Способ получения 7-метоксицефалоспоринов или их солей с щелочными металлами

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

Саез Советсмик

Сацмалмстмчесммк

Реслублмм н .948292 (61)Дополнительный к патенту (5!) М. Кл.

Э (22) Заявлено 26.12.80 (21) 2433852/2558106/

/3222795/23-04 (23) Приоритет 25.12.76 (32)

27.12.77 25.12.75 (31) 155646/75 . (331 Япония

С 07 О 501/36

С12P3500

//А 61 К 31/545 фтаударстюны6 квинтет

СССР ае валам азебрвткняй я аткрмтяй

Опубликовано . 30.07.82. Бюллетень № 28

Дата опубликования описания 30 07 82 (53) УДК 547.869..1.07 (088.8) Иностранцы

Хироси Гусима, Кейсуке Мураками, Исао Такахаси, Хироси Ямагути, Тосно Сасаки, Киеси Сусакн, Суити Такамура, Тосияки Мнеси, Такаси Осоно, Есихико Ока, Сунити Ва1анабе н 1 акеси Санто (Япония)

Иностранная фирма

"Яманути Фармасьютнкал Ко., ЛТд" (Япония) (72) Авторы изобретения (7l) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 7-МЕТОКСИЦЕФАЛОСПОРИНОВ

ИЛИ ИХ СОЛЕЙ С ЩЕЛОЧНЫМИ МЕТАЛЛАМИ бН dH 2 бН2 2 ()

NH2

НООС

С,СОМ

Изобретение относится к улучшенному способу получения 7-метоксицефалоспоринов или где R — 5-карбоксиметилтно-1,3,4-тнадиазол-2-ил-, 1,5-метил-1, 3,4-тиадиазол-2-илили 1,3,4-тиадиазол-2-ил-группа;

М вЂ” атом водорода или щелочного металла, которые оказывают противомикробное действие а также используются как промежуточные соединения для получения других 7-метоксицефалоспоринов с целью увеличения или изменения противомикробного спектра путем замены боковой цепи ацильной группы в положении 7 другой ацильной группой, такой как а.аминофенилацетильная, а-карбоксифенилацетильная, а-сульфофенилацетильная, а-оксифенилацетильная, пнридилтиоацетильная, тиациазолилтиоацетилъная, тиазолилацетнльная, цианометилтиоих солей с щелочными металлами формулы 1.

I0 ацетильная, трифторметилтноацетильная группа и т. д.

Известен способ получения соединений формулы 1, заключающийся в том, что культи15 вируют микроорганизм рода Streptomyces, в частности Streptomyces griseus или Streptomyces

1actamdurans, в культуральной среде, содержащей питательные вещества, образующуюся 7- (5-амино-5- карбоксивалерамидо) -7-метокси-3-ацилоксиметил.З-цефем-4-карбоновую кислоту подвергают взаимодействию с гетероциклическим тиолом формулы 11

R-SH (11)

I где R имеет значения, указанные выше, и выде948292

?растворимый пигмент

Ь .уг: ь гура

Воздушный

Нст

Скудный, белый

О ен„плохая, {у у" ая

1je r

Слабый орошая

I л:Окова

Очень слабый

Желто- серый

1х т,MoÂaa

Агар = .аттека

Нет

Плохой, белыи

" (орошая, туг ватт гиновьтй ат-"атт

Нет

Плохой, белый до ло ",ошаз, белая цо т ГГттттсрнт;--aCitapaгтттзсЗ,тй а -,т р желтой, белая желтого, оелый

i 1e r

Плохой желго-серый

Хороптаая желто- серая еоргагптческ ;e

«г гпт к р.т маль" тт;: д ар до светлокорнтптевгтй

11смп< lo. сттст;,о. же I тола тый

Ь нный

Хороитатт

,nl ляют ггелевой продукт в виде свободной кислоты ттул ее соли с щело-жым металлом (1).

Недостатком известноrî способа является его двттхстадтптность

Цель изобретения -- упрощение процесса.

Эта даль достигается способом, который заключается в том, что культивируют микроорганизм Streptornvces oganonerlsis Y — 619Z в культуральнои среде, содержащей питательные вещества, с добавлением гетероцнклического тиола формулы 11 или его соли или его дисульфида формулы 11!

R--Ь-Ь вЂ” 8, (111) где 8 им ет значения, указанные выше, и выделяют целевой продукт в виде свободной кислоты или ее соли с щелочным металлом.

Отлтппттелььгымн призчаками способа является то, что культивируют микроорганизм

StreptomYces oganonensis У вЂ” 619Z в культу. ральной среде, содержащей питательные вещества, ", доаавгением гетероцчклического тнола формулы,1 плн его со:и, или его дисульфцца фо!эь4улы 1 1 1 .

Таким образом, предлагаемый способ позволяет полуить соединения 1 в одну стадию фер--ментапупг, без проведения дополнительной химической реакции путем добавления гетероциклн. -веского тиола 1 1 илн его ттроизводных K культу ральной среде во время культивации.

Streptomyces oganonensis Y — G19Z является новым штаммом, который был выделен из почвы в Огано — Тауне, Хихибугун, префектура

Саитама, Япония.

Этот штамм сдан на хранение в институт микробиологической промышленности, агенство промышленных наук и технологии Министерства международной торговли Японии под !! E ER M — P2725, а также в американскую коллекцикт типовых культур, 1230! Парклоун

Лрайв Роквилл, Мериленд 20852, США, под номером ATCC 31167.

Мнкологические свойства этого штамма.

1. Морфологические характеристики штамма

S.oganonensis Y — G19Z, Он растет как в природной, так. и в искусственной среде с образованием хорошо разветвленного субстратного мицелня, в то время как образование воздушного мчцелия недостаточно и поэтому образовачне спор плохое, Цепи спор прямые, относятся к типу и (Rectus) или RE (Rectiflexi—

bi1es), в каждой цепи но !0--50 спор. Споры эллиптические, сферические или цилиндрические по форме, размер 0,45 — 0,60 Х 0,55-0,90 мкм.

Поверхность спор гладкая. Не наблюдаются флагеллатные и спорангиевые споры.

2. Культуральные характеристики штамма

S.oganonensis Y — G19Z приведены в таблице.

