Способ получения вещества,обладающего противоклещевой и глистогонной активностью

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ з

CI t I3 я.„

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2968603/28-13

„{22) 22. 08. 80 (31) 54-107550 (32) 23.08.79 (33) Япония (46)(07 04.83. Бюл. И 13 (72)Е.Такигути, Хироси Мисима, Синдзиро

Ямамото иИития Терао (Япония) (71)Санкио Компани Лимитед (Япония) (53) 615.779.931(088.8) (56) 1. Патент Великобритании

М 1390336, к4. С 2 С, 1975.

2. Патент СЮ У 4144352 кл. 424-279, 1978.(54)(57) 1, CflOCOli ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОКЛЕЩЕВОЙ

И ГЛИСТОГОННОД АКТИВНОСТЬЮ Формулы,.,SU„„1011055 А Ж С 12 Р 1/06 // С 12 P I/06;

С 12 Й 1/465 отличающийся тем, что, штамм Streptomyces В=41=146 выращивают на питательной среде, содержащей источники углерода и азота, при

22-30 С с последующим выделением целевого продукта .из культуральной жидкости, концентрированием и очисткой.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что выращивание осуществляют на среде, содержащей в качестве основного источника углерода глюкозу в концентрации 6-83 и дополнительного источника -углерода — лактозу, мальтозу и/или маисовый крах- а мал в концентрации 0,5-2 и,в качест- Е ве источника азота — смесь муки соевых бобов крупного помола 0,5-12 и снятого молока 1-2r,. С:

3. Способ по и. 1, о т л и ч а юшийся тем, что концентрироваwe и очистку проводят до содержания целеврго продукта 25-50>.

1011055

Изобретение относигся к микробиологической промышленности и касается получения вещества, обладающего противоклещевой и глистогонной актив- . ностью.

Известен способ получения вещества В-41,. обладающего инсектицидной и противоклещевой активностью, с исполь зованием штамма Streptomyces 8-41-146 $ 1).

Известен также способ получения вещества В-41 (мильбемицина-), обладающего также и глистогонной активнос" тью с использованием того же: продук та f2 .

tS

Однако известные способы не обеспечивают получения вещества формулы J (И

O x(%3 (Q

Цель изобретения - получение вещества формулы, обладающего противоклещевой и глистогонной активностью.

Мставленная цель достигается тем, что согласно способу получения вещества, обладающего противоклещевой j5 и глистогонной активностью Формулы 1 штамм Streptomyces 13-41-146выращива- . ют на питательной среде, содержащей источники углерода и азота при 2230 Г с последующим выделением целево- 40 го продукта иэ культуральной жидкости, концентрированием и очисткой.

При этом выращивание осуществляют на среде, содержащей в качестве основ" ного источника углерода глюкозу в 45 концентрации 6-8 и дополнительного источника углерода - лактозу, мальтозу и/или маисовый крахмал в концентрации 0,5-И и в качестве источника азо" та - смесь муки соевых бобов крупного помола 0,5-13 и снятого молока 1-23.

Кроме того, концентрирование и очистку проводят до содержания целевого продукта 25-503.

Вещество, обладающее противокле- . щевой и глистогонной активностью, получают путем культивирования штамма Streptomyces В-41-146. Этот штамм депонирован в Исследовательском институте ферментации, Агентства Промышленных Наук и Технологии,Министерства

Внешней торговли и промышленности, Япония, под номером 1438, а также под наименованием "Бикокен-кинки 1438";

Выращивают штамм в питательной среде, содержащей источники усвайваемого углерода и усваиваемого. азота. К источникам углерода относятся глюкоза, сахароза, крахмал, глицерин, экстракт солода, молоза и масло соев ьк бобов.

Предпочтительным источником углерода является глюкоза, используемая в количестве 6 8 (вес./об.) . Вместе с глюкозой используют дополнительные источники углерода - лактозу, мальтозу и крахмал моиса в количестве 0,52,04 i вес./об,). Чтобы поддерживать величину рН постоянной, в процессе выращивания добавляют избыточное количество глюкозы.

