Питательная среда для учета численности почвенных грибов

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ УЧЕТА ЧИСЛЕННОСТИ ПОЧВЕННЫХ ГРИБОВ, содержащая сернокислый аммоний, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, хлористый натрий, растворимый крахмал, агар и воду, отличающаяс я тем, что, с целью повышения количества учиты . ваемых грибов и точности их учета, дополнительно содержит мётиленовую синь при следукицем соотношении компонентов , мас.%: 0,098-0,12 Сернокислый аммоний Двузамещенный фос0 ,098-0,12 форной ислый калий 0,098-0,12 Сернокислый магний 0,98-0,12 Хлористый натрий Растворимый-крах0 ,9-1,1 мал . 0,0038-0,004 Метиленовая синь S 2,0-2,1 Агар (Л Остальное Вода

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

ОЦ /

РЕСПУБЛИН

ПЮ (И) 3(5Р С 12 Ы 1--00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

0,9-1,1

0,0038-0,004 @

2,0-2,1

Остальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ГЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3525350/30-15 (22) 16 ° 12 ° 82 (46) 28 02 84. Бюл. В 8 (72) Н,A. Сандрах (71) Молдавский научно-исследовательский институт полевых культур Научно-производственного объединения Селекция (53) 631 ° 466 ° 1(088 ° 8) (56) 1. Методы изучения почвенных . микроорганизмов и их метаболитов.

Изд. МГЪ, 1967.

2. Разумовская Г.З. и др. Лабораторные занятия по почвенной микробиологии. Л., изд. ЛГУ, 1960, с. 94, 175 (прототип). (54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ УЧЕТА

ЧИСЛЕННОСТИ ПОЧВЕННЫХ ГРИБОВ, содержащая сернокислый аммоний, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, хлористый натрий, растворимый крахмал, агар и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения количества учитываемых грибов и точности их учета, дополнительно содержит метиленовую синь при следующем соотношении компонентов, мас.Ъ:

Сернокислый аммоний 0,098-0,12

Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,098-0,12

Сернокислый магний 0,098-0,12

Хлористый натрий 0,98-0,12

Растворимый-крах- мал

Метиленовая синь

Агар

Вода

1076444

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использо вано прн исследовании почв.

Известна питательная среда Чапека, используемая для обнаружения и подсчета численности грибов в поч" 5 ве flj .

Недостатком среды Чапека является то, что на ней не растут грибы, которые не способны ассимилировать азот нитратов (например, мукоровые) . 10

Известна также питательная средакрахмал-аммиачный агар, " содержащая сернокислый аммоний, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, хлористый натрий углекис- 5 лый кальций, растворимый крахмал, агар и воду (2) .

Эта среда в качестве источника азота содержит сернокислый аююний, xopamo ассимилируемый и теми форма- ми грибов, которые не усваивают нитраты. Приготовление крахмально-аммиачного агара в лабораторных условиях не составляет трудностей.

По для количественных учетов грибов эта среда малопригодна, так как

|на ней развиваются преимущественно в большом количестве колонии бактерий и актиномицетов и лишь единичные колонии грибов.

Цель изобретения - повышение ко" личества учитываемых грибов и точ» ность их учета.

Поставленная цель достигается тем, что в питательную среду, содер-, жащую сернокислый амюний, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, хлористый натрий, растворимый крахмал, агар и воду, дополнительно вносят метиленовую синь при следующем соотношении ком- 40 понентов, мас.Ъю

Сернокислый аммоний 0 098-0,12

Двузамещенный фосфорнокислый 45 калий, 0,098-0,12

Сернокислый магний 0,098-0,12

Хлористый натрий 0,098-0,12

Растворимый крахмал 0t90-1,1 ацетиленовая синь 0,0038-0,0042

Агар 2,0-2,1

Вода Остальное

II р и м е р. Перед употреблением стерильную расплавленную питательную 55 среду подкисляют до рН .4 стерильным 5%-ным раствором соляной кислоты и охлаждают до 45©С. Затем вно- сят метиленовую синь в виде стерильного раствора. 60

1,0

О» 004

2,0

Остальное

Для посева по 1 мл суспензии исследуемой почвы, приготовленной на

0,1Ф-ном растворе пирофосфата натрия, вносят в стерильные чашки Петри, заливают 20 мл охлажденной до 45 С питательной среды и перемешивают содержимое чашек легким покачиванием.