Продолжение таблицы

948292

Очень слабый

Железо и дрожжевой экстракт, тирозиновый агар

Хорошая г: светло-желтая

Хороший коричнево- бе- . лый до желтодо желто-коричневой серого

Питательный

Хорошая, светло- желтокоричневая

Легкий

Хороший порошкообразный, светлооранжевый до светло-коричневого агар желто-коричневый

Очень слабый

Агар Беннета

Хороший коричнево-серый., светло- оранжевый до розового

Хорошая светло-желтая, коричневая

Умеренная кремовая

Агар из малеата кальция

Нет

Нет

Картофельная пробка

Коричнево- серый до темно-желтого

Хорошая светло-желтоХороший желто-серый до коричневосерого коричневая

Кровяной агар

Хорошая оливково-серая до темно-оливкового

Желто-серый до темно-красного коричневый

Нет

Сывороточная среда Лоффера

Хорошая

Нет

Нет

Образование тирозиназы

Восстановление нитрата

Коагуляция сливок

Псптонизация сливок

Гидролиэ крахмала

Ожижение желатина

Разложение целлюлозы

Гемолиз

Солюбилизация .малеата кальция

Утилизация углеродных попепз з Y — G19Z

Источник углерода

Глюкоза

Арабиноза

Сахароза

Ксилоза

Иноэитол

Манитол соединений S.oga—

Утилизация

3. Физиологические свойства штамма S.oga—

nonensis Y — G19Z.

Отрицательное

Положительно

Положительно, слабое

Положительно, слабое

Положительно

Положительно, слабое

Отрицательно

Положительно

Положительно

Фруктоза

Рамноза

Рафиноза

Характерные особенности штамма Streptomyces oganonensis Y — G19Z выглядят следующим

4о образом: он относится к нехромогенному штамму

Streptomyces; его воздущныи мицелий прямой без мутовки (типа R или RF); споры сферические пли эллиптические; споровая поверхность

45 гладкая; он даст светло-желто-серую до светложелто-коричневой культуру на различных средах; цвет воздушного мицелия коричнево-белый, желто-белый и желто-серый; продуцируется антибиотик У вЂ” G19Z 113, относящийся к 7-метоксицефалоспориновой группе.

Гстероциклический тиол формулы 11 можно применять в вице сблей как неорганических, например щелочных металлов, щелочноммельных металлов или аммониевых солей, так и с органическими основаниями, например, солей триэтиламина, триэтаноламина, дициклогсксиламина, лизина, аргинина, гистидина или основных водорастворимых антибиотиков, как канамицин, алкалоид или основной протеин.

Лучше применять соли, которые растворяются в воде и вести погружное культивирпваиие в жидкой культуре.

Можно применять любую культуральную сре- ду, содержащую питательные вещества для штамма S,oganonens is Y 619Z. Можно применять искусственную культуральную среду, полуискусственную и природную, содержащую питательные вещества. В качестве источника углерода в ней можно применять глюкозу, сахарозу, 1п манитол, глицерин, декстрин, крахмал, растительные масла и др. В качестве источника азота можно применять мясной экстракт, пелтон, глютеновую муку, муку из, хлопковых семян, соевую, арахисовую, кукурузную муку, сухие дрожжи, дрожжевой экстракт, сульфат аммония, мочевину и другие органические и неорганические источники азота. В культуральную среду при необходимости можно также добавлять металлические соли, например суль. фаты, нитраты, хчориды, карбонаты, фосфаты и т, и, натрия, калия, магния, кальция, пинка и железа, При необходимости в культуральную среду можно также добавлять ветцества, облегчающие образование RHTBGHoTHKoB, или противовспенивающие агенты, например метионин, цистеин, цистин, метилолеат, лярд, силиконовое масло, поверхностно-активные вещества и т. и.

Вышеуказанные гетероциклические тиолы

30 формулы 11 или их соли, или дисульфидные соединения формулы 111 обычно добавляют в концентрации 0,1 — 5 мг/мл, лучше 0,5—

2 мг/мл, Их можно добавлять в культуралькую среду за один раз перед культивированием или порциями в начальной стадии культивирования.

Обычно желательно вести культивирование в азробных условиях, температура культивирова ния обычно составляет 18 -35, лучше 30 С. Кроме того, желаемые результаты получают, если рН культуральной среды составляет 5-10, лучше 6 — 8. Длительность культивирования зависит от состава и температуры пркмекяемой культуралькой среды, но обычно ока составляет 3 — 10 дк,, таким образом, целевое вегцество накапливается в среде по окончании культивирования.

Целевой антибиотик по изобретеккю содержится в основном в культуральком бульоне, следовательно, после отделения мкцелия цектркфугировакием кли фильтрованием целев< е вещество извлекают иэ филырата, 1акк:-; образом, целевое вещество отделяют, выделянл к очищают, например используя разность в растворимости в соответствующем растворителе, разность сорбциоккого средства к различным сорбсктам или разность в распределении между двумя жидкостями. Зти способы можко применять раздедько или в соответствууощей их комбинации, кли кх можко кримекя гь повторно.

Физические и химические свойства соединений по изобретению следую цке

7-(5-Амико -5-карбоксквглерамил, -3-(5-карбоксиметилтио-!,3,4- ти адиа зол- 2- кл} - тк омсткп-7-мстокск- Ь -lrejht. a-4-карбоковая кк: о а

Алдитивное соединение.

5-Меркапто-1,3,4- тиадиазол-.2- тиоук сусная кислота

Физические и химические свойства целевого соединения 1 следующие. чо

Белый порошок. Напгнает плавиться при

156-160 C и становится коричневым и разлагается при 170 С. Легко растворимо в воде, уме. ренно растворимо в метаноле и плохо растворимо в других органических растворителях, Амфотеркое вещество с положительной нингидриновой реакш ей. Дает ультрафиолетовый спектр поглощения„.при определении в фосфатком буферном растворе 0,01 М с р11 6 4 у:а т максимум поглощения прк 28. ммк.

Лает инфракрасный спектр поглощения кри определении в виде таблетки из брому*,да каук-:.-.: дает поглощение при 3413, 2929, I !36 1 620.

1515 и 1380 см

Дает следующие сигналы при ЯМà — спектре, прк определении в ТМ$ как наружном стакдар;.е в тяжелой воде; величины д («/ìnH): 2,3> (41!, мультиклет, 2,96 (211, мульткплет): 4,00 (ЗИ, синлет), 3,73--4,33(211, квартет, 3 = 18 Гц)

4,25 (111, мукьтккдет), 4,44 (211. сккглет);

4,42 — 4,91 (2H, кварте-, б = 14 1ц):,63 /11-1 сингу ет) .