К источникам азота относятся мука крупного помола соевых бобов, зерна пшеницы, мясной экстракт, пентон, свежие дрожжи, крутой маисовый ликер, сульфат аммония и нитрат аммония. В качестве источника азота используют смесь муки соевых f3o6oa крупного помола 0,5-1,03 снятого молока 1,0-2,03. При необходимости в среду для выращивания культуры добавляют аминокислоту (например глицин или аргинин).

При необходимости добавляют также неорганические соли, такие как карбонат кальция, хлорид натрия, хлорид калия или фосфаты, можно также добавлять другие органические или неорганические материалы, которые способствуют росту микроорганизмов и ускоряют образование вещества.

Высокий выход вещества получают при использовании среды, которая содержит 6"83 глюкозы, 0,5-23 лактозы и/или муки соевых бобов крупного помола и 1,0-2,03 снятого молока.

Выращивание осуществляют в аэробных условиях при 22-30 С, предпочтительно при 28 С. Иаксимальной производительности вещества достигают спустя 5-10 дн после начала выращивания, которое осуществляют либо при встряхивании, либо в резервуаре с мешалкой.

Количество вещества в бульоне определяют следующим образом °

Известное количество, например

3 г, бульона для выращивания культуры заливают в небольшую пробирку, в

01 i 055 4

SS т3 1 которую добавляют 10 мл ацетона. Затем смесь эксхрагируют при встряхивании и. подвергают центрифугированию. В образующийся сверху раствор добавляют ацетон до общего объема

10 мл. Полученный в результате .раствор помещают на заранее подготовленное место на пластинке для тонкослойной хроматографии (силикагель, например Кизельгель 60 F 254) в количестве, например, 10-20 нл. Затем пластинку проявляют в течение 4 ч смесью 18:82 (об. ) диокаана и тетрахлорида углерода. Пробу исследуют при помощи сканирующего устройства или тонкослойной хроматографии в области с длиной волны 245.

Вещество выделяют из бульона для выращивания культуры, используя натуральный адсорбент (например, активированный углерод, двуокись алюми.ния или силикагель), синтетический адсорбент (например, Диаиен hP-20), абсорбент (например, Авицел), ионообменную смолу, ионообменный гелевый Фильтр.

Выделение осуществляют следующим образом.

Бульон для Ферментации фильтруют с использованиЕм ускорителя Фильтрования (такого как диатомовая земля) с тем, чтобы получать фильтровальную лепешку, которую затем подвергают экстрагированию метанолом. Затем в водный метановый раствор добавляют воду и полученный в результате раствор экстрагируат гексаном. Фазу гексана отделяют и концентрируют выпариванием при пониженном давлении, в результате чего образуется маслянистый материал, содержащий искомое вещество. Этот маслянистый материал помещают в колонну, содержащую силикагель 1,например, Вакогель С-200) и элюируют, например, смесью 95:5 (сб) гексана и ацетона с тем. чтобы собрать фракцйи, содержащие искомое вещество. Эти фракции концентрируют выпариванием при пониженном давлении причем снова образуется маслянистый материал, который растворяется в небольшом количестве метанола, и добавляют в колонну из материала Сефадекс

l Н-20, затем элюируют метанолом. Собирают фракции, содержащие искомое вещество, растворитель удаляют и ос. таток растворяют в небольшом количес ве метанола. Добавляют воду и смесь выдерживают при комнатной температуре. В результате получают вещество в виде пены или пузырьков, которые после разрушения дают аморфный порошок.

После перекристаллизовывания из смеси 20:1 (об.) гексана и этилацетата вещество получают в виде небольших игл с т.пл. 186-188 С. Процедуру очистки вещества можно проводить на

10 любой стадии и использовать неочищенный продукт, которь|й содержит смесь мильбемицинов и искомое вещество. Åcли смесь, содержащая два или более таких веществ, используется без полного разделения, то достаточно, чтобы полученный в результате продукт давал 1003 эффект при применении против клещей с концентрацией 5 ч,/млн.

