Способ получения антибиотика

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимый от патента ¹

Заявлено 06.VI I I.1970 (№ 1469116/31-16)

Приоритет 06.VIII.1969, 847923, США

М. Кл. С 12d 9/14

Комитет ло делам изобретений и открытий ори Совете й1илистров

СССР

Опубликовано 07.111.1972. Бюллетень ¹ 9

УДК 615.779.931(088.8) Дата опубликования описания 28.IV.1972

Авторы изобретения

Иностранцы

Роберт Л. Хамилл, Марвин Мартин Хоен и Калвин Юджин Хиггенс (Соединенные Штаты Америки) Иностранная фирма

«Зли Лилли энд Компани» (Соединенные Штаты Америки) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА

Изобретение относится к медицине, точнее к производству антибиотиков щ О ОС1- 3 с

Сн — (Снг)3- ь- тчнI СН;О-С-СНз

СООН 0 соон

В изобретении предлагается способ получения антибиотика из штамма NRRL 3584, который выращивают в питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли в аэробных условиях при 25—

37"С в течение 36 — 72 «ас, и выделяют целевой продукт из культуральной жидкости известными приемами.

Предлагаемый антибиотик проявляет антибактериальную активность против грамм— положительных и грамм — отрицательных организмов, а также против патогенных организмов растений. Антибиотик обладает и антигельминтовой активностью.

Пример 1. Спорулированную культуру

ККК1 3584 выращивают на среде, содержащей (в %): декстрина 1, хлопковой муки 1, экстракта дрожжей 0,1, агар-агара 2,6 при рН 7 в течение 7 дней при 30 С. Затем со среды снимают споры и прибавляют к ним 2 лл стерильной бычьей сыворотки. По 0,1 мл. полученной суспензии переносят в пробирки и лиофилизируют. Готовые таблетки используют для инокулирования растительной среды, содержащей (в %): глюкозы 0,5, декстрина 1, лакто-триптона 0,5, экстракта дрожжей 0,5, кристаллического сульфата магния д,2.

Пример 2. В ферментер емкостью 40 л помещают 24 л среды, содержащей 0,2 г ан1О типепообразователя, 5 г глюкозы, 50 г декстрина-700, 25 г соевых обрезков, 3 г паточной мелассы, 0,25 г двузамещенного фосфорнокислого калия и 2,5 г карбоната кальция.

Среду стерилпзуют 30 .чаи при 120 С, охлаж15 дают и инокулпруют 5% -ным привпвочным материалом, полученным, кaê в примере 1.

Фермептацшо ведут 66 «ас прп 60 С и аэрации стерильным воздухом (0,35 об/мин). Перемешиванпе осуществляется механической

2О мешалкой. 60 л культуральной жидкости, полученной описанным методом, фильтруют через диатомитовую землю и пропускают через колонку с активированным углем (высота

150 слт, диаметр 9,6 см). Колонку промывают водой до получения на выходе бесцветной жидкости и элюируют антибиотик 50%-ным ацетоном. Фракции, содержащие активное вещество, объединяют, упаривают в вакууме и

331565

Составитель В. Таратута

Тс; род Л. Богданова

Редактор Д. Пинчук

Корректор 3 Таоасова

Заказ 1573)3 Изд. Цъ 355 Тираж 448 Подписное

Цг!РтИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Мииисгров СССР

Москва, Ж-35, Раушская иаб., д. 4,5

Типография, пр. Сапунова, 2 переносят на колонку с анионитом IRA — 68 в формиатной форме. После промывания водой элюируют антибиотик 0,1 смоль раствора формиата аммония. Активные фракции объединяют, упаривают в вакууме и лиофилизируют. Получают 25 — 30 г твердого препарата.

А. Высушенный препарат растворяют в минимальном количестве воды и вносят в колонку с микрокристаллической целлюлозой (7,2к,60 см), суспендированной в 70%-ном водном ацетонитриле. После внесения пробы колонку промывают ацетонитрилом, а затем элюируют метанолом. Активные фракции объединяют, упаривают до 200 мл и осаждают антибиотик добавлением 2 л ацетона. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат в вакууме. Получают 9 — 12 г препарата, Б. 20 г вещества, получение которого описано выше, растворяют в минимальном количестве воды и вносят в колонку с силикагелем (7,2Х60 см). Силикагель предварительно промывают водой, метанолом и суспендируют в

70% -ном ацетонитриле. После внесения вещества в колонку ее промывают однократным количеством ацетонитрила и элюируют антибиотик 70% -пым ацетонитрилом. Активные фракции объединяют, упаривают досуха в вакууме, растворяют остаток в метаноле и осаждают антибиотик 10 объемами ацетона. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат в вакууме. Выход 8 г препарата, из менее активных фракций дополнительно выделяют еще 6 г.

5 В. Для очистки моноаммониевой соли антибиотика 1 г высушенного вымораживанием препарата, получение которого описано выше, растворяют в 4 мл воды и вносят в колонку (2Х60 см) со 175 мл взвеси силика10 геля-950 в 80% -ном водном ацетонитриле.

Элюирование проводят смесью ацетонитрила с водой (4:1), контролируя процесс методом бумажной хроматографии. Фракции, содержащие соль антибиотика, объединяют, 15 упаривают досуха, растворяют в небольшом количестве диметилсульфоксида, а затем этанола и осаждают активное вещество добавлением избытка эфира. Осадок отделяют центрифугированием и сушат в вакууме. Получают

20 91 мг моноаммониевой соли антибиотика.

Предмет изобретения

Способ получения антибиотика, отличающийся тем, что штамм КЯЯ1 3584 выращи25 вают в питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли в аэробных условиях при 25 — 37 С в течение

36 — 72 час и выделяют целевой продукт из культуральной жидкости известными прие30 мами.