Целевое вещество, получеккс: в какболс. чистом виде, имееу следующий элемсктаркь:.-, состав % С 3595 11 38 И 108ч. Б !83

9 948292 10

При гидролиэе 6 и. соляной кислотой дает ацетилирования его и превращения продукта а -аминоадипиновую кислоту. в метиловый эфир дает следующий фрагмент

Масс-спектр этого соединения после N - хлор с м/е 392

1о

Из вышеприведенных фактов видно, что это соединение является 7-метоксицефалоспорином, поскольку оно дает поглощение при 1763 см (циклический пактам) в инфракрасном спектре поглощения, наличие сигналов в ЯМР спектре при 4,00 ч/млн. (ЗН, синглет, 7 — ОСНЗ), f5

5,63 ч, млн.. (1Н, синглет, 6 — СН), 3,73—

4,33 (2Н, квартет 3 — 18 Гц, 2 — СН ) и 4,42—

4,91 (2Н, квартет, 3 = 14 Гц, 3 боковые цепи СН ), соединение дает а-аминоадипиновую го кислоту при кислотном гидролизе, кроме того, из того факта, что соединение дает поглощение при 4,44 ч/млн (2Н, синглет, CH> -S — СН вЂ” СООН) в ЯМР и дает фрагмент при м/е 392 в масс— спектре производного, видно, что соединение имеет вышеуказанное строение с гетероциклическнм тиолом.

7- (5- Амино- 5-карбоксивалерамидо) -7- метоокси-3- (5-метил- 1 3 4-тиадиазол-2-ил) -тиометил 3

1 )

Ь -цефем-4-карбоновая кислота

o{!z нООб — (."н — бн, бн, (!н б QHM

ЮН

Элементарный анализ целевого соединения, полученного в самом чистом виде,%: С 37,82;

Н 4,01; N 12,90; S 14,97.

Аддитивное соединение

При гидролизе 6 н. соляной кислотой дает а-аминоадипиновую кислоту, а при гидролизе в метаноле Ловексом 50 W (водородного типа, торговое название) дает 2-меркапто-5-метил-1,3,4-тиадиазол.

7- (5-Амино-5-карбоксивалерамидо) -7-метокси-3- (1,3,4-тиадиазол-2-ил)-тиометнл- b -цефем-4-карбоновая кислота

Физические и химические свойства целевого соединения 11, Легкий желтовато-зеленый порошок. Нет определенной температуры плавления, окрашивается в коричневый цвет и разлагается при

170 С. Легко растворимо в воде, слабо растворимо в метаноле и нерастворимо в органических растворителях. Аморфное вещество с положительной нингидриновой реакцией.

Ультрафиолетовый спектр поглощения . определяют в фосфатное буферном растворе

0,01 М с рН 6,4, максимум поглощения при

272 ммк.

Инфракрасный спектр поглощения определяют на таблетках из КВ, поглощение при

3420, 2930, 1765, 1610, 1515 и 1385 см .

ЯМР спектр, определенный в TMS в качестве наружного стандарта в тяжелой воде дает следующие сигналы:6{ч/млн): 2,34 (4H, мультиплет), 2,95 (2Н, мультнллет), 3,19 (ЗН, синглет), 3,72 — 4,31 (2Н, квартет, 3 = 18 Гц), 3,99 (ЗН, синглет), 4,26 (1Н, мультиплет), 4,40-4,95 (2Н, квартет, J =

14 Гц), 5,63 (IH, сннглет).

Из этих данных видно, что соединение представляет собой 7-метоксицефалоспорин, поскольку оно дает поглощение при 1765 см (циклический.лактам) в инфракрасном спектре поглощения, сигналы прн 3,99 ч/млн (ЗН, сииглет, 7 — ОСНз), 5,63 ч/млн (1Н, синглет, 6 — СН), 3,72 — 4,31 ч/млн (2Н, квартет, 45 18 Гц, 2 — СН,), 4,40 — 4,95 (2Н, квартет, 3 = 14 Гц, 3 боковых цепи СН ), дает а -аминоаднпиновую кислоту при кислотном гидролизе, в ЯМР спектре имеется поглощение при 3,19 ч/млн (ЗН, синглет, тиадиазол

so С вЂ” СНЗ ), npH mrrKoM гидролизе получают 2-меркапто-5-метил-1,3-4-тиадиазол, т.е. это соединение имеет вышеуказанное строение с гетероциклическим тиолом.

Адднтивное соединение 2- меркапто-1,3,4тиадиазол

Физические и химические свойства целево- 15

ro соединения 111 следующие.

Легкий желто-белый порошок. Нет определенной температуры плавления, окрашивается в коричневый цвет и разлагается при

175 — 180 С. Легко растворяется в воде, слабо щ растворимо в мстяноле, яерастворимо в друтих органических растворителях. Амфотерное вещество с положительной нингидриновой реакцией.

Дает ультрафиолетовый спектр поглощения при определении в фосфатном буферном растворе 0,01М с рН 6,4, максимум при 274 ммк.

Дает инфракрасный спектр поглощеьпя при определении в виде таблеток KB поглощение при 3400, 2925, 1765„ 1610, 1515 и 1365 см" . >о

Спектр магнитного резонанса, определенный в TMS в качестве внешнего стандарта в тяжелой воде дает следутощие сигналы: величина

О (ч/мля): 2,30 (4H, мультиплет), 2,93 (2H, мультиплет), 3,69 — 4,29 (2Н, квартет, 3 =

18 Гп), 3,97 (ЗН, сияглет ), 4,26 (1Н, мультнплет), 4,45 — 4,99 (2И, квартет, Л = 14 Гц), 5,56 (1Н, синглет), 9,85 (1H, синглет).

Элементарный анализ целевого вещества, полученного в наиболее чистом виде. %:

С 37,53; Н 4,36; К 12,77, Б 16,42.

При гидролизе 6 н. соляной кислотой дает Й" аминоадипиновy ñý кислоту, а при гидролизе в метаноле Довексо.А 50 A! (вод<». родного типа, торговое наи:,1енование) дает

-меркапто-1, 4-тиадназол.