Содержание вещества в неочиценном продукте составляет предпочтительно не менее 25-50 вес.В.

Полученное вещество обладает высокой противоклещевой при применении против взрослых клецей и яиц, а также глистогонной активностью.

Вещество может быть применено против таких клещей, как клещик паутинный двупятнистый (Tetrahycnus urtrede), европейский красный клещ (Pano30

nychus ulmi) цитрусовый красный клеЭ щик (Panonychus сitri) и клещи видов

Au 1 ops или Acu1 us, . которые паразитируют на Фруктах, растениях и цветах.

Вещество также обладает активностью против клещей вида 1х odidas, doerma

nyssidas и Sareoptidae, которые паразитируют на животных. Вещество об ладает также высокой активностью против таких эктопаразитов как Oestrus, Lucilra Hypoderma, Ctasurophilus, блох,;вшей и т.д., а также насекомых (таких как тараканы или мухи ) и некоторых других видов насекомых, являющихся вредителями садового и сельского хозяйства, таких как тля и личинки насекомых других Lepidoptera.

Кроме того, вещество является активным при применении против круглых червей, таких как черви вида Heloidogyne, и клещей, которые обитают в

Ю .почве.

При использовании против клещей или насекомых вещество предпочтительно разбавляют носителем с целью получения композиций, таких как порошки, крупные порошки, гранулы, мелкие гранулы, смачиваемые порошки, эмульгируемые концентраты или масло.

5 1011

Носитель, используемый для получения таких композиций, может быть синтетическим или натуральным, неорганическим или органическим и, в общем случае, любым носителем, который обыч-й но добавляют в инсектициды или акарициды для того, чтобы активный ингредиент быстрее достигал объекта, который подвергается обработке.(например, растения, клеща или насекомоговредителя), или упростить хранение, транспортировку и работу с активным инГредиентом.

Примерами соответствующих твердых носителей могут служить неорганичес" кие материалы, такие как глина, тальк диатомовая земля, каолин, бентонит, карбонат кальция или синтетический силикат кальция; натуральные или синтетические смолы, такие как кумароно- 20 вые, алкидные и поливинилхлориды; воски, такие как пальмовый и парафин; ореховая скорлупа, например скор" лупа грецкого ореха, или мука соевых бобов крупного помола. 2$

Примерами соответствующих жидких носителей могут служить вода; спирты, такие как этанол или изопропанол; гликоли, такие как этиленгликоль; простые эфиры гликолей, такие как монофениловый простой эфир этиленгликоля или моноэтиловый простой эфир диэтиленгликоля; кетоны, такие как ацетон, метилизобутилкетон, циклогексанон, ацетофенон или изофорон, простые эфиры, такие как тетрагидро35 фуран или диоксан, ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол, ксилол или метилнафталин, хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен и тетрахлорид углерода; Фракции нефти, имеющие низкие, средние и высокие температуры кипения, содержащие керосин, светлые нефтепродукты или ароматические углеводороды.

Вещество можно готовить в виде аэрозоля, в этом случае носителем могут быть Фторуглероды (включая те, которые известны под торговой мар" кой""фреон"), ожиженный нефтяной М газ, диметиловый простой эфир и ви нилхлоридный мономер.

При необходимости композиции могут также содержать поверхностно-активный агент с целью эмульгирования, диспергирования, смачивания или распространения активного соединения, который может быть как ионным, так и

055 6 неионным материалом. Примерами соответствующих анионных поверхностно-активных агентов могут служить соли натрия и кальция лигно(моно)сульфокислоты, соли натрия и калия олеиновой кислоты, соль натрия лаурил(моно) сульфокислоты и соли натрия и кальция додецилбензол(моно )сульфокислоты.

