Способ определения микроциркуляции в печени
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКрециркуляции В ПЕЧЕНИ, включаю-, щий измерение гепатоцитов на гистологи ческомпрепарате с помощью окулярной сетки, микроскопа, отличающийся тем, что, с целью ювышения точности, центр окулярной сетки совмещают с центром печеночной дольки и и-змерение проводят в перифернчески .х и центральных отделах долек, при этомопределяют объемы цитоплазмы и ядер гепатоцитов, синусов и центральной вены и при уменьшении объема цитоплазмы и ядер гепатоц41тов и увеличении объема синусов и центральной вены по отношению к контролю определяют нарушение микроциркуляции . W 4 сд о О5
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
H ABTOPCH0MY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
1. 1
° °
° ° ° е
° °
° °
° °
° °
° O е Ф °
° °
° °
° е
° ° °
° ° °
° ° °
° °
° ° °
° ° °
° . °
° ° ° °
° ° ° °
Д д ° °
° °
° °
° °
° °
° ° ° °
Фяс1
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3259456/28-13 (22) 16.03.81 (46) 30.09.83. Бюл. № 36 (72) В. Г. Александров (71) Самаркандский ордена Дружбы народов медицинский институт им. акад.
И. П. Павлова (53) 615.475 (088.8) (56) 1. Вейбель Э. P. Морфометрия легких человека. М., «Медицина», 1970, с. 25 — 32.
2. Ташкэ П. К. Введение в количественную цитогистологическую морфологию. Издво Академии СРР, 1980, с. 76 — 80.
„„su„„ o4Ìùo а
3(Я) GО! N!28 А61 В1000 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ В ПЕЧЕНИ, включаю-. щий измерение гепатоцитов на гистологи ческом- препарате с помощью окулярпой сетки, микроскопа, отличающийся тем; что, с целью повышения точности, центр ок лярной сетки совмещают с центром печеночной дольки и намерение проводят в периферических и центральных отделах долек, при этом опрелеляют объемы цитоплазмы и ядер гепатоцитов, синусов и центральной вены и при уменьшении объема цитоплазмы и ядер гепатоц4 тов и увеличении объема синусов и центральной вены по отношению к контролю определяют нарушение микроциркуляции.
° °
Э
Ф
° °
° ° ° е
1() 45() 60 часовой стре.пки, я при распо.поженив капилляра сле«;< от артериолы -- наоборот.
При гистометрии в центральных отделах начинают с сектора Л и потом проводят
)О !
Ф
М
<1<офункциональиое состояние и анизотропию паренхимы органа при патологических процессах. Вычерчивание круговых диаграмм зон долек и пло<цадей для каждой гистроструктуры позволяет визуально определять и сравнивать выраженность патологического изменения в морфологически отличающихся, но функционально единых зонах печеночной дольки.
Пример. Гистостереометрия печени собак в норме. После прелидикации морфином, вводной наркотизации гексеналом и срединной лапаротомии проводят краевую клиновидную резекцию левой боковой доли печени у 7 собак. Фиксацию, обевоживание, заливку в парафин, приготовление гистологических срезов толщиной 10 мкм, депарафинирование срезов, окраску гемато ксилин-эозином и заключение срезов в полистирол проводят по известным методикам. Изготавливают позитив окулярной секторально-круговой сетки диаметрам
20 мм так, чтобы сетка находилась в центре круга, и помещают сетку в окуляр бинокуляриой насадки микроскопа на держатель, имеющий внутреннее отверстие больше, чем диаметр сетки. С помощью объект-микрометра определяют диаметр и радиус сетки по 11-й окружности при увеличении 80, 200, 400". После этого вычерчивают 7 таблиц для занесения .тистометрических данных каждого эксперимента. Для получения заготовок диаграмм на двух листах вычерчивают-сетку без точек, а из самой сетки вырезают шаблон по внешнему краю ll-й окружности, оставляя на шаблоне буквы, обоз начающие сектора.
Гистостереометрию в каждом из 7 случаев проводят следующим образом. Помещают на предметный столик микроскопа предметное стекло с гистологическим срезом и при малом (окуляр. 10", объектив 8"), а потом при большом (окуляр 10", объектив 40 ) у.величении микроскопа находят триады (печеночную артериолу, воротную венулу, желчный капилляр), расположенные на расстоянии 100 †3 мкм от капсулы печени, и проводят количественный подсчет синусоидов, цитоплазмы и ядер печеночных клеток в тех отделах периферии долек, где общее количество точек, совпавших со структурными элементами портального пространства не превышает 33, т. е. 10О/р от общего числа-точек сетки. При Этом сетку располагают так, что ее центр совпадает с центром триады и в секторе А сетки находится печеночная артериола.
