Способ получения моноамидных производных терефталевой кислоты

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3(5 ) С 07 С 103/84

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ . К ПАТЕНТУ а ВМ

1 в

1 оо-©-ооов <п1

Ql

Ф4 ноо-©Ооое и>

И где R низший С „-С4-алкил с нормальной или разветвленной цепьюу водород или низший С -С—

- алкил с нормальной или разветвленной цепью, R (21) 2775640/23-04 (22) 08. 07. 79 (31) 68931/78 .(32) 09.06 ° 78 (33). Япония (46) 30.04.83. Бюл. Р 16 . (72) Сакае Такаку, Такаси Мори, Ясуси Мураками, Есиюки Осуги, Сигеюки Катаока, Ясухиса Такеда, Такаси

Мацуно, Есимицу Инда, Акико Арига, Акира Окаэаки, Каэуо ИГуса, Тоситика Огасавара и Минору Синдо (Япония) (71) Чугаи Сейяку Кабусики Кайся (Япония) (53) 547.584.054.1(088.8) (56) 1; Патент СССР Р 812170, êë. С 07 С .103/75, 1976.

2. Бюлер К., Пирсон Д. Органические синтеэы. Ч. II N. "Мир", 1973, с ..388-39 0. (54) (57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОАМИД.НЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ТЕРЕФТАЛЕВОЙ КИСЛО.ТЫ общей формулы мнбов

„„SU„„1015821 . А

R — водород С -С -алкил с не2 4 разветвленной цепью, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем,что соединение общей формулы где R и R" имеют указанные значения, подвергают конденсации с хлор::ангидридом или ангидридом карбоновой кислоты формулы

RC00Ht (ft) где Й имеет указанные значения, при температуре .от -10 до +90оC .в органическом растворителе в присутствии гидроокиси, карбоната или ацетата щелочного металла или органического основания.

2. Способ по и. 1, отличаюшийся тем, что конденсацию осуществляют при 0-70ОC.

3. Способ по и. 1, отличаюшийся тем, что конденсацию осуществляют при мольном соотношении соединения формулы Й и соединения формулы Е равном 1:1,8-6,2;

4. Способ по и. 1, о т л и ч, а юшийся тем, что в качестве органического растворителя используют тетрагидрофуран, диоксан, диметилформамид или пиридин.

1015821

Изобретение относится к способу получения новых моноамидных производных терефталевой кислоты общей формулы но о- О-f. oo-ff Т

Т!

10 где R — низший С„-С -алкил с нормаль йой или раз ветвлен-, f ной цепь.q, R — водород или низший

С -С -алкил с нормаль-35

1 4 ной или разветвленной цепью, fI водород, С -C+-алкил с нераэветвлейной цепью, или их фармацевтически приемлемых солей.

Указанные соединения могут быть использованы в качестве фармацевтических средств для профилактики и/или лечения аллергической брон- . хиальной астмы, аллергических дерма титов и других аллергических заболеваний.

Известны N-эамещенные амиды

2-4-Ъис †(бензамидо )-бенэойной кислоты общей формулы

Х

ffZf! O -ф

Х 35

ЖНбО

АТОМНА — Л где А = -(CH)> -(СН )з —, 4" н Rã С„-Сг алкйл

Х и У метил или метоксигруппа.

Укаэанные соединения обладают биологической активностью (1 ).

В ходе изучения ряда бисамидов, 45 являющихся производными 2,4-диаминобензойной кислоты, создан ряд новых противоаллергических веществ, полезных в качестве лекарственных средств для профилактики и лечения 50f аллергических заболеваний 2/.

Цель изобретения — синтез сое-. динений общей формулы Т.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу, который основан на известной реакции взаимодействия аминов с ангидридами или хлорангидридами кислот, соединение дбщей формулы

60f н4 О О ООЗ о

000Е

65 где R u R имеют указанные эначеt и ния, подвергают конденсации с хлорангидридом или ангидридом карбоновой ки сл оты формулы

КРООH (Х ) где R имеет указанные значения,:при температуре от -10 до.+90 С в органическом растворителе в присутствии гидроокиси, карбоната или ацетата щелочного металла или органического основания.

