Способ определения производных бис-( @ -хлорэтиламина)

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ БИС- (/i-ХЛОРЭТИЛ ;-АМИНА путем тонкослойной хроматографии в смеси растворителей с последующей обработкой полученной хроматограммы химическим реагентом, отличают ийс я тем, что, с целью повышения селективности и чувствительности способа, в качестве смеси растворителей используют смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты и воды в соотношении ( 1:

(19) O!) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

3ЦР G 01-N 31 08

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н лвтореноМ СВИдатЯПЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3319830/04 (22) 16. 07.81 (46) 07.07.83. Бюл. Р 25 (72)В. Г. Беликов, Н. Е. Козлов и В. Г. Сбежнева (71)Пятигорский фармацевтический институт (53) 543.54.42 (088.8) (56)1.Авторское свидетельство СССР по. заявке 9 3216519/04, 15.12. 0.

2. Колочевская М. Н. и др. Применение тонкослойной хроматографии для анализа некоторых производных хлорэтиламина. Материалы конференции молодых ученых. 1ММ,И, М, 1972, с. 93.-94. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ БИС- (p -ХЛОРЭТИЛ )-AMHHA путем тонкослойной хроматографии в смеси растворителей с последующей обработкой полученной хроматограммы химичес- ким реагентом, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения селективности и чувствительности способа, в качестве смеси растворителей используют смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты и воды в соотношении (1-3): 1:(4-6 ), в качестве химического реагента используют 2-метил-З-окси-4,5-ди-(оксиметил )-пиридин и обработку ведут при 99-100 С и рН 11-12..

1027608

Изобретение относится к аналити" ческой химии, а именно к способам анализа производных бис-(p -хлорэтил )амина, и может быть использовано в занодских, контрольно-аналитических лабораториях и н аптеках 5

Известен способ определения производных бис-(ф- хлорэтил )-амина путем обработки анализируемой пробы раствором 1-изониконил-изопропилгидразина при рН 10-11 и 90-100 Ñ (1 . 10

Недостаток способа состоит в его относительно невысокой точности.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату янляется способ определения производных бис(р-хлорэтил)-амина путем тонкослойной хроматографии анализируемой пробы в смеси растворителей, содержащей хлороформ, метанол с последующим проявлением хроматограм- 20 мы реактивом Драгендорфа (2).

Недостатком способа является его нелесективность, сняэанная с тем, что продукты его гидролиза дают аналогичную реакцию, и невысокая чувствительность (0,20-0,28 мг/мл ).

Пель изобретения — повышение селектинности и чувствительности способа.

Поставленная цель достигается согласно способу определения производных бис-(р-хлорэтил )-амина путем тонкослойной хроматографии анализируемой пробы в смеси растворителей н-бутиловый спирт, уксусная кислота и вода в соотношении 1-3:1:4-6, с по- 5 следующей обработкой хроматограммы

2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил )-пиридином при 99-100 С и рН 11-12, в качестве смеси растворителей используют смесь н-бутилового спирта, 40 уксусной кислоты и воды в соотношении (1-3):1:(4-6 ), в качестве реагента используют 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил )-пиридин и .обработку ведут при 99-100 С и рН 11-12.

Пример 1. Определение сарколиэина.

Реактивы и растворители: 5Ъ раствор 2-метил-3-окси-4,5 ди-(.оксиметил)-пиридина гидрохлорида, 20Ъ-ный рас- 50 твор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5, ацетон, 1Ъ-ные растворы сарколизина, хлорбутина„ допана, асалия, циклофосфана н ацетоне.

На линию старта хроматографической бумаги, диаметром 8 см на расстоянии

23 см один от другого наносят 0,5 мл

1Ъ-ного раствора исследуемых препаратов. Высушивают и н подвижную фазу 60 погружают нижний конец жгутика, про. ходящего через центр круговой хроматограммы.

Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают. Высушеннь.е хроматограммы просматривают в УФ-свете и отмечают положение пятен, затем проявляют путем последовательного погружения н 5Ъ-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди=(оксиметил )-пиридина гидрохлорида и 20Ъ-ный раствор едкого натра на

20-30 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шкафу при 100 С и отмечают положение пятна.

