Способ приготовления гемолитической системы
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГЕМОЖТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ для определения активности комплементсвязывающихг антител путем обработки бараньих эритроцитов гемолитической .сывороткой отличающийся тем, что, с целью повышений точности определения -активности комплементовязывающих антител, взвесь обработанных эритроцитов центрифугируют, к образовавшемуся осадку добавляют F ав фрагменты гемолитической сыворотки до первоначального объема и полученную смесь инкубируют при 35-37 С в течение 20-30 мин.
COG3 СОВЕТСКИХ
СВИ Л
ФЕСПУБЛИН
3(51) A 61 К 35/16
РОС)ЯВСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
FI6 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
С6ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
И АЗ"ГОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3364155/28-13 (22) 17. 12. 81 (46) 15.07.83 ° Бюл. 9 26 (72) Б. В. Каральник и Т.В. Кирющенко (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инФекционных болезней (53) 615.373.3(088.8) (56) 1. Лабораторная иммунология. Медицина, 1967, с.156-182. (54) (57) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГЕМОЙИТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ для определения
„.SU„„02. А активности комплементсвязывающих; антител путем обработки бараньих зритроцитов гемолитической .сывороткой отличающийся тем, что, с целью повышения точности опре.деления активности комнлементсвязывающих антител, взвесь обработанных зритроцитов центрифугируют, к образовавшемуся осадку добавляют F ав фрагменты гемолитической сыворотки до первоначального объема и полученную смесь инкубируют при 35-37 С в о течение 20-30 мин.
1028333
Т а б л и ц а 1 ической
Титр РСК с антигеном клещевого энцефалита системы препарата F ав фрагментов
Температура, С
Длительность, мин
1:16-1:32
30
1:32-1:64
1:64
1:64
35
1:128
1:128
1:64
37
1:128
1: 128
1:64
40
1:32
30.
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунодиагностике.
Известен способ приготовления гемолитической системы для реакции связывания комплемента (РСК) путем обработки бараньих эритроцитов гемолитической сывороткой (1 ).
Однако известный способ не обеспечивает точное определение активности комплементсвязывающих анти- 10 тел.
Целью изобретения является повышение точности определения активности комплементсвязывающих антител.
Указанная цель достигается тем, что согласно способу приготовления гемолитической системы путем обработки бараньих эритроцитов гемолитической сывороткой взвесь обработанных эритроцитов центрифугируют, к образовавшемуся осадку добавляют F ав фрагменты гемолитической сыворотки до первоначального объема и полученную смесь инкубируют при 35-37 С ! в течение 20-30 мин.
Пример 1. 5 мл гемолитической системы, предварительно приготовУсловия разработки гемолит ленной по известному способу, центрифугируют в течение 10 мин при
1 тыс. об/мин. Затем отсасывают
4,75 мл надосадка. К осадку прибавляют 4,75 мл гемолитической сыворотки, обработанной пепсином в присутствии 0,03 N солянокислого цистеина для фрагментирования антиэритроцитарных антител. В качестве препаратов F ав фрагментов антиэритроцитарных антител можно применять F(aa)
I 1 и Р(ав) чистых антител или глобулиновых фракций, выделенных из гемолитической сыворотки, а также фрагментированную перевариванием гемолитическую сыворотку, потерявшую литическую активность в отношении эритроцитов в присутствии комплемента. Смесь выдерживают в течение 10, 20 и
30 мин при 30, 35, 37 и 40 С. С приготовленными пробами гемолитической системы исследуют сыворотку крови больного клещевым энцефалитом, в которой предварительно обнаружены антитела к бараньим эритроцитам в титре 1:64.
Результаты опыта приведены в табл.1.
1028333
1615/1
1616/1
1612/2
1621/1
1632/2
1:32
1:32
1:128
1:32
1:32
1:16
1:8
1:32
Отр.
1:16
Составитель Г.Крюкова
Техред Л. Пекарь Корректор A. Ильин
Редактор Л.Веселовская
Заказ 4839/5 Тираж 713 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 .
Филиал ППП Патент, r.Óæãoðoä, ул. Проектная, 4
Как видно из табл., максимальная чувствительность РСК достигнута в тех случаях, когда гемолитическую сыворотку обрабатывают препаратом
F ав фрагментов антиэритроцитарных антител в течение 20-30 мин при
35-37 С (при других условиях обрао ботки титр РСК более низок).
Пример 2. 10 мл гемолитической системы, предварительно приготовленной по известному способу, центрифугируют в течение 5 мин при
1,5 тыс. об/мин. После этого отсасьтвают 9,5 мл надосадка. К осадку прибавляют 9,5 мл гемолитической сыворотки, обработанной пепсином в присутствии 0,03 М солянокислого цистеина для фрагментирования антизритроцитарных антител. Смесь выдерживают в течение 30 мин при 37ОС.
С приготовленными по -описанному и известному способам гемолитическими системами исследуют пять сывороток крови больных людей.
Полученные результаты приведены в табл.2.
Т б и ц а 2
Таблица 25
Как видно из табл.2, использование гемолитической системы, приготовленной по предложенному способу, обеспечивает более полное выявление кЬмплементсвязывающих антител, чем при использовании гемолитической системы, приготовленной по известному способу. Так, по известному способу антитела были выявлены в 4 из
5 проб, а по предлагаемому — во всех
5 пробах; при этом во всех случаях титр антител, определяемый с гемолитической системой, приготовленной по предлагаемому способу, в 2-4 и более раз выше, чем с гемолитической системой, приготовленной по известному способу»
Специфичность предлагаемого епособа подтверждается тем, что при постановке РСК с девятью различными антигенами в сыворотках крови больных выявляли антитела только к антигену возбудителя, вызвавшего данное заболевание, но не к другим антигенам.
Использованный режим центрифугирования гемолитической системы {510 мин при 1-1,5 тыс.об/мин) определяется легкой повреждаемостью нативных "- vrpoqmoa при большой скорости центрифугирования и необходимой полнотой их осаждения, достигаемой центрифугированием в течение 5-10 мин.
Таким образом, способ позволяет повысить точность определения активности комттлементсвязывающих антител.