Обычно конденсацию осуществляют при 0-70 С и яольном соотношении соединения формулы II и соединения формулы 1ц равном 1;1,8-6,2.

B качестве растворителя используют тетрагидрофуран, диоксан, диметилформамйд или пиридин.

Исходное соединение общей формулы Й легко получается конденсацией

4-нитроанилиновой кислоты или ее сложного эфира с производным терефталевой кислоты с последующиМ (в некоторых случаях ) гидролизом продук;та конденсации и дальнейшим восста1новлением нитрогруппы обычным методом.

Пример 1. Раствор 1 5 r

2- (4-карбоксибенэамидо)-4-аминобензойной кислоты в 50 мл пиридина смешивают с 3,2 г хлорангидрида изомасляной кислоты (иэобутироилхлорида ), мольное соотношение 1:6,2.

Смесь нагревают при 50 — 60 С в течение 2 ч. Далее реакционную смесь смешивают с раствором 7 г гидроокиси натрия в 20 мл воды и полученную смесь концентрируют в вакууме. Оста" ток после упаривания разбавляют водой и разбавленный раствор подкисляют соляной кислотой до рН 1-2. Об". разовавшийся при этом кристаллический осадок отфильтровывают, промывают на фильтре водой и перекристаллизовывают из смеси. метанола и воды. В итоге получают 1,1 г 2-(4-карбоксибензамидо)-4-иэобутирамидофенэойной кислоты, имеющей т.пл.312314 С.

Пример 2. Аналогично примеру 1 подвергают взаимодействию 2†(4-карбоксибенэамидо)-4-аминобензойную кислоту с уксусным ангидридом при мольном соотношении 1:2,9; После обработки реакционного продукта по методике, описанной в примере 1, получают с выходом 63% 2-(4-карбоксибензамидо}-4-ацетамидобенэойную кислоту, имеющую т. пл. 302 - 304 С (с разложением ).

Пример 3. Аналогично примеру 1 подвергают взаимодействию 2— (4- к ар бок си бен з амидо )-4-ами но бе нэойную кислоту с н -бутироилхлоридом (мольное соотношение 1:3,3). После обработки реакционного продукта в соответствии с методикой, описанной в примере 1, получают с выходом.70%

1015821

2- (4-карбоксибензамидо )-4- (Н -бутирамидо)-бензойную кислоту; имеющую т. пл. 297-299 С (c разложением).

Пример 4. Аналогично примеру 1 подвергают взаимодействию 2-.

-(4-карбоксибензамидо )-4-аминобензойную кислоту с пропионилхлоридом (мольное .соотношение 1з5,1). После обработки реакционного продукта в соответствии с методикой, описанной в примере 1, за исключением того, что в качестве растворителя для перекристаллизации продукта используют изопропиловый спирт,. получают с выходом 62% 2-(4-карбоксибензамидо))-4 пролионамидобензойную кислоту, имеющую т. пл. 284-286 С (с разложением).

Пример 5. Аналогично примеру 1 подвергают взаимодействию 2-(4-карбоксибензамидо )-4-аминобенэойную кислоту с изокапроилхлоридом (хлорангидридом изокапроновой кислоты ) при мольном соотношении 1г2,3 °

После обработки реакционного продукта по методике, описаннной в примере 1, получают с выходом 65% 2-(4-карбоксибензамидо )-4-изокапронами,добензойную кислоту, имеющую т.пл. 297-ЗОООС (с разложением ).

П р и и е р б. К раствору 3 г ( этилового эфира 2- (4-этоксикарбонилбеизамидо)-4-аминобензойной кислоты в 30 мп пиридина прибавляют 5 r пропионового ангидрида (мольное соотношение 1:4,5 ).и, полученную смесь нагревают при 50-60 С в течение 2 ч.

После охлаждения к реакционной смеси постепенно прибавляют 200 мл воды, выпавшее в осадок кристаллическое -вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси этанола и воды. В итоге получают 2,2 г эзил-2- (4-этоксикарбонилбенз амидо )-4-пропионаиидобензоата, имеющего т. пл. 172-173 С..

