Способ выращивания микобактерий туберкулеза

 

СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА путем посева исследуемого материала на среду Левенштейна-Йенсена инкубации посевов, отличающий с я тем„ что, с целью повышения высеваемости микобактерий , на поверхность питательной среды перед посевом наносят раствор энтерохелина в 1%-ном , содержащем РеСВ -бН2О, в концентрации 20-30 мкг/мл среды.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

llO QEJlAM H3OSPETEHHA H OTHPbITHA (21) 3448706/28-13 (22) 09 ° 04.82 (46) 30.12.83. Бил. 9 48 (72) N.È. Назарук, О.И. Белякова, Г.М. Иавловский, А.Ф. Гавриленко и О,А. Хома (71) Институт биохимии им. A.Â.Ïàëëàдина и Львовский научно-исследовательский институт туберкулеза (53) 576.8.093.1(088.8) (56) 1. Лабинская A.C. Микробиология с техникой микробиологических исследований. M., "Медицина", 1978, с. 288 (прототип). (54 ) (57 ) СПОСОБ ВИРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА путем посева исследуемого материала на среду Левенштейна-Йенсена инкубации посевов, отличающийся тем„ что, с целью повышения высеваемости мико. бактерий, на поверхность питательной среды перед посевом наносят раствор энтерохелина в 1Ъ-ном На 1 РО4, содержащем ГеСР ° 6Н О, в концентрации

20-30 мкг/мл среды.

10б 3836

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается способа выращивания микобактерий туберкулеза.

Извес ен способ выращивания мико бактерий туберкулеза путем посева исследуемого материала на среду Левенштейна-йенсена и инкубации посевон (1) .

Однако данный способ нв обеспечивает высокой высеваемости мико- 10 бактерий.

Цель изобретения - повышение внсеваемости микобактерий.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выращи- )5 вания микобактерий туберкулеза путем посева исследуемого материала на среду Левенштейна-йенсена и инкубации посевов на поверхность питательной среды перед посевом наносят раствор энте1 охелина в 1%-ном Ма НРО4, содержащем FeCE> бН О, н концентрации 20-30 мкг/мп среды.

Пример 1 ° Рабочий раствор энтерохелина (2,3-диоксибензоилсерин) готовят следующим образом.

100 мг энтерохелина растворяют в 20 мл 1Ъ-ного Йа НР04, добавляют

43,7 мг еСВ б!1 0 и фильтруют через мембранный фильтр 9 8.

Суспензию музейного штамма микобактерий туберкулеза Н37 Я!, н концентрации 1 млн бактериальных тел н

1 мл физиологического раствора засевают по 0,1 мл на плотную среду

Лененштейна-.йенсена без энтерохелина.35 с добавлением к среде 25 мкг/мл энтерохелина и с добавлением FeCV на

1Ъ Ма НР04, Посевы ежедневно просматривают и оценивают результаты по числу выросших колоний. 40

При учете результатов оказалось, что рост на среде с энтерохелином появляется на 5-7-й день, в остальных пробах — на 11-13-е сутки.

Пример 2.Для исследования нлияны=,45

Ф энтерохелина на высеваемость микробактерий туберкулеза из органов морских свинок после интенсивной химиотерапии десять здоровых животных заражают

О, 01 мг/к г су спе н зии ми ко бак терий штамма В, 8 подкожно и правую паховую область, Спустя 3 недели после инфицирования животных поднергают лечению изониазидом (15 мг/кг) и рифадином (15 мг/кг) ежедневно н течение 3 мес. По истечении срока лечения морских свинок убивают хлороформом, а кусочки органов (легкие, печень,.селезенка) растирают в ступке и после обработки засевают на сре ды Левенштейна-йенсена, Финн-2 и 60

Левенштейна-йенсена с добавлением

25 мкг/мл энтерохелина. Всего производят 90 посевов суспензии органов морских свинок. Посевы просматривают ежедневно в течении 2,5 мес.Рост возбудителя туберкулеза оценивают по числу выросших колоний. Отрицательным результатом посева считают отсутствие роста колоний через

2,5 мес. инкубирования* и термостате при 37н С.

В результате проведенного исследования оказалось, что после интенсивной химиотерапии экспериментального туберкулеза рост колоний микобактерий туберкулеза обнаруживают только на среде Левенштейна-Йенсена с добавлением 25 мкг/мл энтерохелина °

На средах без энтерохелина .ни в одном случае не наблюдают роста колоний. Полученные данные свидетельствуют о том, что энтерохелин стимулирует рост микобактерий, у которых в процессе химиотерапии значительно снижается биологическая активность

Изучение влияния энтерохелина на нысенаемость возбудителя туберкулеза проводят также путем посева мокроты больных туберкулезом органов дыхания на среде Лененштейна-йенсена, Финн-2 и Левенштейна-йенсена с добавлением энтерохелина Всего производят 525 посевов мокроты от 175 больных. Рост микобактерий туберкулеза обнаружен и 12% случаев на среде

ЛеЬенштейна-Йенсена с добавлением энтерохелина. На среде ЛененштейнаЙенсена и Финн-2 без энтерохелина рост микобактерий туберкулеза обнаружен лишь в 6% случаев.

Данные исследования приведены в табл. 1 и 2, В табл. 1 показано влияние энтерохелина на рост микобактерий туберкулеза на среде Левенштейна-йенсена.

В табл. 2 представлена нысеваемость микобактерий туберкулеза из органов морских свинок на различных средах.

Пример 3. Испытания с бычьим видом микобактерий туберкулеза (штамм Во! .8) проводят в пробирке, так как инфициронанность бычьим видом возбудителя незначительна, и на зараженных лабораторных животных.

Результаты опыта аналогичны данным, полученным со штаммом Н, °

Использование предлагаемого способа позволяет повысить высенаемость микобактерий, что, в свою очередь, дает возможность повысить точность диагностики и ускорить рост микроорганизмон.

1063836

Т а б л и ц а 1

Штамм

Число проб

Среда без энтерохелина

Штамм микобактерий туберкулеза

25.10-13

Штамм И

5-7

То же

10-13 +

20

Таблица 2

Ф животных

Срок появления первых колониф; день

34

34

63

20

26

19

68

31

69

70

71

П р и м е ч а н и е. На средах Левенштейна-Йенсена н Финн-2 без энтерохелина роста колоний не наблюдается ни в одном случае.

Составитель Г. Смирнова

Редактор И. Рачкулинец Техред A.Бабинец Корректор A.Повх

Заказ 10472/27 Тираж 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. ужгород, ул. Проектная, 4

Среда с добавлением 25 мкг/мп энтерохелина

ГеС1у на 1% а, ИРО4

Среда ЛевенштейнаЙенсена с энтерохелином колонии

Срок культивирования до появления колоний, дни

26