Посекторальный подсчет и внесение в часть А таблицы количества точек, совпавших с портальным пространством, цитоплазмой и ядрами печеночных клеток и синусоидами, начи«акант с сектора А, и при расположении желчного капилляра справа от артериолы по:нечет гистоструктур в остаlbHblx секторах ведут по ходу вращения долек. удаленных от капсуль< печени на
100--300 мкм, центр сетки совмещают с центром центральной вень< и сектор А обязательно направляют в сторону ближаишей триады, а посекторальныи подсчет точек, совпавших с центральной веной, цитоплазмой, ядрами печеночных клеток и синусоидами, в секторах Б, В, Г, Д, Е, а количественные данные заносят в ча Tb Б таблиць<.. Суммарное количество точек, совпавших в каждом из 20 участков с триадами (Ст), центральными венами (Сц ), LlHTonëàçìîé геиатоцитов (Ся), ядрами гепатоцитов (C«) и синусоидами (Cp), заносят в часть (таблицы. Резхльтаты вариацнонно-статисти- ческой обработки количес"«a точек, совпавших со структурными элементами в секторах периферических отдепов долек в каждом из 7 экспериментов, заносят в верх«к к> половину части В таб.пицы. а результаты статообработки гистометрических данных в секторах центральных отделов долек вносят в нижнюю половину части В таблицы. В верхнюю половину части ll, таблицы вносят результаты вариационно-статистической обработки гнстометрических данных периферических отделов долек, а в нижнюю полови ну — це нтрал ьн ы i.
После вариационно-статистической обработки гистометрических даннь<х 7 экспериментов получают следующие результаты.
Из 331 (330 в секторах и 1 в центре) точки (100 /о) в периферическом отделе дольки с триадами совпадает 21 точка (6,3О/o), е цитоплазмой печеночных клеток — 199 точек (60,2О/o), с ядрами печеночных клеток — 47 точек (14,2"/о) и с синусоидами — 64 точки (19,3О/o), а ядерноплазменный коэффициент составляет 0,236.
Из 331 точки (100%) в центральном отделе дольки с центральной веной совпадает 8 точек (2,4%), с цитоплазмой печеночных клеток — 207 точек (62,5О/o), с ядрами печеночных клеток — 45 точек (13,6О/«), с синусоидами — 71.точка (2!,5О/О), а ядерноплазменный коэффициент составляет 0,217.
Из общего количества точек 662 в периферическом и центральном отделах дольки с цитоплазмой печеночных клеток совпадает 406 точек (61,3 /o), с ядрам и печеночных клеток — 92 точки (13,9 io), с синусоидами — 135 точек (20,4%), с портальным пространством и центральными венами — 29 точек (4,4О/o), а общий ядерноплазменный коэффициент составляет 0,227.
Путем деления ядерно-плазменно<.о коэффициента перифернческого отдела печеноч у, иой дольки (0,236) на ядерно-плазменный
) .коэффициент центрального отдела дольки (0,217) и умножения частотного на 100О/<< устанавливают, что интенсивность обх<еннь<х прс>ц< <<он н печеночных клетках ня псри< i)>ill t>o!}} }<>} н норме у собак }1;1 8,7()0/
В ы и 1<, ч е м в 11 < и <) н О ч и ы х к л <. т к d )<, > o! > }) }< > }, р а с положс нных вокруг це»тряльных BE .í. !1с>еле этого пропзводят подсчет »ропе»1 нс>го соот>}u}»< >}><» гистоструктур, ядерно-плазменного коэффициента и соотношение интенсивности обменных процессов в нече»очных клетках в каждом секторе кяк периферии, тяк и центра печеночной дольки. Г!ри этом получают следую}цие результаты.