Пример 7. К раствору 1,6 r

2-(4-метоксикарбонилбензамидо)-4-аминобенэойной кислоты в 30 мл.пиридина прибавляют при перемешиваний

2 r ангидрида изомасляной кислоты (мольное соотношение 1: 2,7 ) и полу-. ченную смесь нагревают при 40-50ОС н течение 2 ч. После этого к реакционной смеси постепенно прибавляют при перемешивании 10 мп воды, затем туда же добавляют 10 мп триэтиламина и полученную смесь нагревают при 7080 С. После прибавления 20.мп воды реакционную смесь выдерживают при комнатной. температуре в течение

10 мин и затем оставляют охлаждаться, Далее реакционную смесь подкисляют соляной кислотой (разбавленным водным растгором соляной кислоты ) с целью доведения рН до 2 и З,.выпавшее при этом в осадок кристаллическое вещество отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси метаиола и воды. В итоге получают 1,2 г

2-(4-метоксикарбонилбенэамидо)-4-иэо бутиламинобензойной кислоты, имеющей т. пл. 244-247 С (c разложением), Пример 8. Аналогично примеру 7 проводят реакцию между 2-(4-этоксикарбонилбензамидо )-4-аминобензойной кислотой и ангидридом иэо" масляной кислоты (мольное соотношение 1г5,6 ) н реакционный продукт обрабатывают, как в примере 7, sa исключением того, что в качестве растворителя для перекристаллиэации используют смесЬ зтанола и воды.

Полученный с выходом 62% йродукт представляет собой 2-(4-этоксикарбонилбензамидо )-4- (изобутирамядо )беизойную кислоту, имеющую т. пл. 230235 С (с разложением).

Пример 9. Аналогично примеру 7 проводят реакцию 2-(4-этокси20 карбонилбензамидо)-4-аминобеизойной кислоты с пропионовым ангидридом .(мольное соотношение 1:1,9) и реакционный продукт обрабатывают, как в примере 7, за исключением того, 25 что в качестве растворителя для перекристаллизации используют ацетонитрил. В итоге с выходом 60% получают целевой продукт - 2-(4-этоксикарбонилбензамидо )-4-пропионамидобензойную кислоту, имеющую т. пл. 240243 С

Пример 10.. Аналогично примеру 7 проводят реакцию между 2-(4-пропоксикарбонилбензамидо )-4-аминобензойной кислотой и пропионовым ангидридом (мольное аоотношение 1:2 .7) и реак-. ционный продукт обрабатывают, как в примере 7, за исключением того, что в качестве растворителя для перекристаллизации используют этилацетат. B итоге в выходом 64% получают

2- (4-пропоксикарбонилбензамидо )-4-пропионамидобензойную кислоту, имеющую т. пл. 199-200ОC.

Пример 11.. Аналогично приме45 ру 7 проводят реакцию между 2-(4-бу" токсикарбонилбензамидо)-4-аминобен-зойной кислотой и пропионовым ангидридом (мольное соотношение 1:2,4.} и реакционный продукт обрабатывают, как в примере 7, за исключением того, что в качестве растворителя для пере кристаллизации используют смесь воды и диоксана. В итоге с .выходом 60% получают 2- (4-бутоксикарбонилбенэами- до )-4-пропионамидобензойную кислоту, имеющую т. пл. 134-187 С, Пример 12. Раствор 3 г этил-2-(4-карбоксибензамидо)- 4-амикобензоата в 30 мл пириднна смешивают с 3 г хлорангидрида пропионовой кис60 лоты (мольное соотношение 1: 3,2) и . полученную. смесь выдерживают при

40-50ОC в течение 3 ч. После этого к смеси постепенно добавляют 20 мл воды, причем эту операцию осуществ"

65 .ляют, поддерживая температуру на

1015821 указанном уровне в течение примерно

1 ч. После дополнительного прибавления 100 мл воды смесь подкисляют соляной кислотой с целью доведения рН реакционной смеси до 1-2, образовавшийся при этом кристаллический 5 осадок отфильтровывают, промывают водой и перекристаллизовывают из смеси этанола и воды. В итоге получают 2,2 r этил-2- (4-карбоксибензамидо }-4-пропионамидобензоата, имеющего т. пл. 246-248 С.