Исходя из всех данных яс:; o., что соединение является 7-метоксицефалоспорином. поскольку оно дает погло цеяяе 1765 см p, инфракрасном спектре поглогцекия, сигнаяы прн

3,97 ч/млн (ЗН, сиш.лет, 7 — ОСН„.), 556 ч/млн (1Н, синглет, 6-CH), 3,69 — 4,29 ч/ллн (2Н, квартет, 3 = 18 Гц), 4,45 — 4.49 (2Н, квартет, 3 =: 14 Гц, боковых цепи СН,), ааьпиоадипиночую кчслогу при кислотном гицролизе, кроме то —î,,из того факта, что поглощение идет при 9,85 ч/млн (1И, сияглет, тиазол CH) и ЯМР и мягкий гидролиз дает 2меркапто-1,3,4- тнадя-"-зол, оещено,что соединение по изобретению имеет вышеуказанное строение с гетероциклическим тиолом.

Результаты различных хроматографических анализов и бумажного электрофореза для целевых соединений 1, !1 и 111 по изобретению приводятся ниже.

Величины В.с этих соединений в тонкослойной хроматографии с помощью микрокристаллической целлюлозы (Авицел SF, торговое наименование) следующие.

Соединение 1 2 3

1 0,39 0,37 0,32

0,43 0,43 0.40

0,38 0,33

0 36 031

0,39

0,37

111

Цефалоспорин С

7-Метоксицефало-спорин С

Цефамицин С

У вЂ” G19Z — ДЗ

0,36 0,32

0,36 0,31

0,26 0,22

0,32 0,26

0,41

0,37

0,26.

У вЂ” G19Z — Д2

0,39

Применяют следующие системы растворителей, об объему:

Изопропанол-бутанол-уксусная кислота-вода 21:3;7:9 ,1

Бутанол-уксусная кислота-вода 4:1:2

Бутанол-уксусная кислота-вода 6:1, 5:2,5

Контрольный образец (цефамицин С) представляет собой 7- (5-карбоксивалерамид) -3-карбамоилесиметил- /-метокси- Ь -цефем-4Ъ карбоновую кислоту.

У вЂ” 6192 — ДЗ и Y — G19Z — Д2, применяющиеся в сравнительных опытах, являются новыми. 7-метоксицефалоспориновыми соединениями, ранее выделенными из культуральной жидкости Streptomyces oganonensis.

Ниже приведены величины Вг, полученные бумажной разделительной хроматографией с помощью фильтровальяой бумаги Ватман N 1 и смесью растворителей бутаяол-уксусная кислота-вода 4:1:2 по объему.

Соединение Величина R

1 0,40

Цефалоспорин С 0,36

7- Меток сицеф алоспорин С 0,40

Цефамицин С 0,35

У-G19Z — ДЗ 0,24

У вЂ” G19Z — Д2 0,25

Затем ведут анализ с помощью прибора скоростной жидкостной хроматографии Хитаси

948292

Staphylococcus

aureus 209 P

Bacillus subti1is

АТСС 6633

0 0 0 128

О О 0 231

Escherichia co1i й!Н.1

l9,2 14,2 13 0 10,4

Klebsie11a pneu—

moniae

21,8 230 23,0 130

Proteus vul—

garis ОХ 19

22,6 20,0 21 0 17,5 уксусная кислота

В/см. Длительность

Длина передвижения, см

3,6

3,6

3,9

3,5

11

111

Цефалоспорин С

7- Метоксицефалоспорин С

Цефамицин С

Y-619Z — ДЗ

Y — G19Z — Д2

Цистеиновая кислота

Глутатион

3,4

3,5

6,1

6,1

7,5

1 2

Цефало- д спорин

Sarcina 1ute3 .

АТСС 9341

0 0 0 140

635 и получают следующие результаты. Колонка 3х500 мм из нержавеющей стали; смола

Хитаси 2610 (катионо-обменная смола, торговое наименование). Система растворителей

0,2 М цитратный буферный раствор (рН 3,6); скорость подачи 0,6 мл/мин; скорость подачи бумаги записывающего прибора 1,0 см/мин.

Соединение Время задержки

1 5 мин 33c

11 9 мин 35 с 10

Цефалоспорин С 5 мин18с

7- Метоксицефалоспорин С 5 мин09с

Цефамицин С 5мин18с

У вЂ” 6192 — ДЗ 3 мин 42 с

Y-619Z — Д2 3 мин 42 с

Результаты анализов на указанном приборе при других условиях следующие.

Колонка мк Бондапак Cqs (фирмы Вальтерс Лтд) 4х300 мм, Система растворителей ацетонитрил -0,1% раствор уксусной кислоты (рН 3,3), 1:9 по объему. Скорость подачи

0,8 мл/мин. Скорость подачи бумаги записывающего прибора 1,0 см/мин.

Соединение Время задержки

1 3 мин 14 с

11 2 мин 55 с

ill 1 мин 56 с

Результаты, полученные высоковольтным бумажным электрофорезом, фильтровальная бумага Ватман И 1.

Растворитель 10%-ная (рН вЂ” 2,2). Напряжение 42

1 ч.

Соединение

Далее приводится протнвомикробное действие соединений 1, 11 и 111 по изобретению вместе с цефалоспорином С для сравнения (Ме.од инфуэионного агарового диска (раствор

500 /мл), численные величины указывают диаметр, мм, зоны ингибирования).

II III

Salmonella ga11i—

narum 240 23,5 25,1

Proteus mira—

bi 1 is IMF ОМ 9 222 195 230 230

Каждое из соединений 1, 11, 111 по изобретению можно вводить в различных лекарственных формах как таковые или в комбинациях с друтимн лекарствами. Соединения по изобретению можно вводить перорально, внутримышечно, внутривенно и т. п. в виде капсул, таблеток, порошков, гранул, растворов и суспензий. Для получения препаратов применяют различные добавки, например магптол, сахарозу, глюкозу, стерилизованную дистиллированную воду, изотонический раствор, растительное масло, например арахисовое, сезамовое. Кроме того, можно добавлять и другие ингредиенты, например стабилизаторы, связующие, протнвоокислители, консервирующие вещества, лубрикакты для таблеток. суспендирующие вещества, веществз. придающче вязкость, отдушки и т.п.

