Способ выделения молочнокислых бактерий,устойчивых к антибиотическим,антисептическим и химиотерапевтическим тест- препаратам

 

Союз Советсних

Соцналистнческмх респубпюи о П и С А Н И Е (1958497

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6! ) Дополнительное к авт. свил-ау (22) Заявлено 04.08.80 (21) 2969324/28-13 с прнсоелинением заявки №

{28) Приоритет (51) М. Кл.

С 12 N 102 феудлрктеккеый кеюктет ь.СФР до делаю язоеретеннй я еткрьпяй

Опубликовано 15.09.82. Бюллетень № 34 (53) УДК 576,8(088.8) Дата опубликования описания 15.09.82 (72) Авторы изобретения

Л. А. Ерзинкян, Л. Г. Акопян н Л. М. Чарян

Институт микробиологии АН Армянской CCP (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ, УСТОЙЧИВЫХ К АНТИБИОТИЧЕСКИМ, АНТИСЕПТИЧЕСКИМ

И ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ТЕСТ вЂ” ПРЕПАРАТАМ

Изобретение относится к микробиологии и может найти применение в микробиологической технике, в частности при выделении молочнокислых бактерий, устойчивых к хнмиотерапевтическим, антибиотическим и антисептическим

5 препаратам.

Известны способы выделения молочнокисJrblx бактерий, устойчивых к антибиотическим (фенолу) и антибиологическим (пеницилину) тест-препаратам, путем совместного термостатирования исследуемой пробы культуры и тестпрепарата при, оптимальной температуре ее развития с последующим определением устойчивости культуры по скорости образования сгустка илн титруемой кислотностн пробы (1).

Однако известные способы не позволяют и не предусматривают одновременно выявить культуры, устойчивые к химиотерапевтнческнм тест-препаратам.

Наиболее близким по технической сущности о и достнтаемому результату является способ выделения молочнокислых бактерий, устойчивых к антибиотическим, антисептическим и химиотерапевтическим тест-препаратам, предусмат2 ривающий посев исследуемой культуры в rmтательную среду, инкубирование с последую цим исследованием заданных свойств культуры (2).

Согласно этому способу образцы молочных продуктов высевают в стерильное обезжиренное молоко; из пробирок со свернувшимся молоком берут пробы и производят посев на твердые агаризованные питательные среды в чашках Петри; . производят выделение чистых культур молочнокислых бактерий из одной колонки; изучение морфологических, физиологических, биохимических и кулътуральных свойств выделенных культур; отбор активных штаммов; изучение устойчивости активных штаммов к антибиотическим, химиотерапевтическим и антисептическим препаратам, Однако данный способ выделения молочнокислых бактерий трудоемок и требует больших затрат питательных сред и времени и не всегда обеспечивает получение наиболее устойчивых форм молочнокислых бактерий к исследуемым препаратам, так как в 1 г любого кисломолочного продукта обычно общее количество молоч

3 958497 нокислых бактерий достигает нескольких миллионов. Если среди них окажутся устойчивые клетки к исследуемым препаратам, то их количество среди миллионов исчисляется несколькими единицами. Следовательно, при разведении образца, вероятность попадания этих клеток с . первого же разведения исключается, не говоря уже о 5-ом или 6-ом разведениях. Соответственно сводится к нулю получение наиболее устойчивых клеток молочнокислых бактерий к ис- 10 следуемым тест-препаратам.

Цель изобретения — выявление наиболее устойчивых форм молочнокислых бактерий.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выделения молочнокислых бактерий, устойчивых к антибиотическим, антисептическим и химиотерапевтическим тест-препаратам, предусматривающему посев исследуемой культуры в питательную среду, инкубирование с последующим исследованием заданных свойств культуры, перед посевом в питательную среду вносят средне — летальные к исследуемым тест — препаратам дозы этих препаратов, а исследованию подвергают выжившие формы молочнокислых бактерий.

2$

Кроме того, в качестве исследуемой культуры используют образцы кисломолочных продуктов, сквашенных спонтанным путем.

Сущность предложенного способа состоит в том, что средне-летальные концентрации исслецуемых препаратов для большинства молочнокислых бактерий вносятся в самом начале выделения, а именно в исходную пробирку со стерильным молоком (обратом), последующие приемы выделения и их последовательность не изменены, что и обеспечивает получение наиболее э

)Ф устойчивых форм молочнокислых бактерий.

Для молочнокислых палочек средне — летальные концентрации антисептика (фенола) — 0,5% антибиотических . препаратов — 0 001%, химиотерапевтических (фталаэол) — 1%. Для молоч40 нокислых стрептококков соответственно — 0,4;

0,001; 0,8%. И, если получают пробирки со свернувшимся молоком, это значит, что путем естественного отбора получают популяцию наиболее устойчивых культур. После чего проводят исследования остальных физиолого- биохимических показателей.