Пример 13. Аналогично примеру 12 проводят реакцию между пропил— 2 — (4- к ар бок си бе н з ами до ) — 4- ами но бе нзоатом и пропибновым ангидридом 15 (мольное соотношение 1: 2,3). Реакционный продукт обрабатывают, как в примере 12, за исключением того, «то в качестве растворителя для перекристаллизации используют смесь диоксана и воды. B итоге с выходом

67% получают пропил-2-(4-карбокоибензамидо)-4-пропионамидобензоат, имеющий т. пл. 233-235" С.

Пример 14. Аналогично примеру 12 проводят реакцию между бутил— 2-(4 — карбоксибензамидо) — 4-аминобензоатом и пропионовым ангидридом (моль ное соотношение 1:5,2 ). Реакционный продукт обрабатывают, как в примере 12. В итоге с выходом 65% получают30 бутил-2-(4 — карбоксибензамидо) — 4-пропионамидобензоат, имею«««ий т.пл. 243245 С.

Пример 15. Аналогично примеру 7 проводят реакцию между 2-(4-изопропилоксикарбонилбензамидо)— — 4-аминобензойной кислотой и пропионовым ангидридом (мольное соотношение

1:3,2 ). В результате обработки реакционного продукта в соответствии с методикой, описанной в примере 7, получают 2-(4-изопропилоксикарбонилбензамидо )-4-пропионамидобензойную кислоту с выходом 65Ъ, имеющую т.пл.

219-221 С.

Пример 16. В 2,8 мл триэтил" амина растворяют смесь 1,5 г пропионовой кислоты и 40 мл тетрагидрофурана, и к раствору добавляют при температуре -10 С 2,6 мл этилхлоркарбо- 50 ната. После 30 †минутно перемешивания по каплям добавляют при температуре от — 10 до -5 С 7,1 г этилового эфира 2 †(4-зтоксикарбонилбензамидо ) — 4-аминобензойкой кислоты.

После перемешивания при температуре от -10 до — 5 С реакционную смесь концентрируют в вакууме, затем добавляют воду и остаток доводят до рН 1-2 с помощью соляной кислоты. Выделившиеся в осадок кристаллы 60 от «ильтровывают и промывают водой.

После перекристаллизации из смешанно. го растворителя этиловый спирт — вода получают 4,7 r этилового эфира

2-(4-этоксикарбонилбензамидо)-4-пропионамидобензойной кислоты. T. пл.

172-173 С.

Пример 17. В 50. и«« диоксана растворяют смесь 1 5 r 2-(4-карбоксибензамидо)-4-амийобензойной кислоты и 1,0 г карбоната натрия и к раствору добавляют 2,9 г пропионилхларида. После проведения реакции в течение 1 ч при 80-90« С реакционную смесь обрабатывают в соответствии с методикой, описанной в примере 1. В результате получают

2- (4-карбоксибензамидо )-4-пропионамидобензойную кислоту. T. пл. продукта 284-286 С (с разложением). Выход 52%.

Пример 18. В 50 мл диметилформамида растворяют смесь 1,5 г

2-(4-карбоксибензамидо)-4-аминобензойной кислоты и 1,0 г ацетата нат-. рия и к раствору добавляют 2,9 г про-. пионилхлорида. После проведения реакции при 40-60 С в течение 2 ч реакционную смесь обрабатывают в Соответствии с методикой примера 1.

В результате получают 2-(4-карбоксибензамидо )-4-пропионамидобензойной кислоты с т. пл. 284-285 С (с разложением ). Выход продукта 48В.

Пример 19. Получение соли.

В 25 л воды и 7 л ацетона суспензируют навеску 7,1 кг этилового эфира 2-(4-карбоксибензамидо )-4-пропионамидобензойной кислоть« и к суспензия постепенно добавляют при 30-40ОС 970 r карбоната натрия.

После растворения карбоната натрия к раствору добавляют смесь 20 л ацетона и 700 г обесцвечивающего угля и перемешивают при 40-50 С в течение 1 ч, После отфильтровыва-. ния угля к раствору добавляют ацетон и всю массу оставляют на ночь при комнатной температуре. После отфильтровывания выпавших в осадок кристаллов и их промывки в ацетоне получают 6,3 кг натриевой соли этиIëîâoãо эфира 2-(4-карбоксибензамидо)-, -4-пропионамидобензойной кислоты.