В качестве солей соединений прнменчют соли неорганических нли органических оснований, которые фармакологически не являются токсичными. Дозы медикаментов зависят, главным образом, от состояния больного н его веса, а также от способа pBcдения, т. е. перорального нли парентерального. Как правило, вводят за один уаэ 50 мг/кг по несколько раз в день.

П р н м е р 1. Получение 7-(5-амико-5-карбоксивалерамидо) - 3- (5-карбоксиметилгло-1,3,4-тиадиазол-2-ил) -тнометил-7- метокси- д. ° цефем-4-карбоновой кислоты 1.

Культуральную среду, содержащую,%: крахмал 1,0; глюкоза 1; соевая мука 1,5; дрожжевой экстракт 0 5; кислый фосфат калия О, ", сульфат магния 005 и хлористый натрий 0.3, помещают в колбы Сакагучн на 500 мл по

100 мл среды н стерилнзуют при 120 С в течение 20 мин. Затем каждый образец инокулируют штаммом Y — 6192 Streptomyces oganonensis и культивируют в течение 48 ч при ЗО C.

Культуральную среду помещают в колбы

Сакагучи на 2000 мл по 400 мл в каждую, стерилнзуют 20 мнн при 120 С и ннокулируют

948?92 *>!7 указанным винце штаммом с конце)1грацией 230 C pm обеспече)птя культуры для посева.

ОО л ктультураз)ьна11 срегы, содержащей,%.

К ОЬХМаЛ 7; ГЛIОТОНОВая Муна 2; СОЕВ а Ч М)ткя 5

2, глицерин 0,8; кислота Казам))но 0,1; сульфат железа 0,01 и едкий натр 55 г заrp+MBIcT lropoBH1J В ДВа ферментатара на 100 л вместе с 10 мл Адеканола (торговое наимепо>

ВаНИЕ) В К areeòr Å ПЕНОГаСИТЕЛЯ, ЗатЕМ СтЕРИлизуют 30 мин при 20 С и В каждый ферментатор Вносят по 800 мл;культуры для посева, а затем кул":птвируют при 30 С в течение 24 ч.

Б Ваттт1ОМ раетварЕ ЕДКОГО Натрня раетваряЮт 5rvleDKBI1TO-1,3,-"-Гиадиааал-2. TIIO)тКС)>СНуЮ KHCJIO- 7 5 ту;;. раствор стер71лизуют под давлением и добавлявп -, ка) дый ферментатор до 0,05% IIHoкулума н к-льтивиру)от еще 90 ч. !!а аконча)гик кульпгвировалгия рН бульона доводят до 2,0> затем бугьон смецп7вают с ?11

Ралисццлтам (торговое наименование) . Смесь ф ЛЬТР>У1О) С ПОМОЩЬЮ фИЛЬтР-ПРЕССа,,фИЛЬтРаты соединяют и получают около 100 л филь|рата. Фильтрат доводят до рЦ 3,0 с помощью вал/нага раствора ецкого натрия, пропускают через капанк7 " Амбеал)-;там Х/7.11 — 2 (торга, >

В ОЕ 11а Зв 1Ц>и Е; > 1а, Л И К ОЛ аитЛ У ПООМЬ(ва)ОТ

30 Jr >!oJJû 3BTt.: -:):тл"лр4то " 30 ч водчага

50;; )т, Гп ацетона. Згюг в)гпяривают да обr>c>> ia 5,. ) JI:,) Jlocoe удаления лттимесей >70. бавляюг Вал" да абц!его аоъема 10 )т, Пол тчснный таким образом раствор доводят

>1О«!>1; 3>5 аа - павлстптатй ВОДОЙ corllo>roA кислотой., Зятс.:: ПаацуСКатат -:Ерсэ КаЛОНКу С А 1бЕрл ;тОМ .1. Яr; — 68,тига хлора, торговое IIBHменован ю) .>

1ocJIc тта01>ть)вк)т: .алочки 6 л ватзз>1>

;лrc. . Ование Ведут Водны>"I р)астварам (pH />2! -, а/тт ржа)циь; 1)>1 HHTHBTB наттэ)ля ",, 0,7 Ц а ICTaTB

Баы)ИЯ, 7ОЛ", -та>ЮТ Or«.OHO Э Л раСТВООа> СОДЕ!)ЖЯщста :тОСГНВЭ11ИКПаб)тОЕ BKT::IHHO ВЕщеетВО. р то рас:Вора дат)ад)1т l!o 3,0 > прОпvcêarc) ОГО ттс1)оз ксланку с :,мбттпл)там А!)т — 2:Top! oíàe на)на)П)Е) Н ПОСЛЕ т>1)ОМЫВ1:., КОЛОНКИ ВОДОЙ ЕЕ злюнвукт ва; 1«раствором 50%-ного ацетон .: лоте чают около 400 "Jr воднога раствора, СОДЕРХ)Я1Irerc П ОП1ВОМ г ОО«71ОЕ ВЕГЦЕСТЬа..rrHCфнл" зацией этого раствора получают окало

13 г сыраГО llopoт!)ка )>I(aaaHHorа соединения

Затеь) 1 8 г сан)ага iropoliJKB !Ogaeprа)от харматографираванню На колонке с помощью

800 мл смолы ДЕЛŠ— Сефадекс A-25 (пп)а кс„ской кислоты, торговое наименование) с небольшнм количеством 0,5 14 б фернога pacT"..o ра арамицз аммония В vKc ÑHÎA кислоте ф 7)ВК Н))ОНИ))тт!ÎI Н танцr>re К ОМНО)1ЕНТ),т, Г! ОГ> >тт)Е Ннъге проттгвоьплкраб)лые фракции собирают., прсгус

Х/. ..!! — 2,торГавае на-1:".e!10ваиие) и после >!)Or„",, >т «и >> OJ>Or К>v Г тд()11 Кот)Г)НКУ Зт)ЮИР >та

ВадНЫМ 257 HI rrvr раетВОраМ ацЕ)аца И ЗЛЮа1

Выпаривают досуха.