На хроматограмме имеется одно пятно, наличие которого подтверждается двумя способами. Элюат имеет полосу поглощения сЛ у360 нм, что соответствует глюконовому альдегиду. Измеряют на спектрометре CC-4й оптическую плотность при3 =360 нм.

Г р и м е р 2. Определение хлорбутина.

Реактивы и растворители: 5Ъ-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида, 20Ъ-ный раствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды н соотношении 2:1:5, ацетон, 1о-ные растворы сарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне.

На.линию старта хроматографической бумаги диаметром 8 см на расстоянии 23 см один от другого наносят

0,5 мл 1Ъ-ного раствора исследуемых препаратов. Высушивают и в подвижную фазу погружают нижний конец жгутика, проходящего через центр круговой хроматограммы.

Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают. Высушенные хроматограммы просматривают в

УФ-свете и отмечают положение пятен, а затем проявляют путем последовательного погружения в 5Ъ-ный раствор

2-метил-3-окси-4, 5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида и 20Ъ-ный раствор едкого натра на 20-30 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шка- фу при 100 С и отмечают положение пятна.

На хроматограмме имеется пятно, наличие которого подтверждается двумя способами. Элюат имеет полосу поглощения сЛ „=360 нм, что соответствует глютаконовому альдегиду. Измеряют на спектрофотометре СФ-4А оптическую плотность при Л,„ „=360 .нм.

Пример 3. Определение допана.

Реактивы и растворители: 5Ъ-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил )-циридина гидрохлорида, 20Ъ-ный раствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5, ацетон, 1Ъ-ные растворы сарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне.

На линию старта хроматографической бумаги диаметром 8 см на расстоя1027608 нии 23 см один от другого наносят

0,5 мл 1%-ного раствора исследуемых препаратов. Высушивают и в подвижную: фазу погружают нижний конец жгутика, проходящего через центр круговой хроматограммы.

Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают.

Высушенные хроматограммы просматри.вают в УФ-свете и отмечают положение пятен, а затем проявляют путем последовательного погружения в 5%-ный раствор 2-метил-3-окси-4.,5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида и

20%-ный раствор едкого натра на 20- 35

30 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шкафу при 100 С и отме.чают положение пятна.

На хроматограмме имеется одно пятно, наличие которого подтверждается 0 двумя способами. Элюат имеет полосу поглощения с М „=360 нм, что соответствует глютаконовому альдегиду.

Измеряют на спектрофотометре СФ-4А оптическую плотность приЛ =360 нм. пах

Пример 4. Определение асалея.

Реактивы и растворители: 5Ъ-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксимети;.)-пиридина гидрохлорида,20Ъ-ный раствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5, ацетон, 1%-ные растворы сарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне.

На линию старта хроматографической бумаги диаметром 8 см на расстоянии 23 см один от другого наносят 0,5 мл 1%-ного раствора исследуемых препаратов. Высушивают и.в подвижную фазу погружают нижний конец 40 жгутика, проходящего через центр круговой хроматограмьь .

Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положение растворителя и подсушивают. Высушен- 45

Иь1е хроматограммь| просматривают в УФсвете и отмечают положение пятен, а затем проявляют путем последовательного погружения в 5%-ный раствор

2-метил-З-окси-4,5-ди-(оксиметил )- 50

-пиридина гидрохлорида и 20%-ный раствор едкого натра на 20-30 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шкао фу при 100 С и отмечают положение пятна.

На хроматограмме имеется одно пятно, 55 наличие которого подтверждается двумя способами. Элюат имеет полосу поглощения с3 д„=360 нм, что соответствует глютаконовому альдегиду. Измеряют на спектрофотометре СФ-4А оптическую плотность приЛ =360 нм.

Пример P. Определение циклофосфана.

Реактивы и растворители: 59,-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида,20%-ный раствор едкого натра, смесь н-бутилового спирта, уксусной кислоты, воды в соотношении 2:1:5, ацетон,1Ъ-ные растворы сарколизина, хлорбутина, допана, асалея, циклофосфана в ацетоне.

