Способ определения загрязненности жидких сред грамотрицательными бактериями

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗАГРЯЗНЕННОСТИ ЖИДКИХ СРЕД ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫШ БАКТЕРИЯШ путем добавления бделловибрионов к исследуемой жидкости , отличающийсятем, что, с целью упрощения и ускорения способа, -осуществляют реакцию в капилляре , заполнив его до 2/3 объема равными количествами исследуемой жидкости и сыворотки, содержащей бделловибрионы , далее образовавшуюся смесь перемешивают и, выдержав при комнатной температуре, определяют загрязнение по появлению осадка. (О с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИ4ЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) З(д) А 61 К 39/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3413858/28-13 (22) 25.03.82 (46) 07.05.84. Бюл. И 17 (72) С.A.Óñìàíîâà, В.П. Комчатнов, E.Ï.Ãaÿèíà и Н.Х.Амиров (71) Казанский ордена Трудового

Красного Знамени государственный медицинский институт им.С.В.Курашова (53) 616-078(088.8) (56) 1. Методические рекомендации по комплексному санитарно-микробиологическому исследованию поверхностных вод. M., 1976.

2. Рационализаторское предложение

В 23/48 ЦНИИ эпидемиологии М3 СССР, 1978, (прототип). (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗАГРЯЗНЕННОСТИ МЩКИХ СРЕД ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ БАКТЕРИЯМИ путем добавления бделловибрионов к исследуемой жидкости, отличающийся - тем, что, с целью укрощения и ускорения способа, -осуществляют реакцию в капилляре, заполнив его до 2/3 объема

3 равными количествами исследуемой жидкости и сыворотки, содержащей бделловибрионы, далее образовавшуюся смесь перемешивают и, выдержав при комнатной температуре, определяют загрязнение по появлению осадка..

412

l 1090

Изобретение относится к бактериологии, преимущественно к способам определения бактериальной загрязненности смазочно-охлаждающих жидкостей (СОЖ) и сточных вод, и,может быть 5 использовано. для определения степени загрязненности жидких сред в процессе очистки. Традиционные бактериологические методы определения общего количества бактерий в жидких средах относительно сложны, сравнительно дороги и требуют длительного времени 11, Известен способ определения загрязненности жидких сред грамотрицательными бактериями путем добавления бделловибрионов к исследуемой жидкости 2!.

Однако известный способ сложен в исполнении и требует длительного 20 времени при подготовке до 32 ч.

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа.

Укаэанная цель достигается тем, что согласно способу определения загрязненности жидких сред грамотрицательнымн бактериями путем добавления бделловибрионов к исследуемой жидкости, осуществляют реакцию в капилляре, заполнив его до 2/3 объема равными 30 количествами исследуемой жидкости и сыворотки, содержащей бделловибрионы,1 далее образовавшуюся смесь перемешивают и, выдержав при комнатной температуре, определяют загрязнение по появлению. осадка.

В стеклянную капиллярную трубочку до 1/3 ее высоты набирают разведенную физиологическим раствором в соотношении 1:1 сухую кроличью или ослиную сыворотку, содержащую бделловибрионы в количестве 66Х10 БОЕ/л, а затем — равное количество исследуемой СОЖ, после тщательного перемешивания трубочку устанавливают в верти-4 кальном лоложении и инкубируют при комнатной температуре в течение

4-24 ч, и по образованию осадка визуально определяют присутствие бактерий рода Пседомонас или других грам отрицательных бактерий в количестве от 2Х10 до 1)!10 в 1 мл исследуемой среды.

Предварительные исследования установили, что в указанных сыворотках содержатся 660 БОЕ/л. Сухие кроличьи и ослиные сыворотки.и сухая кроличья плазма существенно не отличаются по своей активности. Скорость наступления реакции при различных концентрациях грамотрицательных бактерий в исследуемой СОЖ представлена в табл.1 Скорость выпадения осадка зависит от степени загрязнения среды.

Определение общего количества бактерий (ОКБ) в 1 мл проводилось в

СОЖ различных марок (эмульсии, масла, сунгрин, тосол, электролит, ОСМ-3) и осуществлялось общепринятым методом.

Исследуемые пробы после разведения в стерильной дистиллированной воде

-1 от 10 до 10 по 1 мл вносились на

2 стерильные чашки Петри и заливались растопленным, остуженным мясопептонным агаром. Чашки помещали в термостат на 24 ч. Среднее количество выросших колоний считали с помощью камеры Вольфьюгеля. Из табл.1 видно, что всего было проанализировано

105 проб СОЖ, иэ них 32 нативных и

74 разведенных физиологическим раствором от 1Х10 до 1/10 .