Затем, применяя систему растворителей изапрапанол;вода (7:3 па объему), остаток продукта подвергают храматаграфлраванию на колонке с микрокристаллическай целлюлозой (Авицел) с помощью такой же системы растворителей как указана выше. Фракцию с нра)ивамикробным действием и каплями наносят на танкаслайную пластинку Лвицел SF (торговое название), обрабатаннуЬ системой изопропанал: бутанал. уксусная кислота: вода (21:3:7:9 по объему), затем на нее набрызгивают пирндинаВый раствор 0,25% нингидрина и подогревают до окрашивания. Затем собирают фракцию

c R 0>39. Зту фракци)О вьшаривают в вакууме Jocyxa гри 45-50 С и храматаграфируют на колонке с микракристаллическай целл)олазай (Авицел), обработанной системой растворителей изопрапанал:бутанал:уксусная кислота вода (21 3:7:9 па объему) . !!алученную -,àêèì образом гротивомикообную фракцин) подвергают танкаслайцай хроматографии на Авицел системой растворителей. как ук"çàíî выше,,н ца такой же методике, фракции с R 0,39 собираю", и вьшаривают в вакууме досуха. Остаток продукта снова очищают хроматографией На кслоцке с мнкракристалличе кай целлюлозой с цамашью системы Растворите.-)ей б TBHO7 уксусНая КИСЛата.вада (6: 7 >5: 2>5 ца абЪЕМ)т) . ОЧИ1)тЕН:1)тЮ аКтИВНУЮ фРаКЦИЮ ВЫПаоинаЮт ДОСУХа и растворяют в небольшом объем" дистиллированной воды. Раствор обрабатывают на копанке

Сефалскс G — 10 (торговое !!aHмснование) с поlvr01UblC ДИСтНЛЛИРавациай BCJI >l. ФРаКЦИИ> наказавшие противамикрабнае действие, собирают и ц<лгвергают тонкое:тайной хроматографии, как указано вьице. с применением системы растворителей бутанол:уксусная кислота:HOIIB (6:1,5:2,5 цо объему) . Фракции, паказавцпле

R 0,32, собирают, выпаривают и лиафилизуют

lIалучают около 80 мг чистой 7- (5-амина-5-карбаксивалерамида) -3- /5-карбаксимеп.л- 1,3,4-тиа1, .:)иазал-2-и:1) -плометил- /-метакси- Л -цефем-4-карбанавай кислоты.

11 р, м е р 2, Па.тут)е IHC 7 (5-ач)лно-5- ха р бак сив але риа миде) -7- меток си- 3- (5- метил, 3; )н-.;гиазал- -ил/тиаметнл- /7 нефем-4-кар э. бo>!ОВОЙ кис )т> ть1

Ку:1ь)) ре7ьнуrc среду, содержащую,%: крахмал 1; гл-Сказа 1; мука соевых аабав 1,5; экстракт дрожжей 0,5; кислотафосфорнакис.

Hr,IA каз)и.1 О, l c>,>JI фа1 Ma r .IHII 0 05 и )и/т)атттлс. тый натрий 0>3 ламе>шают В 500 мч колбы Сакагучн га !00 мл H каждую и 20 мин стсрилизу)ат llpH i 20 С. За>ехт нa на IvJIOA С1;е;тс ппац=--В7«ДЯТ 110CB >IITB>vrV>H «С 9Z .>т ГЕДТОГ)т>СЕЯ о>запапепа is культивир1 ют л!)и 30 >. В тече)цлe

48 и. 1ру- у)о к)льтуральн ю срс)г. как аци948292

17 сано выше, помещают в 2 литровые колбы

Сакагучи по 400 мл в каждую н стерилизуют при 120 С в течение 20 мин. На каждой среде производится посев бульонной культуры, полученной по описанию, с концентрацией, равной

2 — 3%, и затем культивируют при 30 С в течение 24 ч с целью получения культуры для

° лосева.

Отдельно в два 100-литровых ферментатора вместе с 10 мл Adecanol (торговая марка, пено1О

;гаситель), загружают по 60 л культуральной среды, содержащей,% крахмал 7; тонко размолотая клейковина 2; мука соевых бобов 2; глицерин 0,8; кислота Казамино 0,1; сульфат железа 0,01 и гидроокись натрия 55 r, стерилизуют при 120" С в течение 30 мин, засевают

800 мл посевной культуры и культивируют при 30 С в течение 24 ч. После этого растворяют 2-меркапто-5-метил-1,3,4-тиадиазол в водном

I растворе гидроокиси натрия, стерилизуют прн высоком давлении и прибавляют его в бульонную культуру так, чтобы концентрация полученного раствора в бульоне стала 0,05%, а затем культивируют в течение 90 ч.

По окончании культивирования бульон доводят до рН 2,0 и при перемешивании прибавляют Bad jol jte (торговая марка) . Смесь фильтруют с помощью фильтр-пресса, фильтраты соединяют и получают около 100 л раствора.

Фильтрат доводят до рН 3,0 с помощью

30 водного раствора гидроокиси натрия, пропускают через колонку с 12 л Амберлита ХАΠ— 2 (торговая марка), промывают колонну 30 л воды и элюируют 30 л 50 Л-ного водного раствора ацетона. Элюат концентрируют до объема

5,5 л и доводят его рН до 3,5 с помощью разбавленного водного раствора соляной кислоты, затем снова пропускают через колонну с 3 л Амберлита lRA — 68 (Cl — тип, торговая марка). Колонну промывают 6 л воды и элюируют водным раствором (рН 7,2), содержащим 1 М нитрата натрия и 0,1 М аце- . тата натрия и получают раствор объемом около 5 л антимикробноактивного вещества.

Этот раствор доводят до рН 3,0, пропускают через колонну с одним литром Амберлита 4

XAD — 2 (торговая марка) и после промывания колонны водой элюируют 50%-ным водным раствором ацетона, получают 400 мл водного раствора антнмикробноактивного вещества.

Продукт лиофилизуют. 50

Используя смесь растворителей бутанол: уксусная кислота вода (4:1:2 по объему), полученный остаток подвергают хроматографии в колонне с микрокристаллической целлюлозой Дньсе1 (торговая марка) и указанной выше смесью растворителей. Затем антимикробноактнвнйс фракции разделяются и на тонкослойной пластине Avicel SF (торговая марка) 18 с помощью смеси растворителей изопропанол: бутанол: уксусная кислота: вода (объемное отношение 21:3:7:9) и пиридинового раствора

0,25% нингидрина, которым обрызгивают хроматограмму с последующим нагреванием для получения окраски. Таким образом, собирают фракцию, имеющую R у 0,43, выпаривают досуха в вакууме при 45 — 50 С и хроматографируют в колонне с микрокристаллической целлюлозой Avicel, применяя смесь растворителей ацетонитрил: вода (объемное отношение 7:3).