После застывания агара чашки инкубируют при 20-22 С.

При проведении опыта соотношение компонентов среды меняют., варьируя количество метиленовой сини, вводимой в среду. Результаты опытов сведены в табл.1.

Лучший вариант получен при следующем соотношении компонентов питательной среды, мас.Ъг

Сернокислый аммоний 0,1

Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,1

Сернокислый магний 0,1

Хлористый натрий 0,1

Растворимый крахмал

Метиленовая синь

Агар

Вода при рН 4

При введении в состав питательной среды метиленовой сини в количестве

0,004 вес.Ъ удается учесть наибольшее количество грибоВ в почве (1493) при меньшем варьировании результатов (V 3,3) и большей точностью (h ®--1,7) °

На предлагаемой питательной среде с метиленовой синью и без нее проводят учет численности грибов в почве. Результаты учетов представлены в табл.2. При использовании для учета грибов крахмал-аммиачного агара на чашках Петри периодически обнаруживаются единичные колонии грибов, при этом количественный учет невозможен.

Подкисление крахмал-аммиачного агара до рН 4 (среда бее метиленовой сини) делает среду пригодной для количественных учетов грибов в почве, но колонии грибов быстро увеличиваются в диаметре и сливаются. Учет их затруднен.

Введение метиленовой сини в подкисленную среду задерживает рост колоний грибов, в результате чего диаметр их увеличивается медленнее, чем на среде без метиленовой сини, колонии не сливаются. Это позволяет учЕсть большее количествО колоний, а следовательно, и грибов. По этой же причине снижается варьирование между повторностями в анализе, повышается точность учетов °

1076444

Таблица 1

15,3 100,0 6,9 3 5

19 5 127 5 ф,1 2 l

0,000

0,001

0,002 18 9 123,5 5,1 2,6

3,3 1,7

149, О

0,004 22,8

0,006 20,1 131,4 4,0, 2,0

16,6 108,5 8,1. 4,0

0,008

Таблица 2

Питательная среда Варианты опыт ор

ll 4 112 5 2,1

Среда+метиленовая синь, рН 4

Озимая пшеница 9.уl 82 (расчетная доза Р PK на урожай 60 ц/га) 5,4 2,7

Озимая пшеница (расчетная доза РК на урожай

60 ц/га 29.V1,82 19,5 113,2

Среда без метиленовой сини, рН 4

17,3 1ОО,0

Среда+метиленовая синь, рН 4

Сахарная свекла (без удобрений) 29.V1.82 18,2 143,2 9,2 4,6

Среда без метиленовой сини, рН 4

12,7 100,0 24к8

Среда+метиленовая синь, рН 4

Сахарная свекла (II I a Р K<20 ) 117 1, 1,6 0,8

Среда без мехиленовой сини, pEI 4

100,0 12,9 6,5

9,l

Среда без метиленовой сини, рН 4

Среда+метиленовая синь, рН 4

Концентрация метиленовой сини р мас. Ъ

Численность грибов, тыс./r сухой почвы

Численность грибов

Коэффициент вариации, Ч,В

Относительная ошибка средней

tn Ъ

1076444

Среда+метиленовая синь, рН 4

Сахарная свекла (навоз 80 т/га) 14.У11.82

13,8 174,6 9,2 4,6

Среда без метиленовой сйнй," р .4

7,9

100,0 13,4 6,7

Сахарная свекла (без удобрений) 14.У11.82

131,9 5,9 2,9

12,4

Среда без метиленовой сини, рН 4

9,4 100,0 25,9. 12,9

Составитель М. Мирзаев

Редактор Е. Папп Техред М.Гергель Корректор В. Бутяга

Заказ 651/23 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

М Среда+метиленовая синь, рН 4

Продолжение табл. 2

5 . 6 7