Штамм аdrовастеriuм тuмеfасiеns nrrl в-11394-продуцент глюкозоизомеразы
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
>955865
Союз Советских
Социалистических
Респубики (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 14. 02. 80 (21) 2883201/28-13 (51) М. Кл. (23) Приоритет (32) 15. 02. 79 (31) 20212 A/79 (ЗЗ) Италия
С 12 М 9/92
Государственный комитет
СССР
Ilo делам изобретений и открытий
Опубликовано 30. 08. 82. Бюллетень № 32
Дата опубликования описания 30. 08. 82 (53) УДК 663.11 (088. 8) Аищелиии, Италия) (72) Авторы изобретения
Роберто
Иностранцы
Оливери,Эудженио Фаскетти ебнелло и Людвиг Деген ФРГ) т
Иностранная фирма
"Э.Н.И.Энте Национале ИдрокарбУри" (Италия) (71) Заявитель (54) ШТАММ AGROBACTERIUH ТОИЕЕАС!ЕИ5 NRRL
В-11394-ПРОДУЦЕНТ ГЛЮКОЗОИЗОМЕРАЗЫ
Изобретение относится к микробиологической. промышленности, а именно к новому штамму — продуценту глюкозоизомеразы, используемому для получения фруктозы.
Известны различные штаммы бактерий, например. Aегоbacter cloacae 334, способные продуцировать глюкозоиэомеразу (1g.
Цель изобретения — расширение источ- 10 ников — продуцентов глюкозоиэомеразы.
Изобретение представляет собой. штамм Аеrobacter tumefaciens NRRL
 †113-(коллекция культур Северной
Региональной Исследовательской Ла!
5 боратории, Пеория, США ) — продуцент глюкозоизомераэы.
Указанный штамм выделен из почвы.
Характеристика штамма.
Культурально-морфологические признаки.
Единичные, иногда в парах, палочки размером 0,8-2,0 микрона грамотрицательные, не образуют капсул и спор, подвижные перитрихи с 4-б жгутиками.
Колонии на агариэованной пита-. тельной среде (Difco): приподнятые, с четким краем, кремовые, прозрач2 ные, гладкие 0,5- 1 мм в диаметре, обильный рост наблюдается на кальциево-глицерофосфатном-маннито-нитратном агаре с образованием коричневого пигмента и ореола.
Биохимические признаки.
Растет при 4-39 С на всех простых средах, не нуждаясь в факторах роста.. В качестве источника азота использует NH NO или аминокислоты.
Оксидаза: положительная.
Каталаза: положительная.
Восстанавливает нитраты до нитритов.
Не гидролиэует:
Казеин, желатин, целлюлозу, крахмал,. агар.
Образует З-кетоглнкозиды.
Абсорбирует краситель на магнит-, ном агаре с анилиновым синим. Изменяет цвет молока с Rocella tenctoria в серо-коричневь1й. ,Потребление . углеводов окислительное. Использует в качестве источника углерода; О(+) глюкозу, (+) арабиноэу, О(+)ксилоэу, О(+)треалозу, D(†) рибоэу,Ц+)-рамноэу, лактозу, целлобиозу, мальтозу, цитрат, ацетат, лактат, пропионат, L-аспарагиновую
955865
5
13
0,4 10
5
1 !5 .1
12,5.
20,8
27,8
32,3
37,7
18
40,6
Формула изобретения
Штамм Agrobacterium tumefaciens
NRRL В-11394 (коллекция культур кислоту, L-аспарагин,. L-гистидин, L-алании, L-аргинин.
Вызывает новообразованйя в диоках корнях моркови.