Полученная фракция антнмикробноактивного препарата подв.ргается тонкослойной хроматографии на Avjcel SF (торговая марка), как указано выше, после чего собираются фракции, имеющие R 0,43, и выпариваются досуха так, что получается 0,78 г неочищенного порошка.

Этот порошок растворяют в небольшом количестве воды и подвергают разделению на колонне с Sephadex 6 10 (торговая марка), используя дистиллированную воду. Фракции с антимнкробной активностью отделяют и подвергают тонкослойной хроматографии с применением смеси растворителей бутанол:уксусная кислота:вода (объемное отношение 4:1:21. как было указано выше, а фракции с R g 0,43 собирают, концентрируют, лиофилизуют и получают 32 мг белого вещества — 7-(5-амино-5-карбоксивалерамидо) -7 — метокси-3 Ъ (5-метил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-тиометил- Ь -иефем-4-карбоновую кислоту.

Пример 3. По той же методике, которую используют в примере 1, получают намеченное соединение 1 — около 45 мг 7-(5-амино-5-карбоксивалерамидо) -3- (5-карбоксимеTHJlTHo-1,3,4-тиадиазол-2-ил/тиометил-7-метокснЬ -цефем-4-карбоновой кислоты, применяя растЭ вор бис- (5-карбоксиметилтио-1,3,4-тиадназол-2-ил) дисульфнда, полученный растворением последнего в воде, содержащей метанол, и стерилизованный путем фильтрования его через тонкопористый (Mill jpore) фильтр, вместо раствора 5меркапто-1,3,4-тиадиазол-2-тиоуксусной кислоты в воде, для чего пользуются водным раствором гидроокиси натрия, а стерилизуют прн высоком давлении. Получено 23 r неочищенного порошка намеченного соединения 1, который затем очищают по методике, приведенной для очистки продукта в примере 1.

Пример 4. По методике примера 2, используют раствор бнс-(5-метил-1,3,4-тиадиазол2-ил) дисульфида, приготовленный растворением днсульфида в воде, содержащей метанол, и стерилнзуют его филътрованием через тонкопоРистый фильтР (Mjl1 jppre) вместо РаствоРа 2меркапто-5-метил-1,3,4-тнадиазола, приготовленно. го с использованием в качестве растворителя водного раствора гидроокнси натрия и стерилизованного при высоком давлении, получают окопо:- .<ес)><}}!«е —.==.0>ГО поро!)Гка с >>1}}е}гь}я i r. после очист}; 1 его по методу, приведенному ,*}per!.,Е1 Е 2 !)отГ}>ттац}т ОКОПО -",0 f>IT / (5.3М>1.

"„ :-5- к }<рбокс}}все)}а!там}}до т) 7- мс Ток с .:-.-3- (5- }>Ie r;:>и— 1 >3. -:- >иадиазол-2-ип } тиометил- Л -цефе;rl" Ф каР",О,, >")цо>! >С}т< т}>ЗТ>-! Coej):.j-re}r}re т }1

1. 0 т! .:. . е о 5. }10>чут!е}гие 7-(5-аиинс-5ка» оокс!та евам}1.::о) -7- метокси-3- () >3>4-ттаад;та .-)П.,";., Ч) T}}O}»}e T}<П } " цЕфЕМ 4- КЗОООНОВ<> т

К Н СГ.. 0-;,и!

) т

<9 !.< >!ЬГ >)адц}>>З>ю Ст)>с т» г Ь p„

-.:3f! >: } >i cK .>3 1: «„1;, 3 осej>jX 6060

31! 3 i 0, c !> ô 7 маГнпя 0Ã.05 и хг)<31:!><.>" .">1>й Натрнт! „,.3 По!.Ющаа-,т;.3 КОПбЬ!,3КЗГ)>т}тц > с ,!костью 500 мл пс ",; >) Кaæä5>}e> !CTeр!! .- О г т;;Зт>}ОТ Прн: 2> . TC - НИЕ 20 М}!Н И Пво;»З т

Цоппг,.зе, Вта -:Ма }т G)9Ó Я!вej}t rljyCBS

OЯ ОП)1"1 .- ПOC}I>, >ЕГО К<тЛ}>1}}в}!р)>!От ЯВИ 0 .><)» сот ц» -,", меща}<--,.-:,дце 2-дитроць!е.- ь-о«е.

> .20 " ц тс.-.- : -=- ."!) мин и затем .ipo.rçâoдя ПОСЕВ, C>O}Ь}0}>тт,".". Ч,",:, Be П!Ой !I<> Отца,".П

-10!<»>,,".BÑòÎ«У <1УПт, >ИНO:1 СУИЬ У») .. 31-; <>1-оою т>), >) С)> Г)та.

-! л! .«< -,;, дч} i 0»>-,r>-т-or;;,! >)с!1!<}ентат;, ;; >

Зат»т.,>-}-3>» 0 )! Кт,да >-Нра-т!>Но,, 1; т;>,Т;; КЛЕ>:,)Ко»- .-;lrа a<,;>!} . -, Oeej>IX 0000>>

-;1 .-)т»т! "„Я кис}}ота, .Газа>ма)1>-: >3>,, ; "„,дьй)3!

0 Гт !г-\гт ) "сь к -,!)и

- >

>301" н,a,«OT г>ри >3 е <ече >ис 0 ."">ИI > злое> прог1ь!Вак)1 6 !} Воды и х1}оир}>ют ВОдным раствором (р,"! 7,2), содержащим 1 М ацетата натрия, получая, таким образом, 5 !! раствора, содержащего аптимикробоактивный MBTepHBJI. Раствор доводят до р)!

3,0, пропускают чсрез колонну с 1 и Амберг!Ит„

ХАР} — 2 (торговты марка), промывают водой и т)}оируют 5>0", <-нт!ы води),}м растцо!)<)м а!!еTo}ra, получая в резуп!..тате около 400 мл

:jof> 0I о раствора, содержащею аитимикробо3КТ}тцг}Ь}й Матсриап. Этст раетВОр ЛИОфИПИЗу.вт.