Процентное соотношение портального пространства, цитоплазмы, ядер печеночных клеток и синусоидов в секторе Л периферического отдела дольки составляет соответственно перечисленным гистоструктурам >5
9.1 о/0%, 60,0%, 2 7%. 8 2о/ . в секторе
Б 5,5%, 61,8%; 14 5%; 18 2% в секторе
В 5 5% 58,2 / 14,5%; 21 8% в секторе
Г 5 5%; 60 0%; 14 5%; 20 0% в секторе
Д 55% 61 8%. 145% 182%
Ядерно-плазменный коэффициент составляет в секторе Л 0,2!2, в секторе Б 0,235, н секторе В 0,250, в секторе Г О,?42, н секторе Д 0,242, в секторе Е 0,255.
Процентное соотношение центральной вены, цитоплазмы и ядер печеночных клеток, синусоидов в секторе А центрального отдела дольки составляет соответственно перечисленным гистоструктурам 3,7%;
61,8%: 12,7%; 21,8%; в секторе Б 8%;
61,8%; 14 6%; 21,8%; в секторе В 1,8%;
65,5%, 2,7%, 20,0% в секторе Г 1 8%,63 7%
12,7%, 2 1,8%; в секторе Д 1,8%, 6.1,8%, ! 4,6%, 21,8%; в секторе Е 1 8%; 61 8%, l4 6% 21 8%.
Ядерно-плазменный коэффициент составляет в секторе А 0,206, в секторе Б 0,235, в секторе В 0,194, в секторе Г 0,2, н секторде Д 0,235 и в секторе Е 0,235.
Интенсивность обменных процессов в, печеночных клетках периферического отдела дольки больше в секторе А на 2,91%, н секторе Б на 0%, в секторе В на 24,74%, н секторе Г на 21,0%, в секторе Д на 2,98% и в секторе Е на 8,51%, чем в печеночных клетках центрального отдела дольки.
После этого приступают к определению объема гистоструктур в кубических микронах (мкм ). Для этого помещают объектмикрометр на предметный столик микроскопа и при увеличении окуляра 10 и объектива 40 определяют диаметр вставленной в окуляр сетки по 11-й окру.жности и раn«yc ee в мкм. Согласно полученным данным радиус сетки составляет 95 мкм. После этого определяют площадь, которую охватывает сетка при данном увеличении, что составляет 28353 мкм . Площaab одной точки определяют делением площади сетки на количество точек (331), что составляет
85,7 мкм, а объем 1-й точки получают умножением ее площади на толщину среза (10 мкм), что составляет 857 мкм .
Круговые диаграммы гистоетруктур вычерчивают следующим образом: иа 1-й лист с вычерченной окул»рной се) кой накладывают шаблон так, чтобы границы I l-й окружности и секторов
Для вычерчивания границы между площадью синусоидов и площадью цитоплазмы ножку циркуля с иглой ставят в точку
0 и отведенной на середину расстояния «e>}<ду 5-й и 6-й окружностями ножей с рейсфедором от радиуса ЛO до радиуса БО очерчивают пограничную дугу.
Для вычерчивания границы между площадью цитоплазмы и ядер циркульную ножку с иглой ставят в центр О, а ножку с рей< федором отводят на середину расстояния между !О-й и 11-й окружностями и от радиуса АО прочерчивают дугу длиной 6,5 а по направлению к радиусу БО, затем соединяют конец этой дуги с 11-й окружно тью лугой радиуса а/2.
1 Раиицы между площадями центральнои sp>
I (11:)(Н)О
7 .<
Mpæ.fó пл<пца 1) К> ц(нчра.чьной вены и (!(f1 V(()1I $()f3 ПИРКУ. 11>и v H) I<())f(f()) O II I. IOI< (1(l f)IIT в центр О, а ножку (р(йс(р(,!<)ром <)т(солят на расстояние а f«)1 радиуса IiO 1«»f;fправлению ра fflv«a ЛО проч(рчивают лугу длиной а/2. Потом, свели ножки циркуля на расстояние а/2 и полставип ножку циркуля с иглой на IIPpf)) þ (слева) точку 2-й окружности, ножкой с рейсфедером от кон. ца прочерченой правой межокружностной дуги ло радиуса АО,прочерчивают оставшуюся часть границы.