Примерами соответствующих катионных поверхностно-активных агентов могут служить высшие алифатические амины и конденсаты высших алифатических аминов с окисью этилена. Примерами неионных поверхностно-активных агентов могут служить глицерины жирных кислот, сложные эфиры сахарозы жирных кислот, конденсаты окиси этилена с высшими алифатическими спиртами, окиси этилена с высшими жирными кислотами и окиси этилена с алкилфенолами или алкилнафтолами и сополимеры окиси этилена с окисью пропилена, Противоклещевые или инсектицидные композиции в дополнение к вышеуказанным добавкам содержат защитный коллоид (такой как желатин, арабская смола, казеин, поливиниловый спирт или карбоксиметилцеллюлоза ) или тиксотропный агент (такой как полифосфат натрия или бентонит). Композиция может также содержать другие соединения, обладающие противоклещевой активностью, например 2-(;-метилпропил)-4,6-динитрофенил-f, äèìåòèëакрилат, ди-(и-хлорфенил)-циклопропилкарбонил, iЧ-(4-хлор-2-метилфенил) -N, й-диметилформамин; -2,4,4,5-тетрахлорI дифенилсульфон; 1,1-бис-(п-хлорфенил)-2,2,2-трихлорэтанол; 2-втор-бутилфенил-И-метилкарбамат, м-толил-М-метилкарбамат или минеральное масло, чтобы в некоторых случаях увеличить активность композиции; в некоторых случаях можно ожидать синергетический эффект.

Вещество можно также использовать в смеси с другими фунгицидами, герби. цидами, регуляторами роста растений, привлекающими вредителей веществами или удобрениями.

Полученное известным способом вещество обладает активностью против гельминитов у человека и животных и применяется в виде напитка или капсулы. Оно может применяться в виде водного раствора или раствора в других подходящих нетоксичных растворителях или в виде суспензии или дисперсии с использованием ускорите, 7 10110 лей суспендирования и смачивающих агентов, таких как бентонит, или других составляющих. Напиток должен также содержать противопенный агент.

Предпочтительно, чтобы напиток содер- жал активное соединение в количестве

0,01-0,5 или 0,01-0,1 вес.3.

Кроме того, вещество можно применять в форме сухих твердых капсул, пилюль или таблеток, содержащих зара- 1в нее определенное количество активного соединения. Такие композиции можно получать при помощи гомогениэирующего перемешивания активного соединения с одним или несколькими тонкоизмельченными материалами, такими как разбавители, наполнители, дезинтегратары или связывающие агенты (например, крахмал, лактоза, тальк, стеарат магния или растительные смолы).

Вес активного ингредиента можно варьировать в широких пределах в зависимости от вида животногоукоторого подвергают обработке, степени заболевания и веса тела животного.

Вещество можно вводить животным путем равномерного распределения его в корме или применять в Форме шариков. С целью достижения удовлетворительного антипараэитического эффекта корм должен содержать активное соединение в количестве 0,00010,02 вес.4.

Вещество можно также растворить или диспергировать в жидком носителе и применять парентерально животным в виде инъекции s ж еeл уyд оoкK, мышцу, легкие или под кожу. При парентеральном применении- в качестве носителя предпочтительно использует растительное масло, такое, как арахисовое или хлопковое масло. При парентеральном применении активное соединение содержится в количестве 0,0550 вес.4 от всей композиции. Вещест во можно использовать местно, непо- 4 средственно на открытом участке кожи, например, распылением. Обработку животных можно проводить в течение короткого промежутка времени, например в течение 1-5 дн. 50

Пример 1. Получение вещест-ва.

