Способ дезинтеграции микроорганизмов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсннк

Соцналистнческик

Республик

«»962301 (61) Дополнительное к авт. сеид-ву )т 825626 (22) Заявлено 31. 03. 81 (21) 3272900/28-13 (51)М.Кл з с присоединением заявки ¹С 12 0 1/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий (23) Приоритет— (33) УДК 668. 392 (088. 8) Опубликовано 300982, Бюллетень №.36

Дата опубликования описания 30.09.82

П.И. Гвоздяк, О.Г. Гавриш, И.Н. Даценко, В.у. Никоненко, A Ñ. Лясковский, Н.Ф. Могиле ич и A.lo. Глинский як дуТцу

13 п,,ж... Я

Институт колоидной химии и химии воды им БЙЫИИЕКй (72) Авторы изобретения (71) Заявитель,A,B(Дум

AH Украинской CCP (54) СПОСОБ ДЕЗИНТЕГРАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к микробиологии и охране окружающей среды, в частности к способам дезинтеграции микроорганизмов.

По основному авт . св. М 825626 известен способ дезинтеграции микроорганизмов, предусматривающий приготовление суспензии микроорганизмов и ее обработку электрическим полем в присутствии анион- и катионобменных смол или их смесей (1).

Недостатком данного способа является то, что процесс ведут с использованием дистиллированной воды в результате чего после обработки микроорганизмов электрическим полем в дезинтеграте .создаются физиологические условия реакции среды (pH 4,76,6). В этих условиях интенсивно работают протеолитические фер-. менты, имеющиеся в любой микробной клетке и освобождающиеся из нее при обработке по известному crioсобу, что приводит к энзиматическому разложению белков, в том числе и ферментов, разрушающих гексаметилендиамин (ГМД). Это не дает возможности получить из микроорганизмов-деструкторов ГМД ферментный препарат с вы-. сокой активностью разрушения этого соединения. Кроме того, обработку электрическим полем осуществляют в присутствии дорогостоящих и дефицитных ионобменных смол

Цель изобретения — увеличение активности извлекаемого из микробных клеток ферментного препарата, разрушающего гексаметилендиамин, а также удешевление способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дезинтеграции микроорганизмов по авт, св. М 825626 обработку биомассы электрическим по лем осуществляют в сточной воде, со15 держащей гексаметилеидиамин при рН 912,при этом при обработке биомассы в электрическом поле используют обработанные ионообменные смолы.

Пример 1. 1 г сырой биомас20 сы микроорганизмов-деструкторов ГИД суспендируют в 5 мл сточной водй, содержащей ГМД в концентрации 3 г/Л с рН 10. Суспензию помещают в стеклянную цилиндрическую ячейку диамет25 ром 19 ьм,высотой 65 мм,с двумя круглыми электродами диаметром 3 мм иэ нержавеющей стали, расположенными на максимальном расстоянии друг от друга. Ячейка предварительно заполняется 15 г влажной смеси отработанных ионообменных смол AB-17 и КУ-2 °

962301

Концентрация ГМД, мг/л

4ф

Снижение концентраций (во сколько раэ) исходная конечн ая

Центрифугирование

В дистиллированной воде

1500

30 рН 6,0

Без центрифугирования

100

1500

В с т очной воде, содержащей ГМД, Центрифугирование

300

3000 рН 10,0

Без центрифу« гирования

600

3000

Центрифугирование рн 12,0

600

3000

Без центрифугиров ания

1500

3000

Формула изобретения способ дезинтеграции микроорганизмов по авт. св. Р В25626, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью увеличения активности извлекаемого 65

На электроды подают постоянное напряжение 25 В. Через 7 мин электричес. кое поле отключают, дезинтеграт, отделяют от ионобменных смол,а послед ние дополнительно промывают 35 мл сточной всщы. 5

Часть полученного дезинтеграта центрифугируют 10 мин при 6000 об/мин.

Определение ферментативной активности супернатанта отцентрифугированного деэинтеграта и дезинтеграта, не !О подвергнутого центрифугированию, проводят следующим образом.

1. мл супернатанта и дезинтеграта вносят в 100 мп сточной воды, сэдержащей ГМД в концентрации 3 г/л, и ин- 1 кубируют в течение 5 мин, при 75 С.

По истечении периода инкубации опре-, деляют концентрацию ГМД в пробах известным методом с помощью реакции с

2,4-динитрохлорбенэолом.

Опыты показали, что после пятиминутного контакта исследуемых проб с реальной сточной водой, содержащей

ГМД, концентрация последнего снизилась до 10 мг/л в случае инкубации с супернатантом и до 5 мг/л — в случае инкубации с дезинтегратом, не под- вергающемся центрифугированию (таблица) .

Пример 2 (известный способ).

1 r сырой биомассы микроорганизмовдеструкторов ГМД суспендируют в 5 мл дистиллированной воды и помещают в наполненную смесью обработанных смол стеклянную цилиндрическую ячейку, аналогичную примеру 1. Клетки раэру- 35

Дезинтеграция биомассы Подготовка дезинтеграта шают аналогичным образом, После бтделенин полученного деэинтеграта от ионобменных < смол последние дополни- тельно промывают 35 мл дистиллиро-. ванной воды.

Затем определяют ферментативную. активность супернатантаи дезинтеграта: в 1 мл супернатанта и в 1 мп деэинтеграта добавляют по 1 мп сточной воды, содержащей ГМД в концентрации

3 г/л (таким образом, в пробах устанавливаются концентрации ГМД 1,5 г/л), и инкубируют s течение 5 мин. По истечении периода инкубации определяют остаточную концентрацию ГИД в пробах.

Опыты показали, что после пятиминутного контакта исследуеьих проб со сточной водой, содержащем ГМД, концентрация последнего снизилась до

30 мг/л в случае инкубирования сточной воды с супернатантом и до 15 мг/л

B случае инкубации с дезинтегратом, не подвергающимся центрифугированию.

Таким образом, ферментный препарат полученный по предлагаемому способу при обработке культуры в сточной воде с рН 9-11 обладает более высокой (в 6 и 15 раз) диструктивной активностью до отношению в ГИД в сравнении с ферментным препаратом, полученным по известному способу при обработке суспензии микроорганизмов-деструкторов ГМД s дистиллированной воде.

- Зависимость активности ферментного препарата от способа разрушения биомассы представлена в таблице. из микробных клеток ферментного препарата, разрушающего гексаметилендиамин, а также удешевления способа, . обработку биомассы электрическим по-, лем осуществляют в сточной воде, со962301.

Составитель В. Голимбет

Редактор Л. Пчелинская Техред Т. Фанта Корректор C. Шекмар

Заказ 7428/37 Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 держащий гексаметилендиамин при рН 912, при этом при обработке биомассы в электрическом поле используют отработанные ионобмеиные смолы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

9 825626, кл. С 12 К 1/00, 1979.