Для вычерчивания границы между площадьк синусоидов и площадью цитоплаэмы печеночных клеток накладывают шаб; лон, вырезанный из окулярной сетки, на
2-ю диаграмму, совместив границы секторов и I I-й окружности шаблона с аналогичными границами диаграммы, и через точки на шаблоне "прокалывают 2 точек, соответствую!ци)(синусоидам {ocTBBøófoñÿ точку 2-й окружности, все точки 3-й и 4-й окружностей и 4 точки 5-й окружности от радиуса AO к радиусу БО). После этого ножку циркуля с иглой ставят в центр диаграммы и отведенной на середину рассто)1ния между,5-й и 6-й окружностями циркульной ножкой с рейсфелером от. радиуса А0 по направлению к радиусу БО прочерчивают дугу. длиной 3,5 а. Далее сводят ножку с рейсфедором на середину расстояния между
4-й и 5-й окружностями и от радиуса БО влево, прочерчивают дугу длиной а/2 и, сведя ножки циркуля -на расстояние а/2, ставят ножку с иглой на 4 ю (слева) точку
5-й окружности и соединяют правую и левую дуги дугой радиусом а/2.
Для вычерчивания границы между площадями цитоплазмы и ядер печеночных клеток ножку циркуля с иглой.ставят в центр диаграммы и отведенной на середину расстояния между 10-й и 11-й окружностями ножкой циркуля с рейсфедором от радиуса
АО вправо прочерчивают дугу длиной 6,5 а, затем в 7-ю точку ll-й окружности от ралиуса АО по направлению к радиусу БО) ставят циркульную ножку с иглой и от правого конца дуги между 10-й и 11-й окружностями очерчивают дугу радиусом а/2 до
11-й окружности. По такому же принципу вычерчивают границы площадей гистроструктур в остальных секторах диаграммы с последующей условной штриховкой площади каждой гистроструктуры.
Буквенное обозначение секторов, расположение точек на !О окружностях и наличие специальных частей в таблице для количественных гистометрических данных позволяют проводить не только подсчет количества гистоструктур в секторах и на радиусах 1<», Q, R>,...,Ê(<), но и определять координаты любой точки при более детальном (гистотопографическом) исследовании гистоструктур. При необходимости гистоМопогра<риче<.кого и(счслования Таблицу
)lpIl»((1<нlОТ . 1,1и (()(1 аl).1(f(ия ГИ(ТОТО(10! pа»1мы I-l(1 Ilpðè 5 случае цифры I - 10 в графах частей А и Б таблицы с(н)тветствукп порядковому .(изнутри кпаружи) номеру окружносги, а порядковый нол(чет точек по окружностям в кажлом секгоре необходимо в<.сти слева напра во. ! С Пусть 4-я (от ралиуса БО по направлению к ралиусу В0 сектора Б) точка 7-й окружности совпалает с ялром печеночной, клетки на периферии лольки. Тогда ее координаты Б7 — 4Я {Б -- буква, обоэначаю-. ! щая сектор; 7 -- порядковый от центра сетки номер окружности; 4 -- порядковый от радиуса БО вправо номер точки; Я -- ядро печеночной клети) и в графе с Гэуковой Я сектора Б на 7-й строке части А таблицы ставят знак +. П ри провелении вариационно-статистической обработки гистометрических ланных печеночной лольки у собак в норме и перевода статистических данных иэ тестточек в кубические микроны получают сле25 дующие результаты (в тысячах мкм ). Обьем гриад составляет 1,0+-0,34 (р <0,05), цитоплаэмы печеночных клеток 172,86+0,77 (р<0,01), ядер печеночных клеток 38,74 «- 0,47 (р< 0,05) и синусоидов, 54,25+ 0,54 (p<0,01). В центральном отделе печеночной дольки объем центральной вены составляет 6,94+. 