Способ получения полисахарида

 

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

IC ПАТЕНТУ

Союз Советскмк

Соцмалмстмческмк

Рес убпмк (()) 929015 (61)дополнительный к патенту(5l) М. Кл. (22) З- 10.10.78 (2»26q66q4i28-13 (23) Приоритет — (32) С 12 г, 19/04

9кударстеенный кокнтет

СССР яо делам изобретений к открытий

Опубликовано 15. 05. 82.Бюллетень №18

Дата опубликования описания 15.05.82 (Ж) Й1 663.18 (088. 8) с

Иностранцы

Есихиро Такаяма, Фудзио Эндо, Цунео Нозава, Есиро р1асуна, Иотокуни Мори и Тосидзи Канаяма, (Япония) (Иностранная фирма

"Иицубиси Петрокемикал Компани Лимитед и Мицубиси Юка

Фармасьютикал Ко., Лтц"

Япония (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИСАХАРИДА

Изобретение относится к технике получения полисахаридов путем культиви рования продуциру)ощих его микроорганизмов. и может быть использовано в качестве добавки в корма, носителя для лекарств и косметических веществ или промышленных химикатов, предпочтительно смазок для бурения.

Известен способ получения полиса- }0 харида путем культивирования продуцирующих его микроорганизмов рода

Pseudomonas на питательной среде в условиях аэрации, содержащей метанол в качестве единственного источника углерода, .источники азота, фосфора и другие необходимые минеральные соли, с последующим выделением полисахарида(1).

Однако получаемый по известному 20 способу полисахарид недостаточно активен.

Цель изобретения - увеличение

h активности полисахарида.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения полисахарида путем культивирования продуцирующих его микроорганизмов рода Pseudomonas на питательной среде в условиях аэрации, содержащей метанол в качестве единственного источника углерода, источники азота, фосфора и другие необходимые минеральные соли, с последующим выделением полисахарида, из рода Pseudomonas используют штамм

Pseudomonas pc lysaccharogenes M-30, при этом культивирование ведут при рН 6,5-7,5 и 28-30 С в течение 48-72 ч.

Способ осуществляют следующим образом. штамм Pseudomonas polysaccharogenes N-30 культивируют на питательной среде в условиях аэрации, содержащей метанол в качестве единственного источника углерода, источ929015

На пластичной. культуре бульонагара при 30 С в течение 21 дня форма неправильная, периферия волокS0 нистая, поверхность плоская, гладкая.

На бульон-агаровой колотой культуре при 30 в течение 7 дней развитие по поверхности и вдоль верхнего надреза.

На бульон-метанольной (O,Я по объему) агаровой пластинчатой культуре при 30 в течение 30 дней форМа круглая, периферия волокнистая, 3 ники азота, фосфора и другие необходимые минеральные соли.

Новый штамм Pseudomonas ро1у асcharogenes М-30 выделен из образцов почвы в районе Иитосума, префектуры Ибараки, в Японии 1 мая 1975 г.

Штамм хранится в техническом исследовательском институте микробиологической промышленности (Агенство промышленной науки и технологии 1в

Министерства международной торговли и промышленности Японии) в коллекции микроорганизмов под Ю 4054, этот новый штамм хранится также в американской типовой коллекции 15 культур США под неизвестным номером.

Морфологические свойства нового штамма Pseudomonas polysaccharogenes

М-30.

26

Рассматривают неподвижный куль" туральный бульон в среде метанольного бульона (О, 5б по объему) при 30 С

48 ч.

Форма и размер клетки — бацил- р лиформа 0,3-0,5 х 1,0-2,5 мкм.

Колония обычно одиночная, частично сдвоенная.

Неподвижный с одним побегом, спор не имеется, грамм/окраска отрицатель- З ная, кислотная прочность отрицательная.

Характеристика роста в различных средах.

В бульонной культуре развивается..В бульонной жидкой неподвижной культуре при 30 С в течение 5 дней сильное развитие, образования пленки не имеется, осадок образуется, мутность образуется.