На линию старта хроматографической бумаги диаметром 8 см на растоянии

2-3 см один от другого наносят 0,5 мл

1%-ного раствора исследуемых препаратов. Высушивают и в подвижную фазу погружают нижний конец жгутика, проходящего через центр круговой хроматограммы.

Через 10-15 мин хроматограмму вынимают из камеры, отмечают положение . растворителя и подсушивают. Высушенные хроматограммы просматривают в УФ-свете и отмечают положение пятен, а затем проявляют путем последовательного погружения в 5%-ный раствор 2-метил-3-окси-4,5-ди-(оксиметил )-пиридина гидрохлорида и

20%-ный раствор едкого натра на 2030 с. Хроматограммы высушивают в сушильном шкафу при 100 С и отмечают положение пятна.

На хроматограмме имеется одно пятно, наличие которого- подтверждается двумя способами. Элкат имеет полосу поглошения с Л =360 нм

rr aX

t что соответствует глютаконовому альдегиду. Измеряют на спектрофотометре

СФ-4А оптическую плотность при

Л„, ц„= 360 нм.

Результаты спектрофотометрического определения алкилирующих препаратов приведены в табл. 1.

Данные чувствительности реакций приведены в табл. 2.

Сравнительные данные количественного содержания противоопухолевых препаратов и продуктов из гидролиза при выборе оптимального соотношения растворителей приведены в табл. 3.

Использование предлагаемого способа анализа препаратов противоопухолевого назначения по сравнению с известным способом обладает большей селективностью и чувствительностью.

1027608

Таблица 1

Содержание, %

Сарколизин

98,73

Хлорбутин

Таблица 2

Препарат

Чувствительность, по способу, мг/мл известному предлагаемому

0,20

0,18

О,"1 7

0,28

0,26

Таблица 3

Препарат

Соотноше ние рас-. творителей

Т не выше 10 С о

Т = 20-25 С с истекшим сро" ком годности активно- продукго веще- та гидства ролиза активного продуквещества та гидролиза активно продукго ве- та гид-. щества ролиза

80,5

17,8

1!1:6

2,7

34,5

91,7

39,4 21,8

5,3

1:1:6

90,9

90,1

4 0, 2

18,5

3,8

1г1:б

91,4

92,7

15,1

42,4

92;1

1:1:6

93,2

5,2

11,4.Циклофосфан 1:1:6

45,3

91,4

6,2

90,5

Относительная ошибка

é7,8+8,2%

+9,5+10,6%

16,4+7,3%

Сарколизин

54,2

43,9

91,2 . 7,7

98 7

2:1:5

Хлорбутин 2:1:5 46, 1

53,7

8,2

90,0

97,9

40,2

59,3

11,0

88,8

99,1

2:1:5

Допан

Асалей

39,1

99,0

60,6

1212

86,2

2:1:5

Сарколизин

Хлорбутил

Допан

Асалей

Циклофосфан

Сарколизин

Хлорбутин

Допан

:Асалей

Допан

Асалей

Циклофосфан

97,97

99,13

99,02

98,15

Количественное содержание при

0,033

0,040

0,010

0,084

0,025

1027608, 7

Продолжение, табл. 3

Количественное содержание при

Препарат

20-25 С

T не выше 10 С с истекшим ñðîком годности активного вещества

53,5

2:1:5

Циклофосфан

98,1

91,2 7,5

43,2

Относительная ошибка

+2,7+3,23

«+ 2,8+3,4%

Сарколизин

3:1 :4

92,5

83,5

7,4

40,4

96,3

84,1

3:1:4

9,2

49,1

35,8

3:1:4

94,1

11,2

47,2

40,5

3:1:4

91,5

12,4

50,8

45,4

Циклофосфан 3:1:4

93,5

85,1

10,4

50,3

37,8

Относительная ошибка

+5 8+7,3

+7,5+8,4

+5,7+7,1

СОставитель С. Хованская

Техред М.Коштура Корректор, Л. Ноях

Редактор С. Юско

Заказ 4730/48 Тираж 873 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Хлорбутин

Допан

Асалей

Соотноше ! ние рас-, творите-, лей продуктов гид ролиза активно Продукго ве- тов гидщества ролиза

80,1

80,9 активного вещества

«+2,6+3,7

40,5 продуктов гидролиза