0,1! (p<0,05), цитоплазмы печеночных клеток 76,,46»+-0.58 (p<0,01), ядер печеночных клеток 38,91+-0,25 (р< 0,01 и синусоидов 60,5 0,39 (p<0,01). Общий объем лольковой ц)(топлазмы печеночных клеток при этом равен 407,57+-!,58 (p<0,О1) ядер, печеночных клеток 91,86«»+-0,98) (р< 0,05), синусоидов 193,86 +-0,5 (p<0,О1) и триад с центральными венами ((1 30,14«-0,48 (р<0,05). Посекторальные объемы триады, цитоплазмы, ядер печеночных клеток и синусоидо(3 в периферическом отделе дольки составляет в секторе А соответственно 4,2 +0 09 (p <0,О5), 27,34 «- 0,13 (pc0,01), 6,26 +. 0,13 М (р<0,05), 3,43+-0,09 (p(0,01) в секторе -Б 2,66. + О,! 1 (р<0,05), 29,65» 0,15 (р<О,OI), 591 0,09 (р<005), 8,83+ 0,07 (р<001); в секторе В 2,83«+-0,04 (p<0,05), 28,88. О,t3 (p<0,О2), 6,34 «-0,0? (p =0 01 ), 9,08 +0,11 (р 0,05); в секторе Г 2,66+-0,04 (p<0,05), 28,81 + 0,2 (p< 0,01), 6,86 «- 0,09 (р < 0,05), 8,83 0,07 (р 0,01}; в секторе Д 2,49»-0,04 (p<0 05), 29,22 «-0,11) (p(0,01, 6.77+.0,11 (рс 0,05), 9,34+ 0,07 (p<0,01); в секторе Е 2,74 «- 0,04 (р< 0,05), 28,02 +. 0,15 (р< 0,01 ), 6,94+-0,11 (pc0,05), 8,83»-0,11 (р<0,05) .. Посекторальные объемы центральной вены, цитонлаэмы, ядер печеночных клеток, син1(соилов в центральном отделе дольки 1045! 9 составляк)т соответстве)1но в секторе Л 1,4!).+:0,44 (р«0,05), 28,8+ 0,11 (!>«Г),Г) 1), 6 26(О 13 (p(0 05) 9 !3-, О 04 (р«0 01) секторе 13 1,2:+ 0,03 (р(0,05), 29 91:"О 11 (p(0,0!), 5,91+-0,09 (pc0,05), 1028+0,07 (p«0,0l j; в секторе В 1,11 0,03 (р«.О 05), 29,74 +.0,13 (p(0,01), 6,51+.0,09) (р<0,05), 9,77+0,11 (р«.0,05); в секторе Г 1,1! +0,03 (р<0,05), 29,74 0,11 (р(0,01), 6,0+. 0,07 (рс0,0!j, !).!)4:+О, l (!з 0,01); В секторе Д 0,86+: 0,03 (р с0,05), 29,14 >- 0,09 (p<0 09) и 6,94->-0,09 (р 0,05), 10,28+.0,09 (р«0,01); в секторе Е 1,37+ 0,04 (p«.0,05); 29,05 0,16 (p«, 0,01), 6,86+ 0,11 (р<0,05), 9 94 - 0,04 (рс 0,01 ) . Пре."лягаемый способ обеспечивает высокув то алость, последовательность подсчета„в(ззможность создания алгоритмоВ и )6(! программ для мятемяти>ге(кого a!<> с>1 !» >ВЯниЯ и анализа f!3т<>>>о,><1)<>,:!<>1 H I(< i ll >> и Р()-! jt (сов и позволяет (>!>рс.:ил я гь I .(гол ьк(: оогцие нарушения микр<>ци> ку»l!I,ии р. печеHH, HO И ФУНКПИОНЯЛ!)П!1,!Ф ИЗ ИЕНЕНИЯ ),Д()1Ьновой пяренхиу>е (ядсрпо-плязмс>1!l!лй козффициепт). lроведение не -:ольхо n<>H(его исследования я на руги ени и к ровообря и >:-i . Ия и фУНКЦИОНЯЛЬНОГО СОСТО>>ПНЯ i()11 КОВОЙ Пd-р(. H х и м ы, по и исследования п и<, T>1! > ких и центральных отд=,-.">H:(дает;; узможность опредез!ять,>орфо(!)ун.<пиона--.(п!ые нарушения в каждом из з.и". о.дело.:, 1с,аждый сектор как перифс рического, так и центРЯ1ЬНОГО ОтДЕЛЯ ПЕЧЕ 1:1 >НОЙ ДОЛЬКИ ЯВЛЯЕТся (1 j))êò>>p ной един и>,ей, ".я р а к терна > гоlцс Йся определенным:>о))фофун:спион>>льным состоянием в норме и пс разному реягиру>о. >цей ня нару(пения кровооорагцепия. Состasíòsës )G, »> Редактор А. Огар ехред H. Bepe<> )(оорек ор 81 пут-v>. Заказ 7539/42 краж 873 Пода)1< > и. ВНИИПИ Государственного кс><нтета ° СССР но делам изобретений н от><ритий! )3035, Москва., Ж вЂ” 35, Раушскан наб., д. 415 Филиал П ПП «Па гент»., T. Ужгород, ул. Проектная 4