На бульон-агаровой культуре при

30 С в течение 10 дней сильное развитие, форма волокнистая, поверхность гладкая, периферия волокнистая, прозрачность мутная, окраска оранжевая. (4 форма поднимающейся поверхности плоская, поверхность гладкая, окраска оранжевая.

На метанольной синтетической жидкой среде, содержащей 0,5 г нитрита калия,1 г кислого фосфата калия, 0,5 г семигидрата сульфата магния, 10 мг семигидрата сульфата железа, 0,1 г дрожжевого экстракта и 1 об.4 метанола, растворенного в 1 л чистой воды, рН 7,0 при 30 С в течение 5 дней развитие обиль" ное, имеется осадок, мутность, образования пленки не наблюдается.

Физиологические свойства. Восстановление нитрата положительное, денитрификация отрицательная. Опыт на метил-красный МР отрицательный, опыт на P (Фогс-Проскауер) отрицательный, индол не образует, сероводород не образует, крахмал не гидролизует. Утилизирует аммониевые соли и нитраты, пигмент не образует.

Уреаза, оксидаза, каталаза - положи тельно. Поглощение кислорода аэробное.

Ьелатину не окисляет

Лакмусовое молоко окрашивает в красный цвет, пептонизирует.

Температура развития 10-37 С, оптимальная температура роста 26-31 С, о рН развития 5-10, оптимально 6-8.

Метиламин не утилизирует.

Не образует газообразной кислоты из сахаров " арабинозы, адонитола, иноэитола, галактозы, ксилозы, клюкозы, сахарозы, дульцитола, сорбитала, трегалозы, мальтозы, маннитола, маннозы, лактоэы, рамнозы, раффинозы, фруктозы, крахмала и глицерина.

Не утилизирует сахара - арабинозу, и ноэи тал, галактозу, ксилозу, сахарозу, сорбитал, трегалоэу, мальтоэу, маннитол, маннозу, лактозу рамнозу, раффинозу, фруктозу, крахмал, декстрин, инулин, метилглюкозид, рибоэу, сорбозу, фукозу, целлобиоэу, мелебиозу и глицерин.

Утилизирует глюкозу.

Утипиэирует метанол, Не утилизирует метан.

Не утилиэирует спирты - этанол, пропанол, изопропанол, бутанол, амиловый спирт, изоамиловый спирт;

1,2-пропандиол; 1,3-бутандиол;

1,4-бутандиол; 2,3-бутандиол; 1, 5пентандиол; 1,6-гександиол; 2, 5-гександиол; этиленгликоль, диэтиленгликопьр 4-метилциклогексан.

5 9290

Не утилизирует органические кислоты - муравьиную, уксусную, фумаровую, лимонную, молочную, пировиноградную, изолимонную, кетоглутаровую, коричную, яблочную, оксиуксусную, гликолевую, глиоксиловую и глюконовую.

Количество метанола в питательной среде не должно быть выше 4 объема среды, а в случае непрерыв- 10 ной подачи метанола в среду его содержание не должно быть выше 1ь по объему.

В качестве неорганических источников азота используют нитрат аммо- 15 ния, калия, сульфат аммония и т.п. и дрожжевой экстракт, пептон и т.п. в качестве природного источника азота.

В качестве минеральных солей 20 используют кислый. фосфат калия, двухкалийный фосфат калия, сульфат магния, сульфат железа, хлористый кальций, сульфат марганца, хлорид натрия и т.п. В среду вводят также биотин, тиамины, дрожжевой экстракт, кукурузную барду в случае необходимости.

Культивирование проводят при ,10-37 С, предпочтительно при 28-32 С,30 при встряхивании или перемешивании воздухом, рН среды 5-10, предпочти тельно 6-8 или 6,5-7,5, продолжительность культивирования 24 ч, предпочтительно 48-72 ч.

По окончании культивирования выращенный бульон разбавляют в 1020 раз по объему, мицелий и другие твердые вещества удаляют непрерывным центрифугированием при 1500 х х 60 мин и скорости обработки 20 л/ч или периодическим центрифугированием при 1000 х 60 мин. Затем к отделенному бульону добавляют органический растворитель, например метанол, эта45 нол или ацетон в удвоенном объеме, или соль четвертичного аммония для фракционирования осаждения белого волокнистого сырого полисахарида.

