м-амино-фе н ил ) -б а рб и ry p ов ой кислоты в соотношении соответственно

4 10 4 -8 10 вЂ” 4 1 5-10-Ъ -2 0-10-3

4 0 10 -8 10, 4 10 вЂ” 8 10 на ло

1,8 10 эритроцитов, а инкубацню проводят в забуференном трио-буфером изоосматпческом физиологическом растворе.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ковалев И. Е., Полевая О. Ю., Башарова Л. Л, и ГТ!айдров Б. В. Химикофармацевтический журнал, М., 1977,M" 5, с. 13-14.

Составитель С. Малютина

Редактор В. ГТилипенко Техред М. Рейвес Корректор М. немчик

Заказ 886169 Тираж 883 Подписно

ВНИИТТИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Т илиал ГТТТГТ "Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 1

Способ определения направленности патологического процесса при онкологических заболеваниях // 902348

Способ количественного определения лютенурина // 885152

Способ определения скорости рассасывания пересаженного трансплантата // 881616

Способ определения пепсинообразующей функции желудка // 878249

Способ определения катехоламинов в биологической жидкости // 789752

Способ оценки стресс-устойчивости животных // 782781

Устройство для определения концентрации красителя в биологической жидкости // 644362

Способ оценки тяжести вирусного гепатита // 563964

Устройство для сканирования изображения микрообъектов // 367435

Способ определения галактозы в сыворотке крови // 2101705

Изобретение относится к биохимии и ветеринарии и касается способа определения гексоз, например галактозы, в сыворотке крови для ранней диагностики нарушений минерального обмена

Способ определения мочевины и креатинина в биологических жидкостях // 2101706

Изобретение относится к медицине и касается видов патологии или состояний организма, связанных с нарушениями азотистого обмена, особенно при различных видах почечной патологии, обширных хирургических ранах, ожогах

Способ прогнозирования течения ишемической болезни сердца // 2102756

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии, терапии

Способ оценки состояния больного // 2103692

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для диагностики и прогнозирования состояния больного в послеоперационном периоде и при развитии острого воспалительного процесса

Способ прогнозирования продолжительности жизни онкологических больных четвертой стадии заболевания после диагностических хирургических вмешательств // 2104536

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано при проведении больным с неблагоприятным прогнозом адъювантных методов терапии

Способ диагностики сахарного диабета // 2104537

Изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии, и может быть использовано для проведения дифференицальной диагностики инсулинзависимого и инсулиннезависимого диабета, состояния их компенсации

Способ прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными заболеваниями печени // 2104538

Изобретение относится к медицине, а именно гепатологии, и предназначено для прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными поражениями органа

Способ оценки микросомальной системы печени при действии ксенобиотиков алкилирующего типа // 2104539

Изобретение относится к области исследования или анализа материалов особыми способами, а именно к способам исследования крови при действии ксенобиотиков, и может быть использовано для оценки микросомальной системы печени после воздействия малых доз иприта и люизита при реальных путях поступления ОВ (отравляющих веществ) в организм, а также при решении задач по уничтожению ХО (химического оружия) в районах военно-химических объектов, в частности по обследованию здоровья населения и обслуживающего персонала в местах по хранению и уничтожению ХО

Прибор для мониторинга параметров взвешенных частиц // 2106627

Изобретение относится к оптико-электронной промышленности и может быть использовано для комплексного исследования параметров взвеси частиц микронных и субмикронных размеров (10-8 - 10-4 м): распределения частиц по группам с определенными размерами, химического состава частиц, скоростей изменения этих характеристик

Способ лечения ишемической болезни сердца // 2107910

Изобретение относится к медицине, в частности, к кардиологии, и может быть использовано для лечения любых клинических вариантов ишемической болезни сердца