Т. пл. 218-240 С (с разложением).

Соединения общей формулы 1, в которых аминогруппа во 2 положении

2,4-диаминобензойной кислоты ацили рована терефталевой кислотой или ее моноалкиловым эфиром, а аминогруппа в 4 положении превращена в амид низшей алифатической кислоты, обладают значительно более высокой противоаллергической активностью, чем известные производные 2,4-диаминобензойной кислоты, и способны ингибировать различные аллергические реакции, включая различные виды и разновидности животных и типы антител.

Установлено также, что аналогичные производные, в которых .аминогруппа во 2 положении 2,4-диаминобензойной кислоты, обладают лишь слабой противоаллергической активностью.

1015821

Соединения общей формулы(1 ) яв- ляются эффективными противоаллергическими агентами по той причине, что, будучи введенй животным перорально или внутривенно, оии требуют лишь. очень малой дозы для ингибирования 5 пассивной кожной анафилаксии (повышенной кожной чувствительности которая используется в качестве традицион-. ного или общепринятого индикатора при оценке противоаллергического эффекта мого или иного исследуемого вещества.

Соединения формулы 1 можно вводить пацкентам в виде лЮбих фармацевтических форм, таких как таблетки, порошки, капсули или.жидкие рецептуры, .которые готовят нутем использования обычных методов для введения соединения 1 в композиции, включающие в своем составе воспринимающее или растворяющее средство (эксципиент ), 20 связующее, растворитель или другие разбавители, обычно применяемые для фармацевтических целей, такие .как лактоза, крахмал, кристаллическая. цел-, люлоза, тальк, карбонат кальция, . 25 стеарат магння, маннит: сорбит бенэиловый спирт и вода.

Дозировка и способ введения предлагаемого соединения 1 зависят от состояния пациента, тяжести заболе- 30 вания и других факторов, причем, ка» правило, дозировка варьируется в диапазоне 10-2000 мг/день, предпочтительно 100-1000 мг/день.

Для церорального введения в- виде таблеток от.50 до 2000 мл соеди- . нения 1, смешанного с подходящим .фармацевтическим разбавителем, прессуют в таблетки, причем пациенту, нуждающемуся в лечении, вводят одну или две таких таблетки от одного до 4 нескольких pas в день. Другие подходящие фармацевтические формы, содержащие в качестве активного ингредиента .соединение формулы 1,также могут. быть получены путем использо- 45 вания обычных методов формулирования лекарственных.препаратов и-введены пациентам в соответствующей курсу их лечения дозировке. следует иметь в виду, что средст- 5{)

;во для ингаляции, позволяющее осу,.ществлять местное(топическое ) введение препарата, имеет то нреимущество перед другимй формаыю и способа-". вк:введения, что в этом случае для 55 проявления противоаллергического эффекта достаточна. дозировка

1-200:мг/день.

Методдика проведения медико-биологических экспериментов.

Крысиные антитела к яичному 60 альбумину готовят путем гомологичной сенсибилизации. 1 .мг яичного альбумина"и 10 клеток Haemophilus рег.Физз1з вводят крысам путем внутримашечных и внутрибрюшинных инъекций. 65 (соответственно )и спустя 14 дн после инъекции, у подопытных животных извлекают сыворЬтку. Одну деся- . тую часть миллилитра этой сыворотки разбавленной в 16 раз иньектировали, в дорсальный (спинной ) участок кожного покрова крыс.

Серез 48 ч после этого каждой крысе. вводят внутривенно 0,5 мл/100 г смеси, содержащей равные объемы

1%-ного раствора красителя ".Evans

В lue" в физиологическом солевом растворе и 1%ного раствора яичного альбумина в физиологическом солевом растворе. Спустя 30 мин каждую крысу обезглавливают и флеботомируют (т.е. вскрывают вены и выпускают кровь ),после чего обдирают шкуру и. проводят количественное измерение красителя, который просочился иэ того-места, где ранее была,проведена инъекция сыворотки. Затем, используя ножницы, аккуратно вырезают участки, окрашенные в голубой цвет, нарезают их на кусочки, которые погружают на ночь в 5 мл смеси, содержащей 3 ч. 0,.5%-ного водного раегвора сульфата натрия и 7 ч ацетона.