Полученный полисахарид раство50 ряют в 5-15-кратном объеме воды и полученный раствор подвергают депротеинизации, например, нагреванием при 70-100 С, обрабатывают смесью хлороформа и эмилового спирта (3:2) ипи обрабатывают трихлоруксусной кислотой. Затем непрерывно или периодически центрифугируют так же как сырой полисахарид для удаления

15 6 протеинов. К полученному верхнему слою добавляют двойной объем метанола, этанолз или ацетона. Отделенный осадок тщательно промывают эфиром или этанолом, снова растворяют в 5-15-кратном объеме воды и деминерализуют диализом в проточной воде, обрабатывают ионообменной смолой и фильтруют через гуль, сушат вымораживанием и получают полисахарид в виде белой губки.

Физико-механические свойства полисахарида.

ОптиЧеское вращение (д.l =+48,4 +

3 3,0,14 по объему водный растО о вор) .

Средний молекулярный вес 2,0 х х 10 - 2,0 х 10 (зависит от длительности ферментации).

Элементарный анализ, 3: С 37,7+

+ 3,0; Н 5,8 1. 0,5.

Цветная реакция положительна в антроновой реакции и фенол-сернокислотной реакции. Полисахарид представляет собой кислотный элемент.

ИК-спектр — характерные полосы поглощения, см :при 3450 (S), 2940

-1. (: 1), 1620 (М), 1400 (М), 104Î (S) и 890 (Ж)

Растворим вводе,,1н. НС1, 1 н. серной кислоте и 1 н. водном аммиаке. Нерастворим в этаноле, эфире, ацетоне, хлороформе и диметилсульфоксиде. Вязкость 1000-3000 сП измерена B его 1 вес.4 растворе при 20ОС с пом<мцью вискозиметра типа В1 (фирмы Токио Тейки, Япония).

Сахарные единицы — пя тна глюкозы и маннозы бумажной хроматографией после гидролиза, отношение сахарных единиц глюкозы к маннозе 3 :2 по газовой хроматографии.

Полисахарид белого цвета, аморфный и бесцветный в водном растворе.

Из указанных свойств можно сделать вывод, что полисахарид, выделенный из бульона нового штамма M-30, обладает высокой вязкостью в водных растворах, которая не снижается даже s присутствии соли, например, КС1, "1gC1 g, Л1С1, (М1 ) Ю или

МаГ1. Вязкость водного раствора полисахарида незначительно изменяется при изменении рН среды. Поэтому он пригоден в качестве добавки в кори, носителя для лекарств и косметических веществ, или промышлен929015

1 ° ных химикатов, йапример смазок для бурения.

В медицине полисахарид М-30 - С пригоден в качестве вещества, снижающего уровень холестерина. 5

Ниже более полно дано объяснение снижения холестерина полисахаридом М-30-С на различных опытных данных.

Величина Д50полисахарида М-30-С 1о не мене 5 г/кг в штамма 1СР - С для самок и Самцов мышей и штамма

Вистер для самок и самцов крыс при пероральном введении, в то время как величина ЕД5оподавляюще- 15 го действия на рост уровня холестерина в крови не более 5 мг/кг в случае гиперлипемии, вызванной Тритоном.

Таким образом безопасная эона (Ш50(ЕЩ) полисахарида составляет щ

1000 раэ и больше. Подострая токсичность в течение 1 месяца введения показывает, что нет никаких ненормальностей в веса тела, крови и органов при непрерывном введении 25

500 мг/кг день; максимальная безопасная доза составляет 500 мг/кг.

Полисахариды показывают высокую безопасность, как лекарство и применяются в медицине для улучшения 3о обмена липидов и предотвращения атерогеноза.

Полисахариды можно вводить перорально, внутривенно, прд язык, внутримышечно или интраректально, предпочтительно перорально, обычно одинарными дозами 10-1000 мг 1-6 раз в день для взрослых.

В некоторых случаях полисахариды можно давать после соответствующего 4о расщепления или сульфирования.

Полисахарид M-30-С можно давать, как лекарство для улучшения липидного обмена и предотвращения атеросклероза, инфаркта миокарда, грудной жабы, размягчения мозга, мозгового кровотечения, гипертонии или гиперхолестермии, связанной с диабетом.