600 мл предварительно подготовленной среды, содержащей 2 вес./об. глюкозы, 14 муки соевых бобов крупно- го помола, 0,53 насыщенного маисового,:ликера и 0,2 хлорида натрия, по мещают в колбу Эрлемебера емкостью

55 8

1 л. Колонии спор штамма"Streptomyces

В-41-146 прививают на упомянутую сре- ду и затем выращивают в течение 48 ч при 27 С. flo истечении этого промежуто ка времени содержимое двух таких 2литровых колб Эрленмейера переносят в ферментер, снабженный устройством для его встряхивания, емкостью 30 л, который уже содержит 20 л тщательно стерилизованной среды для выращивания культуры, содержащей 43 вес./об. глюкозы, 1Ф вес./об. муки соевых бобов крупного помола, 0,53 вес./об. маисового крахмала, 13 вес./об, снятого молока, 0,24 -вес./об. насыщенного маисового ликера и 0,33 хлорида натрия. Значение рН перед стерилизацией 7,2-7,5. Затем культуру инкубируют при 28 С при давлении внутри Ферментера 0,5 xr/ñè s течение 10 дн.

После завершения этой стадии 20 л бульона для выращивания культуры подкисляют до рН 3 добавлением серной кислоты, а затем после добавления

1 кг Селита, вспомогательного фильтруащего материала, смесь Фильтруют под давлением, в результате чего образуется фильтровальная лепешка весом примерно 3 кг. Эту лепешку экстрагируют при помощи 15 л метанола и экстракт фильтруют. 15 л метанолового раствора, полученного таким образом, разбавляют 5 л воды и экстрагируют

20 л гексана. Полученный гексановый раствор сушат над безводным сульфатом натрия и затеи концентрируют выпариванием при пониженном давлении в водяной бане при 40-45ОC а результате чего образуется 22 г маслянистого материала.

Полученный маслянистый материал растворяют в 30 мл гексана и адсорбируют на колонне, содержащей 2 кг силикагеля, сбалансированного гексаном. Колонну элеирует смесью гексана и ацетона 95:5 (об.). Фракцию объемом 2 л, содержащую искомое соединение, собирают и затем концентрируют при пониженном давлении в водяной бане при 40-45 С, в результате чего образуется 550 мг маслянистого материала. Этот материал растворяет в 1 мл метанола и раствор помещают в колонну, содержащую 200 мл Сефадекса L Н-20, который сбалансирован метанолом. Затем колонну элюируют метанолом, в результате чего образуется фракция объемом 65 мл, со1011055 10 держащая искомое вещество. Эту фракцию концентрируют выпариванием при пониженном давлении при 4 С, полученный в результате остаток растворяют в 2 мл метанола и метаноловый раствор разбавляют 2 мл воды. Смесь выдерживают при комнатной температу" ре, в результате чего получается

110 мг соединения 8-410 в виде аморфного порошка. 1О

Пример 2. Получение вещест" ва.

8 2-литровую колбу, содержащую

600 мл предварительно приготовленной среды, содержащей 14 (вес./об.) саха- Is розы, 0,354 (вес./o6.) полипептона и 0,054 (>вес./об.) дикалийартофосфата, прививают колонии спор штамма

8-41-146 Streptomyces и затем микроорганизмы выращивают в течение 48 ч уц при 27оС Содержимое трех таких колб переносят затем в резервуар для ферментации емкостью 600 л, в котором уже содержится 300 л тщательно стерилизованной среды для выращивания культуры, которая содержит 84 в/о глюкозы, 14 в/о муки крупного помо" ла соевых бобов, 0,53 в/о маисового крахмала, 13 в/о снятого молока, 0,23 a/о насыщенного маисового ликера, 0,3ь в/о хлорида натрия и

0,054 в/о карбоната кальция. рН сре" ды поддерживают на уровне 7,2-7,5.

Выращивание осуществляют при 28 С при перемешивании со скоростью 150200 об/мин и внутреннем давлении

0,5-1 0 кг/см в течение 12 дн.

