Способ извлечения иммуноглобулинов из биологических жидкостей

 

СПОСОБ ИЗВЛЕЧЕНИЯ ИММУНО , ГЛОБУЛИНОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЩЦКОСТЕЙ путем их пропускания через. сорбенты, отличающийся тем, что, с целью повьшения избирательности и эффективности сорбции иммуноглобулинов , в качестве сорбента используют макропористый сополимер стирола и дивинилбензола, содержащий группы несимметричных диметилэтилен-бисаммониеЬых оснований следующей структуры : -Ш-СН2+ С1СН2-И (СНз)г-СН2-СН2-11(СНз)2 9

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОцИАлистичесних

РЕСПУБЛИН ае (11) 3Ш G 01 Я 33/50//А 61 К. 47/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ госудю старинный комитет соор

re д лАм изсб етений и Отнр 1тий

СН2-5(CH))g-.СН -СН вЂ” N(CHy)g I (21) 3594986/28-13 (22)29.03.83 (46) 30.10.84. Бюл. Р 40 (72) В.Д. Горчаков, А.Ф. Елинек, Н.Г. Короткий и В.И. Сергиенко (71) 2-ой Московский ордена Ленина государственный медицинский институт нм. Н.И. Пирогова (53) 577. 15(088.8) (56) 1. Туркова Я. Аффинная хроматография. М., "Мир", 1980, с; 289.

2. Лопухин Ю.М., Молоденков М.Н., Гемосорбция. М., "Медицина", 1978, с. 31-34, 139-141. (54)(57) СПОСОБ ИЗВЛЕЧЕНИЯ ИММУНО,ГЛОБУЛИНОВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ путем их пропускания через. сорбент» отличающийся тем, что, с целью повьппения избирательности и эффективности сорбции иммуноглобулинов, в качестве сорбента используют макропористый сополимер стироаа и дивинилбензола, содержащий группы несимметричных диметилэтилен-бисаммониевых оснований следующей структуры:

Ф

-сн-сн,—

1121619

Изобретение относится к медицине, а именно, к сорбционным процессам извлечения токсичных KoMTIoHeHTolh (иммуноглобулинов) из крови и других биологических жидкостей. 5

Использование способа основано на TQMð что в крОви бОльных с аутОиммунными заболеваниями повьппается концентрация иммуноглобулинов, ссо" бенно иммуноглобулинов класса 4 .

Известен способ извлечения иммуно. глобулинов из сыворотки крови человеха с помощью иммобилизованного на сефарозе ЧВ белка А из StaphyloCOCCUB апгепз p) . t5

Недостатками указанного способа являются сложность получения сорбента, невозможность извлечения с его помощью различчых иммуноглобулинов (сорбируется только 3g 6, но не 3g" и 20

3$,4), а также неудовлетворительные характеристики сорбента при проведении гемосорбции (низкая механическая прочность, неустойчивость к действию микроорганизмов, сложность 25 стерилизации).

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ извлечения иммуноглобу- ЗО линов из биологических жидкостей путем их пропускания через сорбентактивированный уголь $2(., Недостатками известного способа являются низкая избирательность

35 сорбции иммуноглобулинов (около 1Т от общего количества адсорбирован ного белка) и малая емкость углей в отношении иммуноглобулинов.

Цель изобретения — повышение избирательности и эффективности сорбции иммуноглобулинов.

Поставленная цель достигается согласно способу извлечения иммуноглобулинов из биологических жидкостей путем их пронускания через ñoðбент, причем в качестве сорбента используют макропористый сополимер стирола и дивинилбензола, содержа-щий группы несимметричных дю етил— этилен-бис-аммониевых оснований следующей структуры:

Сущность изобретения заключается в использовании указанного вьппе специфического сорбента, отличительными характеристиками которого яв"ляется макропористость и наличие групп несимметричных диметилэтипенбис-аммониевых оснований. Полученный сорбент обладает пригодными для гемосорбции свойствами и в то же время эффективно и избирательно сорбирует иммуноглобулины.

Пример 1. 1 r макропористого сополимера стирала и дивинилбензола (в расчете на сухой вес,), содержание дивинилбенэола 15Х, с группами несимметричных диметилэтилен-бис-аммониевых оснований заливают 5 мл сыворотки донорской о крови, выдерживают при 36 С и перемешивании в течение 2 ч. Затем сорбент отделяют, промывают физиологическим раствором и проводят элюирование сорбированных белков с последующим иммунохимическим анализом.

Емкость сорбента по белкам (на 1 г) составляет, мг/г: обший белок 8,2, иммуноглобулин Cj 1,92, иммуноглобулин М 0,08, иммуноглобулин А 0,64.

Доля иммуноглобулинов от всего сорбированного белка составляет 327.

Пример 2. 1,8 г макропористого сополимера стирола и дивинилбензола (содержание дивинилбенэола

15 мас.X) c группами несимметричных диметилэтилен-бис-амиониевьгл оснований загружают в- колонку объемом

5 мл и перфузируют через нее лимфу человека со скоростью 0,5 мл/мин в течение 20 мин. Затем сорбент промывают физиологическим раствором и проводят элюирование сорбированных белков с последующим анализом. Емкость сорбента составляет: по общему белку 5 9 мг/г по иммуногло-. булину Й 1,64 мг/г. Доля иммуноглобулина Я от всего сорбиронанного белка составляет 287.

Пример 3. 1,8 г макропористого сополимера стирола и дивинилбензола (содержание дининилбензола

15 мас.X) с группами несимметричных диметилэтилен-бис-аммониевых основайий загружают в колонку объемом 5 мл и перфузируют через нее нативную человеческую кровь со скоростью

0,3 мл/мин в течение 30 мин. Затем сорбент промывают физиологическим раствором и проводят элюирование сорбированных белков с последующим анализом. Емеость сорбента составляет:

121619

Емкость, мг/г, по белкам

Доля иммуногло. булинов, 7 от всего сорбированного белка

Сорбент общему иммуноглобулинам с (м

Известный активный уголь "ИГИ") 6,2 0,04

0,01

0,8

Предложенный по примеру 1 8,2 1,92

0,08

0,64

Составитель В. Муронец

PegaKTQp К. Волощук Техред T.Ìàòî÷êà Корректор М. Леонтюк

Заказ 7974/35 Тираж 822 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 1 по общему белку 10 1 мг/г, по иммуноглобулину 5 22,,008 8 ммгг//гг, по иммуно глобулину М 0,08 мг/r, по имму 1оглобулину А. 0,72 мг/г. Доля иммуноглобулинов от всего сорбированного белка составляет 28Х.

Сравнение результатов, полученнйх по известному и предлагаемому способам, дано в таблице.

Таким образом, использование предлагаемого способа извлечения иммуно- глобулинов из биологических жидкостей по сравнению с известным обеспечивает уменьшение общего количества извлекаемых из биологических жидкостей белков в результате большей избирательности сорбции иммуноглобулинов, возможность достижения .необходимой степени очистки биологических жидкостей от иммуноглобулинов при использовании небольших ко1О лонок вследствие увеличения емкости сорбента; возможность извлечения иммуноглобулинов всех классов.