На следующий день смесь центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мий. и надосадочную жидкость (супернатант) подвергают спектрофотометрическому измерению с целью определения поглощения при длине водны 610 ммкм.

Соединение Т растворяют в физиологическом.солевом растворе в присутствии карбоната калия с тем, чтобы по- лучить раствор с рН 7,5-8,5.Затем: этот раствор либо вводят крысам внутривенно (укол производится в крысиный хвост) непосредственно перед инъекций красителя "E vau s В Хце " k яичного альбумина, либе вводят перорально в виде суспензни в водном растворе гуммиарабика (аравийской камеди ) за

30 мин до инъекции раствора красителя "Evans Blue". и яичного.альбумина. Степень ингибирования кожной аиафилаксии, выраженную в процентах, вычисляют путем сравнения поглоще-. ния красителя "Evans В lue", содержащегося в вытяжке, полученной от тех групп крыс, которым вводят исследуемое соединение формулы I, с поглощением красителя, содержащегося в вытяжках из контрольных груни крыс.

В каждой группе животных пяти крыс, для которых вычисляют среднюю степень ингибирования:.

Полученные результаты представлены в табл. 1 и 2 (оценка, выраженная символом ++++, обозначает эффективность ингибирования 90% или выше, +++ — степень ингибирования

70-90%, ++ — эффективность ингибирования в диапазоне 50-70%, + соответствует степени ингибирования

30-50% и + обозначает степень ингибирования 0-30%

1015821

Продолжение табл. 2

Таблица 1

9 ."00 ++++

10 200 ++++

Доза, мг/кг

Эффективность ингибирования

Соединение по примерам

0,1

0,5

8 о

Таблица2 эия

100

25

100

100

300

4++

100

+++ : 121 С в течение 20 мин.

Составитель М.Бибикова

Редактор В. Петраш Техред С.Мигунова Корректор A.Èëüèí

Заказ 3237/52 Тираж 418 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Эффективность ингибирования при внутривенном введении

Эффективность ингибирования при пероральном введении со

55!

Пример 20. А. Приготовление

100-миллиграммовых таблеток.

100 r тонкодисперсного порошкообраэнога этил-2-(4-карбоксибенэамидо -4-пропионамидобензоата тщательно перемешивают со смесью 47 г лактоэы, 100 г кристаллической целлюлозы и 3 г стеарата магния и полученную гомогенную смесь используют для прессования таблеток диаметром 9 мм, каждая из которых весит 300 мг.

В. Приготовление средства для ингаляции.

10 г тонкодисперсной порошкообразной калиевой соли этил-2-(4-карбоксибензамидо)-4-пропионамидобензоата растворяют в дистиллированной воде.

Для регулирования рН раствора и дове дения его до 8,5 используют буферную соль. Объем .забуференного раствора г доводят дистиллированной вбдой до

1 л.

После фильтрования через мембранный фильтр с порами диаметром

0,45 мкм раствор разливают в 1-мил-. лилитровые ампулы иэ коричневого стекла (нез.аполненное раствором пространство в ампулах тщательно продувают газообразным азотом ), которые стерилизуют при 121 С в течение

20 мин.

С. Приготовление раствора для инъекций.

20 г натриевой соли этил-2-(4-карбоксибензамидо)-4-пропионамидббензоата растворяют в дистиллированной воде для .инъекций. Для доведения рН раствора до. 8,0 и создания осмотического давления 280 мосм/кг в раствор вводят соответствующие количест.— ва уксусной кислоты и хлористого

Йатрия, после чего раствор доводят дистиллированной водой до объема 1 л.

После фильтрования через мембранный фильтр, имеющий поры диаметром

0,45 мкм, раствор разливают, в

2-миллилитровые ампулы иэ коричневого стекла (незаполненное раствором пространство в ампулах тщательно продувают газообразным азотом,j, которые подвергают стерилизации при о