Для перорального применения обычно используют капсулы, таблетки или

50 гранулы, в некоторых случаях порошки, сиропы или водные растворы, причем полисахарид М-30-С дает эффект в меньших дозах по сравнению с известными противохолестерическими веществами, обладает безопасным пределом, не вызывает гепатотоксичности, обычной для побочного действия. е

Пример 1. Получают питательную среду, содержащую в 1 л чистой воды следующие ингредиенты, r: кислый фосфат калия 1; нитрат калия 1; семигидрат, сульфата магния 0,5; хлорид калия О, 5, дрожжевой экстракт

0,1; метанол 32 и в мг: семигидрат сульфата железа 10, дигидрат хлорида кальция 2 и хлорид натрия 2.

7 литров среды помещают в Ферментер с рН 7,0, стерилизуют 10 мин при

120о

В среде такого же состава выращивают штамм Pseudomonas polysaccharogenes М-30 в колбе Сакагуси, инокулируют в указанный ферментер, ведя культивацию при 30 С и аэрации 0,5 объема/мин в течение 72 ч. Далее к бульону добавляют 100 л воды, мицелий отделяют непрерывным центрифугированием при 2000 об/мин и 7 л/ч.

Затем отделенный фугат нагревают до

80 С 15 мин. рН доводят до 3 5-4,5 соляной кислотой для осаждения .протеинов в изоэлектрической точке, затем протеины отделяют центрифугированием, рН слива доводят до 7,0, выпари вают до 25 л, обрабатывают смесью хлороформ-амиловым спиртом (3:2) для депротеинизации и добавляют 50 л ацетона, при этом образуется вязкое вещество волокнистой струкс туры. Это вещество отфильтровывают, тщательно промывают затем этанолом, снова растворяют в воде и подвергают диализу.

Для отделения полисахаридов добавляют двойной объем ацетона. Полисахарид растворяют в 2 л чистой водь, затем сушат вымораживанием и получают 98 г очищенного полисахарида М-30-С. Его продуктивность составляет 14 г/л культурального бульона.

Физико-механические свойства полученного полисахарида.

Средний молекулярный еес 18 к 10 по фильтрации геля и 12 х 10 по рассеиванию света.

Э арный анализ, Ж: С 37,7, Н 5,8.

Цветная реакция положительна в реакции антрона и фенолсерной кислоты.

Полисахарид M-30-С является кислотным полисахаридом.

ИК-спектр поглощения. Характерные полосы поглощения выражены волновым номером, сйг": 3450 (S), 2940 (М), 1620 (М), 1400 (М), I040 (Я) и 890 (,М ..

9290

9 где S - показывает сильное поглощение, г> — среднее поглощение, и W - -слабое поглощение.

Полисахарид растворим в воде, в

1н. соляной кислоте, 1н. серной кис.лоте и 1 н.водном аммиаке. Нерастворим в этаноле, эфире, ацетоне, хлороформе и диметилсульфоксиде .

Вязкость 1000-3000 сП в 1Ф-ном водном растворе при 20 С и 60 об/мин 10 на вискозиметре типа В (фирмы "ТокиоТейки", Япония) .

Изменение вязкости водного раствора в зависимости от рН в диапазоне рН 2-11, несколько большая вязкость is при нейтральном рН (при рН 2 вязкость 930 сП; при рН 7-1250 сП и при рН 11-1100 сП на вискозиметре типа BL с адаптером НМ-3 для небольшого количества при условиях 20 С, о

0,23-ный водный раствор и 6О об/мин

B зависимости от температуры вязкость изменяется следующим образом.

В диапазоне 20-80 С вязкость уменьшается при увеличении темпе- д ратуры: при 20 С - 13500 сП, при

80 С вЂ” 11100 сП на том же самом вискозиметре.

Изменение вязкости водного раствора в зависимости от концентрации эв от 0,2 до 1 в е с //о б ь е мM: чем выше концентрация раствора, тем выше его вязкость, при 0,24 - 500 сП и при

13 - 13500 сП и 20 С.

