Способ выявления микоплазм в культурах клеток

Авторы патента:

C12N5 - Недифференцированные клетки человека, животных или растений, например клеточные линии; ткани; культивирование или сохранение их; питательные среды для них (размножение растений из тканевых культур A01H 4/00)

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ МИКОПЛАЗМ В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК путем окраски фпюорохромами с последующим исследованием препаратов в люминесцентном микроскопе, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, клеточные культуры обрабатывают оливомицином в разведении 1,0 - 4,0 мг/л в течение 1-8 ч.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1044630

3(51 С 12М 5/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ. СВИДЕТЕЛЬСТВУ

СР

«Р

4ь

СЮ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬП ИЙ (21) 3281974/28-13 (22) 28.04>81 (46) 30,09,83., Бкя. l4 36 (72) Г.P.Ìèxaéëîâà, А.С.Новохатский и М.А.Родова (71) Институт вирусологии им. Д.И,Ивановского (53) 576.8.093.1 (088,8) (56) 1, Гуткина А,В., Неустроева В.В.

Обнаружение микоплазм в культурах клеток с помошью цитохимических мето-. дов;Журнал микробиологии, эпидемиоло- . гии и иммунобиологии, М» Медицина", 1971> NЗ, с,,19-23, (54) (57 ) СПОСОБ BbI ЯВЛЕНИЯ

МИКОПЛАЗМ В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК путем окраски флюорохромами с последуюшим исследованием препаратов в люминесцентном микроскопе, о т л н ч а юш и и с я тем, что, с целью повышения точности, клеточные культуры обрабатывают оливомицином в разведении

1,0 - 4,0 мг/л в течение 1-8 ч..ВНК - 21

РК- 13

1В -R5- 2

Чего

929

Не обнаружены

МДСК

Hefp

СПЭВ

Не обнаружены

Нер- 2

ХТК -0

Пример 2, Клеточные культуры, вырашиваемые в виде суспензии, исспе- 50 дуют на наличие микоппазм с помощью опивомицина. для этого на предметных стеклах делают мазки культур клеток, которые после высушиваиия на воздухе фиксируют в охлажденном 70 спирте 55 и окрашивают опивомицином, как описано выше. После ополаскивания в дистиллированной воае и высушивания препараты просматривают под микроскопом.

В культурах, контаминированных микоплазмами, выявпяются ярко светящиеся фокусы в цитоплазме клеток, содержащих fNK микоппаэм, По величине и расположению они идентичны микоплаз-мам, выявляемым другими методами. В культурах, свободных от микоплазм подобные фокусы не выявляются.

S 1044630 2

Изобретение относится к медицине, 4о С 70О этиловом спирте в течение а именно вирусологии, 1 ч. Готовят раствор антибиотика опиИэвестен способ выявления микоплазм вомицнна в концентрации 1,0-40 Омкг/л

:в культурах клеток путем окраски (орt 20 мкгlмл) на дистиллированной фпюорохромами с последующим исследо- 5 воде с добавлением 20 мМ ионов М + ванием препаратов в люминесцеитном (a виде солей М .504, или Мс ;СР ), микроскопе (1, рН раствора 2,0 - 8,0. Рабочйй растИэвестный способ является недос- .вор может длительное время хранитьта точи о точным. ся в холодильнике при Ь- 4оС. Этот

Цепь изобретения - повышение точ- 0 раствор наносят на препарат и помещают иост способа. . его в темную камеру. Окраска проиэвоПоставленная цель достигается тем, дится при Ф= 4 - 37 С в.интервале что согласно способу выявления мико- . 1-8 ч. Окрашенные стекла с культурой плазм в культурах клеток путем окрас- монтируют на предметные стекла в гли ки фпюорохромами с последующим 15 ItepHHe с дистиллированной водой (1:1), исследованием препаратов в люминес- обводят парафином и исследуют в люмиФ центном Микроскопе клеточные культуры несцентиом микроскопе с увеличением обрабатывают апивомицина4 в раэведе об. Х90 (иммерсия).. Лля анализа нии 1,0 - 4,0 мг/л в течение 1-8 ч. Используют фильтры ФС 1«4, ОС 18-2

Пример 1, Культуры переви- 20 и БС 8-2. При этом DHli микоплаэм ваемых клеток выращивают на покровных и ядер .светится ярким желто-зеленым стеклах в пенициллиновых флаконах и светом, цитоплазма не светится, фиксируют после образования моноспоя . Результаты исследования перевиваемых через 2-3 сут в охлажденном до 1 клеточных культур приведены в таблице. ф5 -.r з

И1спользованне изобретения позволит упростить технологию н повысить надежность выявления мнкоплаэм в пронэводс

1044630, 4 венных клеточных культура х, приме няемых в внрусологических исследованиях.,Составитель Е.Ярнык

Редактор В,Петраш Текред.Ж.Кастелевич Корректор С.Черни

Заказ 7462/21 Тираж 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35; Раушская иаб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, r, Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ выявления микоплазм в культурах клеток

Питательная среда для выращивания культуры ткани @ - продуцента гликозидов // 1039963

Способ культивирования каллусной ткани жень-шеняпродуцента биологически активных веществ // 1036053

Способ подготовки пробы культуры растительной ткани к цитометрическому анализу // 999595

Способ получения гибридов соматических клеток // 984215

Линия перевиваемых клеток селезенки взрослой зеленой мартышки 455,используемая для культивирования вирусов // 984214

Способ получения ауксотрофных мутантов холерных вибрионов // 982345

Полиакриламидный гель для медико-биологических целей и способ его получения // 977466

Способ стабилизации подвергаемых пересеву линий клеток, контаминированных микоплазмами // 952957

Установка для выращивания фолликулов // 950769

Способ выращивания биомассы женьшеня // 2101934

Штамм перевиваемых клеток человека сем-к, устойчивый к вич- инфекции // 2102477

Способ выращивания растений in vitro // 2102870

Изобретение относится к области сельского хозяйства и биотехнологии, в частности к способам микроклонального размножения растений и безвирусному семеноводству

Питательная среда для культивирования клеток эукариотов и способ получения основы питательной среды - протеолитического гидролизата // 2103360

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной биотехнологии и касается усовершенствованного способа получения протеолитического гидролизата отходов переработки рыбы, а также питательной среды на его основе, предназначенной для выращивания клеток эукариотов - продуцентов биологически активных веществ, используемых для производства диагностических и профилактических биологических и медицинских препаратов

Конъюгат на основе анти-jgm-антитела (варианты) и способ снижения секреции jgm антитела лимфоцитами (варианты) // 2105062

Изобретение относится к области иммунологии, в частности к получению и использованию моноклональных антител

Способ получения сухих стерильных питательных сред для культур клеток // 2107724

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения сухих стерильных питательных сред для культивирования разнообразных культур клеток, широко используемых в различных областях биологии, медицины, клеточной биотехнологии

Способ селекции популяции клеток in vivo // 2111249

Изобретение относится к области биотехнологии, а точнее к способам изменения степени стабильности кариотипа клеток

Способ селекции популяции клеток in vivo // 2111249

Способ получения ростовых протеинов из сывороток крови различных видов животных // 2112799

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при работе с клеточными культурами и в вирусологии