После завершения этой стадии количество вещества в среде составля- ет 180 мкг/мл. 8 300 л полученной в результате среды для выращивания культуры рН обеспечивается на уровне 3 при помощи добавления серной кислоты, а затем в нее добавляют 15 кг

Селита, вспомогательного Фильтрующего материала, и смесь фильтруют под давлением, в результате чего образуется Фильтровальная лепешка весом

40 кг. Эту лепешку экстрагируют при помощи 200 л метанола и Фильтруют.

Добавляют 150 л води в экстракт ме..танола и полученную смесь экстрагируют дважды, оба раза при помощи

250 л гексана. Полученный гексановый раствор сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют выпариванием при пониженНом давлении в soдяной бане при 40-45ОС в результате чего образуется 350 r масла.

Это масло растворяют в 400 мл гексана и адсорбируют на колонне, содержащей 3 кг силикагеля, который пред- варительно сбалансирован гексаном.

Колонну элюируют смесью гексана и ацетона 95:5 об., в результате чего получается. фракция элюата, содержащая искомое вещество. Эта Фракция концентрируется выпариванием при пониженном давлении над водяной ванной при 4045 Г, в результате чего образуется

33 r неочищенных кристаллов. Полученные кристаллы растворяют в смеси гек-. сана и этилацетона 20: l об, ), из которо" s результате перекристаллизации получают 17,4 г вещества е виде бесцветных кристаллов в форме игл, которые плавятся при 186-188 С и имеют ранее описанные свойства.

Пример 3. Порошок.

10 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка добавляют и тщ>ательно перемешивают с 5 вес.ч. белого углерода. 8 эту смесь добавляют 50 вес.ч. глины. Полученную смесь тщательно перемешивают, трижди измельчают в порошок в мельнице тонкого помола ударного типа, а затем снова тщ>ательно перемешивают, в результате чего образуется порошок.

Пример 4. Смачиваемый порошок.

40 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка смешивают с "..0 вес.ч. белого углерода. В полученную смесь добавляют 5 вес.ч. додецилбензолсульФоната натрия, 2 вес.ч. поливинилового спирта и 33 вес.ч. глины. Полученную смесь тщательно перемешивают.

Далее смесь трижды измельчают в мельнице тонкого помола ударного типа, снова тщательно перемешивают, в результате чего получается смачиваемый порошок.

Пример 5. Эмульгируемые концентраты.

3 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка> 7 вес.ч. полиоксиэтиленнонилфенилового простого эфира, 3 вес.ч. додецилбензолсульфоната кальция и

87 вес.3 ксилола перемешивают и фильтруют, в результате чего получается раствор, который можно использовать в качестве эмульгируемого концентрата.

Пример 6. Композиция на основе масла.

l0 вес.ч. вещества в виде аморфного порошка растворяют в 10 вес.ч, ксилола и затем B раствор добавляют

Таблица 1

«а «««аа «е е«

Гибель взрослых особей, 3, FlpH концентрации испытываемых растворов

««««««««««««««««««««««««««««««««««

Соединение

Г °

Г

3 е а«ее «аее

«««е«««е««е

0,3

««е«« ««««««««

100 100

100 85

100 90

74 25

Предлагаемое

100 89 32

43 11 0

45 8 1

Иильбемицин 64

Иильбемицин 4

Келтан

«

Пример 8. Противоклещевая активность относительно яиц двумятнистого паутинного клещика (Тейгаnychos urticae)..

В этом испытании откЛадывают яйца в возрасте 1 день Tetranychus urtIсае, которые предварительно наносятся на листву китайском вигны. Листья обрабатывают веществом, полученным предлагаемым способом, а также вещест" вами, приведенными в примере 7« .Нисло яиц на одном листе составляет примерно 100. Спустя 2 нед. после обработ4в ки определяет число яиц, которые- не вылупились.

Полученные результаты даны в табл.2, где указаны проценты от общего числа яиц. Таблица.?