Снижение вязкости водного раствора полисахарида не наблюдается в 53-ном растворе хлорида калия, магния, алюминия, сульфата аммония или в насыщенном водном растворе хлорида натрия. о

Полисахарид М-30-С гидролизуется 2н. серной кислотой в герметичной трубке при 100оС в течение 9 ч.

Продукт реакции обрабатывают гидроокисью бария для удаления серной кислоты, затем пропускают через колонку с ионообменной смолой Довекс

50 (Н форма) для удаления избытка ионов бария и тонких частиц сульфата бария. Промывные жидкости выпаривают в вакууме. Концентрат хроматографируют на бумаге, применяя .в качестве проявляющей жидкости смесь ,бутанола, уксусной кислоты и воды (4:1: Я и получают пятна глюкозы

55 и маннозы. Концентрат далее выпаривают досуха и превращают в -соответствующее триметилсилильное производное, газовая хроматография которо15 10 го показывает отношение глюкозы к маннозе 3:2.

Полисахарид М-30-С аморфный, белый, где водный раствор бесцветный.

Полисахарид и его водный раствор не имеют вкуса и запаза. Полисахарид более вязок, чем ксантановая смола, при 20 С, 13"ном водном растворе, 60 об/мин и на таком же вискозиметре, вязкость полисахарида

2100 сП, у ксантановой смолы 1000 сП.

Полисахарид М-30-С показывает тиксотропное свойство в его водном растворе.

Наблюдается слабое ультрафиолетовое поглощение около 280 мкм.

Температура плавления полисахарида неопределенная, он разлагается при нагревании, переходя в науглероженное состояние.

Пример 2. Культивирование проводят, как описано в примере 1, полу» чая культивированный бульон, содержащий полисахарид М-30-С. Бульон разбавляют смесью воды и метанола 1:1 до 100 л и нагревают при 80 C 15 мин, Затем мицелий удаляют непрерывным центрифугированием при скорости

7 л/час., рН слива доводят до 3,54, 5 соляной кислотой для осаждения протеинов в изоэлектрической точке и затем протеины отделяют центрифугированием. Снова рН слива доводят до 7,0 и добавляют водный раствор хлорида кальция до концентрации

0,02 3. При дальнейшем центрифугировании получают пастообразный полисахарид, который обрабатывают 20 л метанола при осторожном перемешивании для удаления солей, фильтруют, отгоняют метанол и получают полиса харид в виде пасты. Пасту растворяют в 2 л чистой воды, сушат вымораживанием, получая 84 г очищенного полисахарида М-30-С. Производительность равна 12 г/л бульона.

Фармакологическйе свойства полисахарида M-30-С поясняются следующим образом.

ОПыт 1. Берут самцов мышей штамма 1CR-,Þ, группами по 10 мышей, каждой из них внутривенно вводят по

800 мг/кг Тритона ° Через 20-24 ч после введения в крови образуется пиковый уровень липидов крови, затем гиперликемию поддерживают более 24 ч, готовя таким образом опь>тных живот(:ных. Затем опытную пробу полисаха> рида М"30-С растворяют в дистиллиро11 ванной воде и дважды перорально вводят животным, а именно сразу после дачи Тритона и через 20-24 ч. Через 24 ч после последнего введения определяют уровень холестерина в сыворотке.

Опыт 3.

Берут самцов крыс штамма Вистар 3

rруппы по 10 животных. В группе "нормарный контроль" находятся животные, которым дают обычную порошкообразную пищу. Подопытным животным группы

"холестериновый контроль" дают пищу с добавлением О, Я холестерина и О, 5 желчной кислоты . В группе

M-30-С животным дают пищу, содержащую компоненты из группы "холестериновый контроль" и испытываемый полисахарид И-ЗО-С, приготовленный таким образом, что животные получают дневную дозу 50 мг/кг. Одновременно во всех группах поднимают холестерин в плазме: пищу дают в количестве

10 r на 100 г веса тела в день. После кормления 14 дней определяют уровень холестерина в сыворотке.