Пример 1. Готовят питательную среду следующего состава: 5
Глюкоза, г/л
Ксилоэа, г/л
КН РО4,г/л (Nk 4 ) S O4 r/n
"9 504 7Н 0, г/л
F e S O4 7 Н О, r t r /rr
СаС1 6Н О,Mr/ë
MnSO4 ° 5Н10,мг/л
ZnSO<. 7Н О,Mr/ë
Cu5()4. . 5H1 О,мг/л
CoOlg 6H O,мг/л
С помощью NaÎH устанавливают рН
7,2 и разливают по 100 мл в 500 мл колбы Эрленмейера. После стерилиза- 2р ции в течение 30 мин при 110 С колбы засевают культурой Agrobacterium
tumefaciens NRRL В-11394 из скошенного агара, содержащего ту же самую среду с 2% агаром (Difco) и инкубиру-25 ют в течение 24 ч при 30ОС с вращательным перемешиванием со скоростью
220 об/мин. клетки затем собирают центрифугированием и Промывают буферным раствором (Na
2 r влажных клеток. Эти клетки снова суспендируют в 20 мл буферного раствора, указанного выше, и клеточную пульпу подвергают дезинтеграфин на френг-прессе. В дезинтеграте, полученном таким образом, определяют ферментную активность: 1 г влажных клеток содержат 560 ферментных единиц.
Ферментную активность определяют следующим образом.
К реакционной смеси, содержащей
4,5 мл раствора питательной среды (Π— глюкоза 3,67 молярная,Mg++ 5-10 молей, CO + 1(Г молей и Na 60 С. Реакцию прерывают охлаждением смеси до 00С. Оптическое вращение образца (d час) и образца оригинала (А0) измеряют при комнатной 55 температуре на поляриметре Perkins blmer 141, линия Na (549 нанометров), оптический путь кюветы 0,1 дм. 2а единицу SNAAPROGETT 1 принято количество порция фермента, которая 6р дает-1 pr фруктозы за один час в условиях испытания, приведенных выше, то число единиц фермента на грамм влажных клеток может быть выражено следующей формулой: . Количество единиц в 1 г влажных „Я д ч мг пробы глюкозы 10 ("глюк ) ЬФр к4 " 0 ° 1 " С " 0 5 " 2 в которой (глюк = + 54 16о (фрукт = — 98, 35 С вЂ” концентрация в r глюкозы на мл раствора 0,1 = оптический путь, дм. Пример 2. Питательную среду для культивирования готовят, как в примере 1. Из 500 мл питательной среды получают 10,2 r влажных клеток, которые суспендируют в 40 мл буферного раствора.(Na -10 С, к 200 мл ацетона. После 15 мин обработки клетки собирают на бумажном фильтре, промывают ацетоном, собирают и сушат в вакууме при комнатной температуре. Таким образом, получают 1,9 г сухих клеток. Активность одного .грамма ацетонового порошка, полученного таким образом, составляет 2,200 единиц. Пример 3. Клетки штамма Agrobacterium tumefaciens NRRL В-11394 получают как в примере 1 и обрабатывают ацетоном, как в примере 2. Клетки, обработанные ацетоном, используют для определения процента изомериэации глюкозы в реакционной смеси как функцию времени. Условия испытания следующие: клетки, обработанные ацетоном, 10 г; объем питательной среды 1 л; температура протекания реакции 600С. Питательная среда имеет следующий состав: глюкоза 60 Ъ (вес/объем,Mg+ . 5 миллимолей, СО +: 0,1 миллимолей), Na Проценты изомеризации имеют следующие значения. Время, ч Превращение,Ъ 23 44,8 с Таким образом, штамм Ag r o Ьа с t er ium tumefac i ens NRRL В-11394 является новым штаммом, способным продуцировать глюкоэоизомеразу. 955865 с Составитель Т.Мелентьева Редактор A.Ìoòûëü Техред С.Мигунова Корректор А.Ференц Заказ 6499/79 Тираж 505 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Северной Региональной Исследовательской Лаборатории, Пеория, ClilA - продуцент глюкозоизомеразы. Источники инФормации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР Р 534490, кл. С 12 9/92, 1975.