I е» «ее«ае а« Е е е а

Количество погибших яиц, Ф от общего числа, при концентрации испытываемого раствора, ч./млн

Вещество

30 10 3 1 0,3

« » е ееа

96 52 10

60 30 0

55 20 5

100 100

98 85

93 89

Предлагаемое

Мильбемицин 0fq

Иильбемицин о(19- 0

«

Келтан

11 . I 011055 l2

80 вес.ч,, машинного масла. Далее,лителя типа Иизухо. Далее листву су. смесь фильтрует, в результате чего шат на воздухе и выдерживают в. терполучается композиция на основе мас- мостатических условиях при 2g С в ла. течение 72 ч, после чего определяет

П P и м е р.7. Противоклещевая ак- э количество погибших клещей. Это ко-.. тивность относительно двупятнистого личество составляет 30-35 на лист, в паутинного клещика (Tetranychus ur- каждом испытании используется два

t Icae) . листа.

3 весА вещества эмульгируат, концентрат приготавливают аналогично Ie Эксперимент проводится с испольпримеру 5. Затем концентрат раэбавля- зованием предлагаемого вещества, а ют водой, чтобы получить концентра- в контрольных экспериментах исполь-. цие активного соединения, которая зуют мильбемицины х. и и из" указана в табл. 1. На листву китай- вестный сельскохозяйственный препаской вигны, содержащую взрослых самок ц рат Келтан (на основе 1.,1-бис(хлор.ТейгапусЬов urtlcae, раэбрыэгивают . фенил)-2,2,2-трихлорэтанола1. Полуиспытываемый раствор в количестве ; ченные результаты представлены в

:5.см на 2 листа при помощи распы- . табл. 1. ъ

13 1011055

Пример 9, Противоклещевая активность относительно цитрусового красного клещика (Panonychus сitri).

Испытание проводят, как в приме" ре 7, за исключением того, что испольТаблица 3

Гибель клеща, 3, при концентрации испытываемого раствора, ч./млн

Соеди не ние

0,03

100 95 90

82 68 55

82 70 48

100 100

100 98

100 95

Предлагаемое

Мильбемицин о« л

Мильбемицин « 3

Келтан

Таблица 4

Количест- ГлистоВещество,во в кор- гонная ме, ак-.ивность л

0,05 Предлагаемое

100

0,005

0,0005

10О

Смесь мильбемициновс и о(0,03

Смесь мильцинов« л

i4 d-,ои eV

27,6

0,03

В дополнение к тем результатам, которые приведены в табл . 3, был проведен эксперимент с эмульсией Келта- 2$ на с концентрацией 30 ч./млн, но да,же при такой концентрации гибель клеща составляет только 934.

Из приведенных результатов видно, что предлагаемое вещество обладает Зв в высшей степени значительной противоклещевой активностью по:сравнению с мильбемицинами «i sat,y, которые в свою очередь обладают существенно

t более высокой активностью по сравне3$ нию с известным препаратом против акарицидов Келтаном.

ll р и м е р 10. Глистогонная (активность против Nematospiroides

dubris.

Самцы мыши в возрасте 4 нед. вида ®

RFVL, вес которых 18-22 г, заражают стоматическим.способом паразитом вида Nematospiroides dubius. Затем мышей разделяют на группы из пяти животных каждая, и каждая мышь полу- 4$ чает корм, содержащий предлагаемое вещество в количестве, указанном в табл. 4, в течение 7 дн. после заражения, а затем снова им дают необработанную пищу. Спустя 14 дн.после. $6 заражения животных усыпляют и определяют количество паразитов в малом кишечнике. Результат сравнивают с конт рольной группой, которая подвергается аналогичной процедуре заражения, но не поЛучает предлагаемое вещество.

Результаты глистогонной активности приведены в табл. 4. зуют листья тута, на которые наносят взрослых самок цитрусового красного клещика. Полученные результаты приведены в табл. 3.

Данные табл. 4 показывают, что предлагаемое вещество обладает глистогонной активностью, которая примерно в 2 раза выше, чем активность смеси мильбемицинов.

Пример 11. Глистогонная активность против Toxocara cati.