Результаты параллельного определения СОЖ общепринятым методом и предлагаемым ускоренным способом приведены в табл.2.

Минимальное количество ОКБ, кото- . рое улавливала сыворотка и давала

100Х-ную положительную реакцию в капиллярах, равнялось 5 10 -58 ° 10

7 т.е. чувствительность реакции была небольшая, она определяла только загрязненные СОЖ (п.У 4 и 5), При слабом загрязнении (2 10 -2 10 ) реак6 ция была положительной только в

45,4Х случаев. Стерильные или чистые

СОЖ давали отрицательную реакцию.

Различия между группами были статически достоверны (РС0,05) (табл.2)., Предлагаемый способ дает ответ через 4-24 ч в прямой зависимости от загрязненности среды. Причем результат получается тем скорее, чем больше загрязнена среда, что очень важно для срочных анализов СОЖ. Известно, что сильная степень загрязненности может привести к аварийным случаям и трудовым увечьям рабочих, а в области очистных сооружений к загрязнению окружающей среды.

В тех случаях, когда имеется недостаток биологической очистки, ее заменяют излишней концентрацией хлора, а это, в свою очередь, ведет к химическому загрязнению водоемов в течение длительного времени. Предла412

Т а блица

Количество проб

Опыт

Концентрация бактерий в 1 мл

Время наступления реакции

Контр.

1-5м . 10-30м 1-Зч 4-8ч 18-24ч

20 млд

20 мпд

1 7++ 27++++ 27++++

10

1,5 млд

1„5 млд

30+!

4+ 3+++

6+:67+

500 млн

500 мпн

73

147

Сыворотка

П р и и е ч а н и е: + - интенсивйость реакции, равная 1 мм.

3 1090 гаемый метод дает возможность быстро (в течение 4 ч) уловить загрязнение, когда процесс очищения сточных вод еще не завершен. Необходимо отметить, что процесс очистки вод в очистных . 5 сооружениях идет около 8 ч. С помощью существующих методов (ОКБ, коли-титр) фактически проверяют уже сброшенную . воду в реку.

Таким образом, использование пред- 1О лагаемого способа выявления загрязненности жидких сред грамотрицательными бактериями по сравнению с известным методом имеет следующие преи" мущества: ускорение процесса постановки опыта. Если для постановки опыта для ОКБ и коли-титров по известному способу требуется несколько часов, то для постановки реакции по предлагаемому способу достаточно не- 2О скольких минут, упрощение и облегчение труда работников лаборатории (не нужно считать количество выросших колоний), своевременное выявление загрязненности СОЖ предохраняет станки от аварий, что дает огромную экономию по стране.

Установленный феномен — обнаружение смеси бактерий в СОЖ вЂ” может быть использован для рекуперации СОЖ путем биологической очистки.

Экономический эффект: по предварительным подсчетам стоимость одного анализа в 100 раз дешевле, чем один анализ воды.

Улучшается состояние здоровья рабочих, контактирующих с СОЖ вЂ” быстрое определение загрязненности и замена

СОЖ предупреждает развитие кожных, аллергических заболеваний, Охрана окружающей среды: быстрое определение загрязненности вод на этапах очистки позволяет дозированно хлорировать врду в зависимости от концентрации бактерий и сбрасывать обезвреженную и очищенную воду, тем самым, охраняется чистота рек от химического и бактериологического sa-. грязнения.

1090412

Таблица

В цельных СОЖ

Число положительных реакций

Время появКонтроль

ОКБ

Р, различие межКолиПример, 9 чество ана- От

Сыворотка

До

Проба ления ду группами осадка, ч ливов абс.

Ф.P.

Ф ° Р.

0 О

0 .О 00905

0 . 0 >О 05

1 10

В разведенных СОЖ {1 I -1 -10 ) 0 О

0 0

) 0,05

0 0

5,.0

1У10 0 0

2к 10 34 100

24 0 0

)0,05

1 10 14 100

О О

Всего 105 проб.

Составитель П.Бонарцев

Редактор Г.Гербер Техред А.Бабинец Корректор И.Эрдейи

Заказ 2977/8 Тираж 688 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб ., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная, 4

1 ° 103

2 F 106

5 10

4 10З О О

2 ° 10 5 45 4

58 ° 10 6 00

27 10 5 f00

24 О О (0,05

8 0 О

4 О 0 со 05