Способ определения компонентов кининовой системы гладкомышечного препарата при биотестировании

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советск ик

Социапистичесиик

Респубпии ()953497 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 17.10.80 (21) 2995021/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 23.08.82. Бюллетень № 31

Дата опубликования описания 23.08.82 (51)М. Кл.

G 01 М 1/28

А 61 В 10/00

3Ьеударстекнный комитет

СССР

00 делам нзобретвннй н открытнй

{ 53) УД К615.47 5 (088.8) (72) Автор изобретения

Н. В. Шим!

::т(:ЗСОЮ и

Омский государственный ордена Трудового-„Красного"- р

Знамени медицинский институт им. М. И,. КаИМФЮПЭС (в (7! ) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕПЕЛЕНИЯ КОМПОНЕНТОВ КИНИНОВОЙ

СИСТЕМЫ ГЛАДКОМЫШЕЧНОГО ПРЕПАРАТА

ПРИ БИОТЕСТИРОВАНИИ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано дпя диагностики патопогических состояний у больных.

Известен способ опредепения компонентов кининовой системы гпадкомышечно5 го препарата при биотестировании путем введения синэстропа крысам, подготовки тест-органа из рога матки и погружении его в термостатированную суперфузионную ванночку (11. о

Однако в известном способе определение компонентов кининовой системы биологических проб на подготовленных таким образом тест органах часто становится невозможным из-за спонтанных сокрашений гпадкомышечных препаратов рога крысиной матки в весенний и летний периоды.

Бель изобретения — возможность проведения биостирования во все времена. zp года за счет снятия спонтанных сокрашений.

Поставпенная цепь достигается тем, что согласно способу определения компо2 нентов кининовой системы гпадкомышечного препарата при биотестировании путем введения синэстрола крысам, подготовки тест-органа из рога матки и погружении его в термостатированную суперфузионную ваночку, на погруженный в суперфузионную ванночку тест-орган действуют адренапином или норадренапином в концепт» рациях соответственно 0,01-0, 1 мкг/мп или 1,0-100,0 мкг/мп, после чего определяют компоненты кининовой системы.

Способ осушествпяют спедуюшим образом.

За 24 ч опыта самкам, массой 100120 r вводят внутримышечно 0,1 мп

2%-ного раствора синэстропа дпя индуцирования фазы эструса. Подопытных животных забивают и осторожно отпрепаровывают por матки с последуюшим промыванием в растворе Жепона обычным способом. Один конец изопированного тест-органа закрепляют ко дну общепринятой суперфузионной ванночки объемом 10 мп пигатурой.,Бругой конец закрепляют к

953497 рычажку Энгельмана для записи миограмм. Установив тест-орган, сменяют раствор Желона в ванночке, устанавливают базовую линию миограмм и выявляют % наличие спонтанных сокращений гладкомышечного препарата записью миограмм на ленту кимографа. Убедившись в стойкости спонтанных сокрашений, в суперфузионную ванночку с самостоятельно сокращающимся тест-органом вносят последовательно возрастающие концентрации катехопаминов. Так, например, тест-орган № 1 стойко сокращается спонтанно (самостоятельно) более 30 MHH с максимальной амплитудой 38 мм при линейном усилении 1:3, исключая возможность определения брадикинина обычным биологическим тестированием. Через 30 мин к спонтанно сокращающемуся тест-органу вносят адреналин в конечной концентрации 1 10 пг/мл, Внесение такого копи2 чества адреналина вызывает только лишь уменьшение амплитуды спонтанного сокрашения (эффект +"). Отмывшись от ад.реналина в ванночку с тест-органом вносят 1 10 пг/мл адренапина, что вызы5 вает полное снятие спонтанных сокращений. Однако после второй отмывки тесторгана раствором Желона снова возобновс ляются слабые спонтанные сокрашения с амплитудой до 9 мм (эффект этой кон центрации "+++.").

После третьей отмывки в суперфузионную среду вносят 1 "10 пг/мл адреналина. Эта концентрация вызывает стойкое снятие спонтанных сокращений, не возобновляющееся даже после троекратной отмывки тест-органа от воздействовавшегося адреналина (эффект этой концентрации "++++ ).

Сняв спонтанные сокрашения адреналином, устанавливают как обычно чувствительность тест-органа к брадикинину внесением в суперфузионную среду нанограммовых количеств брадикинина-стандарта. Так, например, внесение брадикинина-стандарта в конечной концентрации

0,1 нг/мл не вызывает сокрашения тесторгана, а концентрация 0,2 нг/мп показывает амплитуду сокращения 5 мм. На последующие кратно возрастающие концентрации брадикинина-стандарта тест-ор» ган отвечает возрастанием амплитуды со» крашения соответственно количеству внесенного брадикинина. Таким образом, по рог чувствительности данного тест-органа к брадикинину составляет 0,2 нг/мл.

ВНИИПИ Заказ 6266 !

Филиал ППП Патент., Установив чувствительность г ладкомышечного препарата к брадикинину, в суперфузионную среду вносят опытный образец плазмы после предварительной отмывки тест-органа от брадикинина-стандарта.

Так, например, бестромбоцитарная цитратная плазма (соотношение нитрат/кровь

1:9), .внесенная в объеме 0,1 и 0,2 мл не индуцировапа сокращения тест-органа.

Последующее введение к отмытому тесторгану 0,4 мл плазмы показывает амплитуду сокрашения 6 мм.

Следовательно, содержание брадикинина в плазме интактной крысы составляет

15 0,6 нг/мг цитратной плазмы.

Ипользование предлагаемого способа определения компонентов кининовой системы гладкомышечного препарата при биотестировании возможно в любое время года за счет снятия спонтанных сокращений и тем самым имеется воэможность шире использовать его в клинико-лабораторной практике вне зависимости от сезонных особенностей тест-органов во все време-. на года, что в значительной мере повышает качество диагностики состояния кининовой системы у больных.

Формула изобретения

Способ определения компонентов иянин новой системы гладкомышечного препарата при.биотестировании путем введения синэстропа крысам, подготовки тест-органа из рога матки и погружения его в термостатированную суперфузионную ванночку, о т л и ч а ю m и и с я тем, что, с целью возможности проведения биостирования во все времена года за счет снятия спонтанных сокращений, на погруженный в суперфузионную ванночку тесторган действуют адреиалином или норадреиалином в концентрациях соответственно

0,01-1,0 мкг/мл или 1,0-100,0 мкг/мл, йосле чего определяют компоненты кининовой системы.

Источники информации, принятые во,внимаиие при экспертизе г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1. 31зизинский А. А. и Гамазков О. А.

Кинин в физиолог.ии и патологии сердеч- . у но-сосудистой системы, Новосибирск, 1976, с. 18-20.

/70 Тираж 887 Подписное