Питательная среда для выращивания посевного материала асsinомyсеs recifensis var еlyтiсus 2435

 

Союз Советских

Сфцнапнстнчвскнх

Ресаубпнк

O 0 H С A H И Е ()981359

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I ) Дополнительное к авт. свид-ву (22)3aseaeao 04. 05 ° 81 (21) 3283606/28-13 с присоединением заявки 1Й (23 ) П риорнтет (51)М. Кл.

С 12 N 1/20

С 12 N 9/00

3Ъвударстаеиый камктет

СССР ав двлзм мзобрвтенхй н открыткй

Опубликовано 15.12.82, Бюллетень М 46

Дата опубликования описания 15.1.2 82 (53) УДК 663.15 (088.8) !

Ю.С. Бабенко и Т.П. Килочек . - - . /

- i

Днепропетровский ордена Трудового Красного Зда государственный университет им. 300-летия Воссоединения.

Украины с Россией (72) Авторы изобретения (7I) Заявитель (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ

ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА ACTINOMYCES

RECIFENS IS VAR LYTICUS 2435

0,01

3

Остальное

Изобретение относится к микробио логической промышленности, а именно к получению литических ферментов ши. рокого спектра действия, которые могут быть использованы для разрушения клеток различных микроорганизмов с

5 целью получения биологически активных веществ внутриклеточной локализации усвояемого белка, изготовления на основе микробных лизатов питатель- 1 ных сред. Препараты литических ферментов могут быть использованы в научно-исследовательской работе для деградации клеток и выделения их структурных компонентов, а также в медицинской практике.

Известно использование среды Чапека в качестве питательной среды для выращивания посевного материала Actinomyces recifens s чаг Iyticus 2435 2в продуцента литических ферментов широкого спектра действия, содержащей источник углерода, источник азота, минеральные соли, агаp и воду, причем источником углерода является глюкоза, источником азота - нитрат натрия, а в набор минеральных солей в одят калий хлористый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый двузамещенный, железо сернокислое и кальций углекислый при следующем соотношении компонентов, r/ë:

Калий хлористый 0 5

Магний сернокислый 0>5

Калий фосфорнокислый двузамещенный

Иелезо сернокислое

Натрий азотнокислый

Кальций углекислый

Глюкоза

Агар

Вода

Посевной материал выращивается в течение 2-3 сут и используется для засева ферментационной среды в количестве 8- 104 в виде вегетативного ми целия 5 13.

Таблица1

Биомасса, г/л

Коэффициент увеличения биомассы

Время выращивания, ч

Предлагаемая среда

Базовая среда

4,0

1,25

0 32

3,4

3,25

0,95

2,1

3,25

l,55

723 981

Однако питательная среда для приготовления посевного материала имеет ряд недостатков, заключающихся в том, что штамм Act. гесiГепз1s var 1yticus

2435 при выращивании на этой среде накапливает малое количество биомассы, качество посевного материала низкое, в связи с чем при засеве ферментационной среды он вносится в количестве 8- 10,об. 3.

Целью изобретения является увеличение накопления биомассы, снижение количества посевного материала, вводимого в ферментационную среду, и улуч шение его качества.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для выращивания посевного материала Actinomyces recifensis var lyticus 2435 продуцента литических ферментов, содержащая источник углерода, источник азота, минеральные соли - двузамещенный фосфорнокислый калий и углекислый кальцийи воду, содержит в качестве источника углерода крахмал, в качестве источников азота - соевую муку и аммоний азотнокислый, а также дополнительно содержит хлористый кальций при следующем соотношении компонентов, вес. 3:

Соевая мука 0,4-0,5

Крахмал 3,0-5 0

Аммоний азотнокислый 0,07-0,08

Калий фосфорнокислый двузамещенный 0,01-0,02

Кальций хлористый 0,1-0,15

359 4

Кальции углекислый 0,2-0,4

Вода Остальное

Пример. Готовят посевную среду следующего состава, вес. l: соевая мука 0,48; ИН МО 0,075; крахмал 4,0;

К НРО 0,01; СаС1 О,1; СаСО 0,2, остальное вода, рН 8,0. Среду стерилизуют и после охлаждения засевают споровым материалом зрелой культуры Ас .

recifensis наг lyticus 2435. Выращивание посевного материала ведут в колбах Эрленмейера емкостью 500 мл, содержащих по 100 мл среды, на качалке (220 об/мин) при 280 С.