Опыт 2. Берут самцов мышей, как в опыте 1 по 6 штук в группе, и каж дой мыши вводят внутривенно стрептоозотоцин 200 мг/кг. Через 7 ч после введения поддерживают гиперлипемию в течение 14 дней и более для получения животных с гиперлипемией, вызванной стрептоозотоцином.

Пробу полисахарида И-30-С растворяют в дистиллированной воде и перорально вводят животным одиночными дневными дозами 50 мг/кг в течение

5 дней после 7 дней с момента введе ния стрептоозотоцина. Через 24 ч после последнего введения определяют уровень холестерина.

929015 12

В опытах 1-3 применяют также гипохолестериновый агент (CP1B) для сравнения, Результаты опытов

1-3 приведены в табл.1.

Опыт 4. Берут самцов кроликов штамма новозеландские-белые группами по 10-14 животных. Животных, которым дают обычную пищу называют

"нормальный контроль", пищу, содер1в жащую 0,674 холестерина - "холестериновый контроль", пищу с добавлением испытуемой пробы И"30-С - "группа, получившая испытуемое соединение", Уровень холестерина в плазме во всех группах одновременно повышают ежедневной дачей пищи 40 г/кг веса тела в течение 20 недель. 3а этот период определяют уровень липидов в сыворотке. Через 20 недель всех

- в животных забивают, вырезают дорсальную аорту и изучают явление атеро склероза. Результаты приведены в

I табл. 2

Из данных табл,2 видно, что полисахарид M-30-С значительно подавляет рост липидов в сыворотке (общий свободный холестерин, триглицериды, фосфолипиды, липопротеин, свободные жирные кислоты); 65,93 атеросклероза обнаруживают в дорсальной аорте в группе "холестеринового контроля" и в то же время 30-40 подавления атеросклероза наблюдается в группе животных, которым давали полисахарид

И 30-С.

Снижающее действие на липиды в сыворотке И-30-С происходит, видимо, за счет эффекта подавления поглощения и биосинтеза холестерина.

Таким образом, полисахарид M-30- С можно считать пригодным в качестве практического вещества, снижающего липиды в сыворотке и предотвращающего развитие атеросклероза.

11, ! а

I

1 L х

I !

< о о. м л л

СЧ .ь<<

<Ч л

CO м

00 л

<Ч

М<

О1 л

О1 м л

<Ъ

44<

-Ф л л

<

<е, Sl

<О

IQ

« <;

I <<<

I B .

I a< ! Ф Ф

17 3о

I üi ! с о

1С

1 <0

I C

1 C

1 >

1 Cl

1 х

I i

1 о о

1 т»

I

1

CD м

СЧ

СР л О

О1 м

I

<<г

1 лс

I

I о а о

1

><<

T а

1! !! о, Э с о, х, I г

1 о а

1

I

I 1

t

I <»

I о в

1

1 ф

-а н м ъО л л О

44

О1

<<<

Ф о

0 л

< 3

CD

K

<<<

:-<

Ф

<<<

У >

<„ о с л

<<< с

О>

Q.

1

1 !

1 !

I

1 L

1 Х

I 1

l

1 «.\

1

1

1

1

I

1

1 ! !

1 л л сЧ

Ф4 л

<Ч

1

l L

I

l X

О

<Ч н

ЧР

ОЪ

СТ<

<Ч!

1

l

l !

1

1

1

I Я

1 ф

<О

1 Z

<ас

<Э О

<1- а

<О

<О Х

<Х

СР

00 и сЧ

Ю м л

«<«<

CD

lD

CO

СЧ

ОЪ л

-н

<Ч

CD

LA

<Ч

> ! Я

iZ o

I <<

<с о

1 l<< Q.

1 м л

CD

+I

СЧ

<Ч

С7 м н

01 л

CV л

CD

01 н

CD

О

1 «<

v z

Э с а о э х

1s

Q.

I1 Я< ф

<Э

i i-! Д

i С

<с>

1 1 л 1

<Э О" Л

\ !

1

1

I

Э I э а 1

6<=ся

«< s s s ф 1- с а

929015

C I Z

«< o s

CL <>< =Т

<- о о

u «-l о о

l V <«

Ш о 3E E

sv z аэ сфха3( лтЭ

I !