Используют в качестве животных

18 котят (3 самца и 15 самок) весом примерно 1,6-3,0 кг, которые в естественных условиях заражены паразитом Тохосага cati. Каждому котенку стоматическим способом вводят одну дозу вещества, диспергированного в оливковом масле, в следующих коли55

10110!

5 чествах: 2 котятам - 5 мг/кг, 3 котятам - 2,5 мг/кг, 2 котятам - 1 мг/

/кг. 3 котятам - 0,5 мгlкг, 3 котятам - 0,25 мг/кг, 2 котятам0,1 мг/кг.и 3 котятам - 0,05 мг/кг. ПереД обработкой показатель ЯГК (т.е.. число яиц на 1 r кала ) составляет 15016250.Спустя 1 нед. после обработки тот, же показатель равен нулю у всех котят. а общее число изгнанныхглистов втече.1 ние той же недели 2-40. В результате вскрытия установлено, что ни у одного котенка глистов нет.

Пример 12. Глистогонная активность против Toxocara canis

В качестве животных используют

13 щенков (3 самца и 10 самок) весом 1,2-13,7 кг, которые в естественных условиях заражены паразитом

Toxocara canis. Каждому щенку сто- 20 матическмм способом вводят одну дозу вещества, диспергированного в оливковом масле, в следующих количествах: 1 щенку - 5 мг/кг веса животного; 2 щенкам - 0,25 мг/кг, 4 щен- 23 кам - 0,1 мг/кг, 3 щенкам — 0,05 мг/

/кг, 2 щенкам — 0,025 мг/кг и 1 щенку - 0,01 мг/кг. Перед введением препарата показатель ЯГК составляет

100-18400. Спустя 1 нед после обра- 3в ботки тот же показатель для всех щенков равен нулю, а общее число изгнанных глистов в течение той же недели

2-36 на каждого щенка. В результате вскрытия установлено, что ни у одно3S го щенка глистов нет..

Пример 13. Глистогонная активность против Тг1сЬцг!з чи1р1з.

В качестве животных используют

5 собак (2 самки и 3 самца) весом

6,2-11,5 кг в возрасте 2 или 3 лет.

Каждому животному стоматическим способом вводят одну дозу 1 или 5 мг/xf веса животного вещества.в виде капсулы, покрытой желатином. Установлено, что эти собаки в естественных, условиях заражены паразитом Trichuris vulpus. Перед обработкой показатель ЯГК составляет 100-3500. Спустя 1 нед после обработки тот же показатель составляет 0-200, а общее число изгнанных в течение недели глистов 8-451. В результате вскрытия установлено, что число оставшихся паразитов составляет 0-33., т.е. эффективность препарата 92-1004.Пример 14. Глистогонная активность против Ancylostoma canium.

В качестве животных используют

5 собак (2 самки и 3 самца) весом

7,0-11,5 кг в возрасте 2 или 3 лет.

Эти собаки в естественных .условиях заражены паразитом Ancyiostoma canium Каждой собаке стоматическим сйособом вводят одну дозу вещества в виде капсулы, покрытой желатином.

Вещество вводят собакам в следующих количествах: 2 собакам - 0,5 м-/кг, веса животного; 2 собакам - 1 мг/кг и 1 собаке - 5 мг/кг. Перед введением соединения показатель ЯГК состав ляет 200-l550. Через 1 нед после обработки тот же показатель для всех собак равен нулю, а общее число изгнанных глистов в теченче недели составляет 4-82 на собаку. В результате вскрытия установлено, что ни у одной собаки глистов нет.

Предлагаемый способ позволяет получить вещество, обладающее высокой проти оклещевой и глистогонной активностью.

Составитель С. Малютина

Редактор В. Петваш Техред Т Маточка КорректорД ДзЯтко

Заказ 2516/44 Тираж 521 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1.1)ОЯ Иосква Ж-Я Раушская наб. д. 4/g

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4