Способ определения эритропоэтина у животных-парабионтов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6!) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 04.08.80 (21) 2968616/30-15 {53) М. Кд.з с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет—

A 61 В 10/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 300882. Бюллетень № 32

Дата опубликования описания 300882 (53) УДК 612.119 (088. 8) с.1

/,.:

/,с (72) Автор изобретения

Н.M.Íîâèêîâ (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭРИТРОПОЭТИНА

У ЖИВОТНЫХ-ПАРАБИОНТОВ

Изобретение относится к биологий, в частности к экспериментальной физиЬлогии, и может быть, преимущественно, втспользовано при изучении механизмов специфической гуморальной регуляции эритропоэза на животных-парабионтах.

Известен способ определения эритропоэтина, заключающийся в установлении изменений количества эрнтроцитов и концентрации гемоглобина в крови интактного парабионта после эритропоэзстимулирующего воздействия на партнера-парабионта (1) .

Данный способ определения эритро-. поэтина имеет недостаток, выражающийся в том, что в эксперименте исполь зуются животные с нестабилизированным эритропоэзом, а это приводит к тому, что интактные парабионты реагируют на большую группу неспецифических факторов — вазоактивные вещества, параметаболипт, гормоны я др. Все это маскирует действие эритропоэтина и. затрудняет оценку эффективности эри- . тропоэзстимулирующего воздействия на партнера-парабионта.

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения эритропоэтина иа животных-парабионтах, включакхдий этиропоэзстимулирующее воздействие на одно из животныхпарабионтов н последующее определение изменения числа ретикулоцнтов в крови интактного парабионта (2) .

НедостатКом известного способа наряду с реакцией интактного парабионта на большую группу неспецифических факторов является низкая

Ъ ð чувствительность к эритропоэтину, позволяющая давать лишь качественную оценку величины образования эрнтропоэтина.

Цель изобретения — повышение точности способа путем исключения дей ствия неспецифических факторов прн эритропоэзстимулирующем воздействии.

Для достижения укаэанной цели до эритропоэзстимулирующего воздействия

2р на парабионта-партнера интактного парабионта подвергают двухкратной с интервалом в одни сутки трансфузии

80%-ной взвесью гомологичных эритроцитов с разовой дозой из расчета

3 мл на 100 г веса животного, а эритропоэзстимулирующее воздействие на партнера производят через сутки Ilocле последней трансфузии.

ll p и м е р . Опыты проведены на

17 парах крыс линии Вистар. ПарабионЗр .ты были подобраны по полу и возрасту.

954092

Наложение кожно-мышечного анастомоза выполнено под эфирным наркозом. По боковой поверхности туловища (слева у правого и справа у левого парабионтов) ироизведен кожный разрез с иссечением участка кожи с подкожной клетчаткой в виде удлиненного овала (2х10 см), обнаженные собственные фасции с мышечно-апоневротическими образованиями сшиты по длиннику раны. Следующий ряд швов наложен по 10 краю кожной раны. Введено 500 тыс.ед. пенициллини. Через 8 дней после OIIeрации проведено определение эффективности кожно-мышечного анастомоза с помощью вещества индикатора, в качестве которого вводили полиглюкин.

Об эффективности кожно-мышечного анастомоза, судили по развитию у интактного парабионта отека акральных органов.

Среди подготовленных таким образом крыс-парабионтов были выделены группы 1 и П (соответственно 9 и 7 .пар парабионтов), одна пара парабионтов вследствие нагноения кожно-мы шечного анастомоза исключена из опыта. Для 1-.ой группы использован известный способ, для П-ой — предлагаемый.

Согласно предлагаемому способу сначала одному из парабионтов каждой пары крыс П-ой группы внутривенно ввели 803-ную взвесь гомологичных эритроцитов в физиологическом растворе в количестве 3 мл взвеси на 100 г веса животного. Через 24 ч после это-35 го произвели повторную трансфузию в количестве 3 мп взвеси на 100 г веса животного. Используемая доза эритроцитарной взвеси (3 мп/100 r) и временной интервал между ее введени- 4р ем (24 ч) установлены в контрольных опытах и вызывают увеличение количества эритроцитов в периферической крови — полицитемию на 75%, а также прекращение образования почечного эритропоэтина, что обеспечивает исключение воздействия неспецифических факторов на образование эритропоэтина.

По прошествии 48 ч (экспериментально установленного временного ин.— тервала, в течение которого имеющийся . в крови парабионта эритропоэтин пблностью метаболизируется, а количество ретикулоцитов в крови уменьшается до 0,31-0,1Ъ) парабионты-партнеры П-ой группы были подвергнуты эри-тропоэзстимулирующему воздействию— анемизированы (кровойускание 15% от объема циркулирующий крови с одновременным введением гомологичной 60 плазмы в объеме, равном количеству

;взятой крови). Количество крови, взятое при кровопускании, как показали контрольные опыты, является минимильной пороговой величиной Вызы- 65 вающей регистрируемое увеличение образования эритропоэтина.

Аналогичному воздействию — анемизации были подвергнуты и парабионтыпартнеры 1-ой контрольной группы.

После эритропоэзстимулирующего воздействия — анемизации парабионтов-партнеров 1 и П группы у интактных парабионтов 1-ой группы и парабионтов с эритроцитарной полицитемией П-ой группы определяли количество ретикулоцитов, сопоставляя их изменение с данными, полученными у этих же животных за 10 мин до анемизации их партнеров-парабионтов.

В . группе 1 проведенная анемизация парабионтов-партнеров не вызвала увеличения количества ретикулоцитов в крови интактного парабионта, что ,ложно расценивается как отсутствие йзменения количества эритропоэтина.

В группе П проведенная анемизация парабионтов-партнеров вызвала в крови полицитемического парабионта увеличение (Р(0,6001) количества ретикулоцитов.

Сопоставляя данные изменения числа ретикулоцитов у полицитемических парабионтов с показателями доз-реактивной кривой стандартного эритропозтина, определяют количество эритро.поэтина, поступившего в организм полицитемического парабионта от партнера-парабионта, у которого образование эритропоэтина было индуцировано кровопотерей — анемизацией.

По сравнению с известным предлагаемый способ отличается высокой чувствительностью к эритропоэтину, позволяет определять эритропоэтин в малых количествах и исключает возможность действия неспецифических факторов, возникающих при эритропоэзстимулирующих воздействиях.

Формула изобретения

1. Способ определения эритропоэтина у животных-парабионтов, включающит эритроцоэзстимулирующее воздействие на одного из животных-парабионтов и определение эритропоэтина по количеству ретикулоцитов в крови интактного парабионта до и после воздействия на партнера-парабионта, отличающийся тем, что, с целью повышения точности путем исключения действия неспецифических факторов при эритропоэзстимулирующем воздействии, до эритропоэзстимулирую- щего воздействия на парабионта-партнера интактного парабионта подвергают двухкратной с интервалом в одни сутки трансфузии гомологичных зритроцитов, а эритропоэзстимулирующее воздействие на парабионта-партнера проводят через сутки после последней трансфузии.

2. Способ по п.1, о т л и ч а— ю шийся тем, что, трансфузию

954092

Составитель В,Долгов

Редактор Л.Филь Техред 3 Палий КоррЕктор Е. Рошко

Заказ 6327/5 Тираж 714 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная,4 проводят 80%-ной взвесью гомологичных эритроцитов с разовой дозой

3 мп взвеси на 100 r массы животного, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Арх.катал., 1947, 3,48.

2. Blood., 1950, 5,372.