I

l

I

1

1

<

1

I

I

<

I

1

I

ti о

О о о

1 CC< CC<

1 О-О-О

I ! О

I

I

1 0Р

1

I

1

-K

«< о х Е

S 1о с<<

1 L

I

l 1<<

Z—

I IQ >s

1 <<< Д

1 <Хф

T О

t Ф Х

s о а ! Э

1 i + о

1 Э к с

) Э а х

l О L

1 х >s

1 <«

i x z

l Z

< л Э с

Э Э

1 % З

1 Ф а о л а

m c !

I I 1

ii Ф

16

9290 15

l1C ф

1Ч

СО

«4 е В м о

ОО

М\

ФМ

СО м

LA

lA ь л О

CV м

GO л

В

LA л

CD б )

1 1

1 1

1 1

1 1

1 l !

» 1

I М I

I N 1

I 1

1 I

1 1

О 1

Ю

1 I б — — — — 3

Ф

)бб

Ъ!с

IA

СО

Зф б1К б1 О л

СМ л

CTl

CV

CD

+1 И 4!

41 +1 О б м

ОЪ

СМ

Ю л м

Ю л

СО

LA сЧ

1 I

1 1

I I

I 1

1 1

1 I

I 1 1 х

1 1

1 1. 1

1 Х

1 1

О 1

I М 1

1 I

I I ъО м м

О л

0 л О

+1 сЧ

01

CD

О л м

0 л л

«vs

CV о.

Ю м

LA л

«О » л

tV

-4 (М л м

LA м л

-з. м л

Ю. л

CD

ОЪ м о л л

-1-1 -1-1

LA л

«О л м

Ю

Ю

1М л л

CV л О

CV

01!!

1 б!

1 ък

1 .О я о с а

1 Ig 1х а о

1 Х В бф

3 Ф л

tV м

И +1 .Н

+I О

LA л

CD л л

LA . LA л л

LA 00

LA.Ю

Ю ,/ .фб

1 с ! б

CI! о а

Э с х и о а

I 1 М

1 Э ° 1 1„"

ac«ýý

СО X X tt !

CD

С4

I

Х

С

1 Э

I I1 Ф

1 С9

1 Э

Х о

1

1 л

6) о а

Q с

ы и о а

Э

1CC ohio

X

L х

X K

I- x

I (1!

Э и о о а а

C: 1О «

X а

Э

K с с

1 Cf

X N а!

1- Х

X а

Э и

Э с о х рХо б

1 1 1

1 I

I 1 1

1 1 1

I 1 I I» I о 1 Y !

1 С 1 с. !

1 Э "*!

I fCI I d I

1 C CII Х С. ф !

caCII1О!

W IQ cf I - !

1i! a z

1 1 9 Э 1

1

1

1

1

I .6

1 Э

1 « (1

1 Щ

1 о

1 1 о ! м

1 1

1 Л::

Я с

1 С

1 0

1 а

I

1

,— — l ! )

1 л

1 О «;

Х х0 а а

1 CI! I1 Х о

I Э М с о х

° М Е +a М .И +! о о о

Ю л х

-Р

4(1 ф

CQ 1г», бб)1 Я

O1 Iаб а

Е1О с!Э

2 » о

И!

OI d О аб «С

II) I III

1-1 И и

Э!О

1 1» .01 C )бб

cQ

C61 а

8Р III

OI e

С1 18

17

Формула изобретения

9290

Составитель А.Бражникова

Техред Л. Пекарь Корректор 0.Бутяга

Редактор В.Бобков

Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3301/79

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ получения полисахарида путем культивирования продуцирующих его микроорганизмов рода Pseudomonas .на питательной среде в условиях аэрации, содержащей метанол в качестве единственного источника углерода, источники азота, фосфора и другие необходимые минеральные соли, с по- Io следующим выделением полисахарида, 15 18 отличающийся тем, что, с целью увеличения активности полисахарида, из рода Pseudomonas используют штамм Pseudomonas polysaccharogenes И-30, при этом культивирование ведут при рН 6, 5-7,5 и 28-30 С в течение 48-72 ч.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Заявка Франции Р 2231748, кл. С 12 0 13/04, опублик. 1975.