Пример. В пробирки с обратом прибавляют в соответствукяцих для палочек и стрептококков средне — летальные концентрации 50 исследуемых препаратов. Пробирки иикубируют

4 в термостате при оптимальной температуре роста для молочнокислых палочек и стрептококков. Затем иэ устойчивых образцов, т.е. ( из пробирок со свернувшимся молоком, про. с водят выделение чистых культур с последующим изучением морфо — физиологических, биохимических и культуральных свойств. Результаг ты выделения устойчивых форм молочнокислых бактерий к антибиотическим, химиотерапевтическим препаратам и фенолу обобщены в таблице;

Предложенным способом было выделено из 51 образца 40 штаммов молочнокислых бактерий, иэ них устойчивых к фенолу (0,3—

0,55%) — 15 штаммов; фталазолу (0,5 — 1,1%) -

17 штаммов, пенициллину, биомицину, синтомицнну (0,001 — 0,003) — 6 — 8 штаммов, что составляет 78,4% устойчивых культур молочнокислых бактерий из общего числа образцов.

Таким способом выделяют наиболее устойчивые формы лактобактериум ацидофилум н.в. Ер 317 402, стрептококкус термофилус М7, лактобактериум мацуни У 2 "Каринэ", стрептококкус лактис и друтие бактерии. Указанные штампы бактерий в настоящее время успешно используются при производстве лечебно — диетического кисломолочного продукта "Каринэ".

Штаммы стерптококкус термофилус М7 и лактобактериум мацуни N 2 "Каринэ" используют при выработке витаминизированных рассольных сыров и новых лечебно — диетических молочных продуктов.

Культуры, выделенные предложенным способом, находят применение в. молочной промышленности, в медицине и животноводстве при . лечении острьщ форм желудочно — кишечных заболеваний у новорожденных детей, телят и поросят.

Кроме того, на выделение и получение наиболее устойчивых форм молочнокислых бактерий к вышеуказаннь|м препаратам IIo известному способу выделения требуется 2/3 r, тогда как но предлагаемому способу затрачивают

6 — 8 мес исследований.

Предлагаемый способ по воляет сократить объем работы, материальные затраты за счет экономии питательных сред, продолжительность выделения и его сроки, причем повышается возможность получения наиболее устойчивых форм молочнокислых бактерий, которые сохраняют свои производственно ценные свойства при длительном хранении (боле 5 лет), 958497

+ + + I + + + 1 + + + + + + +

+ + + I + + + + + + + + + + ! + +. +

+ + + I + + 1 1 + + +

+ + + + + + + +! + + + Н + + +

+ + 1 . + 1 I + + 1 1. + + +

+ .+ l I + I 1 + + I + I

+ + I I +. +! l + I 1 + + +

+ + I 1 + + I I + + + l + + +

9s8497

1 о ф l з Ф

v (д + е

Е о и

Л

Х:

О, о

1 1 ) 1 i 1

1 111

E о а мъ,о о оо",, N иь

„ о

6 и

Ю о

Я.

3»

Ф Я д м

Ю Ф о Е м Е

1 > fJ

Ф

LJ Л

+ Р

I ь.

9Е

+ + I + + + + 1

+ i1i + + + + 111 1

+ ++

+ ++! + +

+ + + +I + + +, + + + +

116 + 1 1 11 1

I i i 1 + + + 1 1 I 1

I II!++++ f I 1

958497

Составитель И. Привалова

Техред Т, Фанта

Редактор М. Келемеш

Корректор Г, Огар

Тираж 505

BHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретении н открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Подн

Заказ 6983/37.

Филиал ППП Ч!атент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Формула изобретения

1. Способ выделения молочнокнслых бакте ° рий, устойчивых к антибиотическим, антисептическим и химиотерапевтйческим тест- препаратам, предусматривающий посев исследуемой культуры в питательную среду, ннкубированне с последующим исследованием заданных свойств культуры, отличающийся тем, что, с целью выявления наиболее устойчивых форм lO молочнокислых бактерий, перед посевом в питательную среду вносят средне — летальные н исследуемым тест-препаратам дозы этих црепаратов, а исследованию подвергают,выживтпие формы молочнокислых бактерий.

2, Способ по п. 1, о т л н ч а ю щ н йс я тем, что в качестве исследуемой культурт используют образцы кисломолочных продуктов, сквашенных спонтанньии путем, Источники информации, цринятые во внимание при экспертизе

1, Банникова Л. А. Селекция молочнокислых бактерий и их применение в молочной промышленности. М., "Пищевая промышленность", 1975, с. 229-236.

2. Скородумова А. М. Практическое руководство по технической микробиологии молока и молочных продуктов, М., Пищепромиэдат, 1963, с. 64 — 22б..