Через 48 ч количество мицелиальной массы в посевной среде составляет 3,25 против 0,95 г/л на базовой среде (табл. 1). Двухсуточный посевной ма0 териал в количестве 5 об. 3 вносят в ферментационную среду. В процессе ферментации в культуральной жидкости, освобожденной от мицелия, определяют бактериолитическую активность (тест культура Staphylococcus aureus 142а) и дрожжелитическую активность (тесткультура Candida quilliermondii).

Данные, иллюстрирующие уровень накопления биомассы и закономерности синтеза лизоэнзимов штаммов Act. reciЧелы s наг lyticus 2435 в зависимости от питательных сред, предлагаемой и базовой, использованных для выращивания посевного материала, приведены в табл. 1 и 2.

981359

Таблица2

Возраст посевноДрожжелитическая активность

Бактериолитическая активность

ro матеБазовая Предлагаемая 3 к К среда среда бк К

Предлагаемая среда

Базовая среда риала, ч (К) (к) 24

1450

157 5200

233 5600

200 5820

920

10000 .

192

2800

1200

15200

271

2600

1300

16200

2.70

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания посевного материала Actinomyces recifensis var lyticus 2435 продуцента литических ферментов широкого спектра действия, содержащая источник углерода, источник азота, минеральные соли - двузамещенный фосфорнокислый калий и углекислый кальций — и воду, отличающаяся тем, что, с целью увеличения накопления биомассы, снижения количества посевного материала, вводимого в ферментационную среду, и улучшения его качества, питательная среда содержит в качестве источника углерода крахмал, в качестве источника азота - соевую муку и аммоний азотнокислый, а также дополнительно содержит хлористый кальций при следующем соотношении компонентов, вес. 3:

Соевая мука 0,4-0 5

Крахмал 3,0-5 0

Аммоний азотнокислый 0,07-0,08

Калий фосфорнокислый двузамещенный 0,01-0,02

Кальций хлористый 0,1-0,15

Кальций углекислый 0,2-0,4 . Вода Остальное

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

Н 507644, кл. С 12 N 1/20, 1976 (прототип).

Тираж 505 Подписное жгород, ул. Проектная, Выращивание посевного материала на предлагаемой среде обеспечивает большую интенсивность накопления биомассы по сравнению с базовой средой. При одинаковых сроках культивирования со держание биомассы в сравниваемых сре.дах отличается в 2-4 раза (табл. 1).

Питательная среда позволяет получить более качественный посевной ма- у териал вегетативного мицелия, о чем свидетельствуют данные цитологических исследований и определения активности синтеза бактерио- и дрожжелитических ферментов (табл, 2).

36

Иицелиальная масса двухсуточной культуры, полученной на предлагаемой среде, представляет собой микроколонии со свободнорастущими тонкими, длинными, слабоветвящимися гифами в отличие от мицелия базовой среды с более короткими и толстыми гифами.

Как видно из табл. 2, использование посевного материала штамма Act. гесitåïsis var 1yticus 2435, выращенного на предлагаемой среде, обеспечивает при переносе на ферментационную среду более высокий уровень синтеза лизоэнзима, при этом максимальная концентрация бактериолитических ферментов в культуральной жидкости достигает 2800 ед/мл, дрожжелитическая16200 ед/мл против 1300 ед/мл и

5820 ед/мл соответственно в поототипе то есть бактериолитическая актив- .

l ) S0 ность возрастает в 1,5-2,5 раза, дрожжелитическая - в 2-3 раза. Кроме того, активное накопление биомассы в раннем периоде на предлагаемой среде и увеличение ее физиологической активности позволяет использовать 36-48-часовую

SS посевную культуру и сократить колиВНИИПИ Заказ 9634/37 филиал ППП "Патент", r.Ó чество вводимого посевного материала с 8-10 до 3-5 об. г.

Т. е. реализация изобретения позволяет увеличить накопление биомассы посевного материала, снизить количестео его при введении в ферментационную среду и улучшить его качество.