Используя смесь растворителей буганол:уксусная кисло.а:Вода (обьемное отнощени 4 j:2), т!Оп . !Снньн} остаток подвергают хро. .атографии па копогп!е с }икрокристаппической пеппюлозой (оргон}ая марко чц>се1,! > Обрабг }3:}}!ой} указан" н;й «ьп}!е смесью растворигелей. Анти!}икробо3!Гтивные фракции раздепя}от:!а тг)нкос.тойной пп;ст}!}!е А))!Се1 (!орговая марка). при:}ем для ь>:)ояв}}ен}}я !el!<;д}>aуют сме.-.ь pacTBOI)>!Tel}ей нзопрог}апэл}н-бугано}1: уксусная кис;1< TB:вода (Обьемное oòíojj>eíèc .):3:7:1}) опрыскивание

0,25",.-ным рас.вором }л}>! и}!рина ц !:}<ð}Iëè)!e

>3»0»-;3!Пте I BK!IHÈ С }< О О.. ><1 СОбнраlОТ, Вт„-Пapj;Ija}CT В В; Куу К !IOC), XB Прн 45 50 Г.

, CT3T0K 11 0:r >K "3 Xj)>lj 13»OÃ)}афИРН)"OT " " 0 IoiiKC

С )т!ИК))ОК;)}}С)3::.«lr }ÅCKOé це:)Ë}àfjo}Ой )А".СЕ1). а,>xi,. ...,j:I;jojr сьхс}.!о «асгв; )!le;jåé 1пет< нит;);,;! p0,-т3 06 3, г}1>pе,>тт}о,->1-, f>ir; ) >303 „-1}}аи

> обпа;;3„!>з с антпмикробной ак гпьно т},}о гто}—

}таргают 01 кослойной хрг) -}а -.<и рафик па

--1 Яг-, КЗК укаЗ; >>О ВЫШС, 1 тс Фран:ГИП.

;:ля ко.c!j)!>!x Р с !!.3 соб!!рз!от;!Осу!1 вьп ")11 Ц П )1 Б В)}КУУМ!C. В РЕЗ .".>ЬТ<1)Е Ci С . ОЛ»>13>О>т

<.>,<)2 1 1!Cотli>1 lel!j!О! О 110p0!!IKB

->К»тттта}) И Куцтг>-; —:Ит)> ц;.тг}тя .»,,;гт)т от, бавдяют .)3 >!01!18 Гтоо Ова} марка ° Г"! Сь

> „.

:рт!пт . })утгт >. »т,1 ° }тд -г „гто»се ф }>1-} г> . ) > > «,>: ->,т„ т r, :!3! }О" lт Г<0"">>" Bin T ОК РПС> I >, г Ра-..- >-. Оца. т>

Г:;)Л>01-L r»< C -.-)Ч ».От!coeoiтн .a, )I> ) —.,г 1;-),- „; > ) г}!) Г" Г! >-В)я;:;!рг-.- 1 >)> рдт- цгц

Кп;1H >СеT>lc !! >-Tli IB> !POIIB!Iиой Цолсi " >Н}< MBTO1 раф}1}".:> !<)T C IIOMOliisio Амбсj I!!13 CG — 50 !

}>-ти ) H зопь ., собира>от 3}}т}!.,!!!Кробоактиц;« p>)">:; }ит . K >}т}т» тj)! .»);>тг)! jrx -,1»>l}г)<))и 111> >

"::, Г C>CTBTOI . P3C! > >Р}> зт Ц !B!IOМ Ко:!Ii jeCTI!C .И:Г}г!}П:}POI,>.1!:Oj> 80>ЦЫ И Р331ЕЛ;-.1>)т;,Л i;Oi!O!}КЕ с:=1ñò ; >è .":-:. = j );T рговая мапка) г>риь :: )с. ::. Гид Гированной воды. Лоc!c и,,::3 рки Г "С, 1. т! К)-} ВНOCTjr Каж;1< jj ф! 3КПИИ птбира}с > "..Тиьнь)е фрак!})Ии >1 п<т "ве)тга;от чх

"0: .ОС .Ojлтой .,-10МатОГРафнн С ПРИ" те! ЕН}!"..си пас-в>:;;.:.—.3.re 3 б>, >BHo 1:Kjrcoo j 3 вола (o>6,cx"K,c ГНО!1>ение 4:):2, согласно опнсанНой;:. "П,!С МстОднКЕ. Затс >! Собнраю} фраКцИИ

> .- Г) :: - (5 - 3 Г, И т:. 0- 5 - K 3 ) 6> 0 K olid Bi! C 1. -},! }}дп,)

;, -.;r»> ". >, . } 1..г>т;->-.т .-,",. :: 1 1->;»,.» j}r..

->.:С<,:<":-4-к j онojj г " кнс!К.т; . и м е т. 6, )<-3)«д, т;- г! )! Ол. к-„)в .-,;)l! !Е}ццзт .:.)Гпазпо Ст !Ь!ТЗМ . .. И ., ) 3< Ггт<

2l 948292 22 воды и доводят рИ раствора, раствор с получе- ные по растворимости идентичны характеристинием соответствующих натриевых солей. кам соответствующих свободных кислот.

Характеристики полученных солей такие Формула изобретения как цветные реакции, ИК вЂ”, УФ-, ЯМР-спектры, Способ получения 7-метоксицефалоспоринов показатели преломления, данные хроматографии g или их солей с шелочными металлами общей на бумаге и жидкостной хроматографии, дан- формулы

CH — СН бН бН б ОБН

N1ig

НООб

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Великобритании Р 1321412, кл. С 2 А, опублик. 1973 (прототип) Составитель 3. Латылова

Техред А.Ач

Корректор О. Билак

Редактор Т. Портная

Заказ 5678/79

Подписное

Тираж 445

ВИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., л. 4 5

Филиал ill Ill "Патент". r . Ужгород. ул. Проектная, 4 где R — 5-карбоксиметилтио-1,3,4- тиадиазол-2-ил, 5-метил-1,3,4-тиадиазол-2-ил или 1-3,4тиадиазол-2-ил;

М -водород или щелочной металл, путем культивирования микроорганизма рода Strep—

tomyces в культуральной среде, содержащей питательные вещества, с выделением целевого продукта в виде свободной кислоты или ее соли с щелочным металлом, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве микроорганизма рода Strep—

tomyces используют Streptomyces oganonensis

t5

Y — G19Z и культивирование ведут с добавлением гетероциклического тиола общей формулы

R — SH, где R имеет указанные значения, или его соли, или его дисульфида общей формулы

R — S — S — R, 20 где R имеет указанные значения,