Способ идентификации галофильных вибрионов

 

СПОСОБ ВДЕНТИФИКАЦИИ ГАЛОФИЛЬНЫХ ВИБРИОНОВ путем посева исследуемого материала на питательную среду , отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, идентификацию проводят методом фаготипирования с использованием фага Vibrio parahaenrolyticus 333 и/или Vibrio parahaemolyticus 375.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

00UIWI

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1124031 А

g g С 12 N 7 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ .И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3497284/28-13, 3496553/13 (22) 19.07.82 (23) 14.10.82 (46) 15.11.84. Бюл. В 42 (72) Г.М. Голковский, А.Е. Либинзон и В.К. Кирдеев

f .(53) 576.8.077.5 (088.8) (56) 1. Иикробиология и лабораторная диагностика холеры (Краткое руководство). Ростовское книжное нзд., 1975, с. 42-43. (54)(57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ГАЛОФИЛЬНЫХ ВИБРИОНОВ путем посева исследуемого материала на питательную среду, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, идентификацию проводят методом фаготипирования с использованием фага

Vibrio parabaemoIyticus 333 и/или

Vibrio parahaemoIyticus 375. в Иркутском ПЧИ Сибири и Дальнего

Востока или в Московском институте вакцин и сывороток им. Мечникова) с повьппенной концентрацией соли. На пластинки плотного агара выливают вторым слоем смесь расплавленного и- охлажденного до 45 С 0,77. агара

Мартена с 27. NaCI 2-3 часовой

0,1 мп среды. Через .16-18 ч при 2025 С вибрионы фага 333 образуют в культурой V. parahaemoXyticus 3421

Ф круглые полупрозрачные негативные колонии диаметром 1,5-2 мм.

При нанесении капли фага 333 на газон индикаторного штамма непосредственно на плотном агаре или в слое мягкого агара наблюдается

Фаг 333 полностью нейтрализуется гомологичной сывороткой и не нейтрализуется сыворотками к гетекультур галофильных вибрионов не лизирует 157 испытанных культур галофильных вибрионов, не лизируюдругих родов и семейств: Аегошопав

anaегоgenes, Kscherichis coIi, Pseudomonas aeruginosa. На этом основании фаг может быть использован для идентификации галофильных вибрионов как в составе поливалентного препарата, так и для фаготипирования в качестве монофага.

Фаг Vibrio рагаЬаешоЕу 1сиз 375 выделен при исследовании мидий, выловленных в Севастопольской бухте.

Фаг Vibrio parahaemolyticus 375 хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИВС МЗ СССР нод номером

Ф-108 и характеризуется следующими признаками.

Морфологические и культуральные свойства.

Головка вибрионов фага 375 в проекции имеет гексагональную форму > размером 660 . 37 660 + 4? А.Длина отростка 787 + 57 3, а его диаметр

226 49 A. Доверительные интервалы средних величин определены для проверки уровня достоверности, равного

1 1124031 2

Изобретение относится .к медицинской микробиологии, а именно к лабораторной диагностике гальфильных ! вибрионов.

Известен способ ццентификации галофильных вибрионов путем посева

5 исследуемого материала на питательную среду с последующей идентификацией по биохимическим тестам (1 . бульонной культуры индикаторного

Однако известный способ трудоем- 1О штамма и 50-100 вибрионов фага в кнй, так как является многоэтажным и требует .пересевов на ряд питательных сред для определения биохими- мягком слое агара с индикаторной ческой активности.

Целью изобретения является упроще ние способа.

Цель достигается тем, что соглас.но способу идентификации галофильных вибрионов путем посева исследуемого материала на питательную среду идентификацию проводят методом1фаго- лизис со вторичным ростом. типирования с использованием форма

Vibrio parahaemoIyticus 333 и/или

Vibrio parahaemoXyticus 375.

Фаг Vibrie parahaemoIyticus 333 25 рологичн фагам галоф ьн и друвыделен при исследовании краба, гих вибрионов. выловленного в Севастопольской бухте. . Фаг 333 лизирует 153 испытанных

Фаг Vibrio parahaemoXyticus 333 хранится в коллекции бактериофагов

Тбилисского НИИВС МЗ СССР под номером .

Ф«104 и характеризуется следующими р щихся фагом 375 и другими фагами, свойствами.. специфичен и не лизирует представиМорфологические и культуральные : телей вида V. choIerae 01 и не 01 свойства.. группы, а также микроорганизмы

Головка вибрионов фага 333 в проекции имеет гексагональную фор- 35 му размерами 613+ 63 576+ 53 A длина отростка 126 +24 3.. Доверительные интервалы средних величин определены для уровня достоверности, равного 997 (р - О, 01). Фаг с коротким отростком и относится к

3 морфологической группе по класси. фикации А.С. Тихоненко., Фаг Vibrio parahaemoIyticus 333 активно ренродуцируется в щелочном . бульоне Мартена с 2-3X NaCI (рН 7,77,8), при посевной дозе фага

5 10 мл среды н множественности инфекции - 1,4, через 3,5 ч при 3537 С в 1 мл среды накапливается

7 "10 вибрионов.

Негативные колонии фага 333 воспроизводятся с помощью двуслойного метода Грациа. В качестве нижнего плотного слоя используют щелочной 55

2Х агар Мартена с ЗЖ NaCI или другие плотные щелочные среды для выделения вибрионов (изготовленные

124031

2S

35

ВНИКНИ Заказ 8208/24

Тираж 521 Подписное

Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная, 4

3 1

990 (р = 0,01) . Фаг. с сокращающимся чехлом отростка и относится к 5 морфологической группе по классификации

А.С. Тихоненко.

Фаг Vibrio parahaemoIyticus 375 активно репродуцируется в щелочном бульоне Мартена с 3% NaCI (pl 7.67,8) при посевной дозе фага 3.10 мл среды и множественности инфекции, равной 2, через 3, 5 ч при 35-37 С в

1 мл среды накапливается 2 10" виб рионов. Негативные колонии фага 375 воспроизводятся с помощью двуслойного метода Грациа. В качестве нижнего плотного слоя используют для выделения вибрионов (изготовленные в Иркутском ПЧИ Сибири и Дальнего Востока или в Московском институте вакцин и сывороток им. Мечникова) с повышенной концентрацией соли. На пластинки плотного агара выливают вторым слоем смесь расплавленного и охлажденного до 45 С 0,7% агара Мартена с 2% NaCI, 2-3-часовой бульонной культуры индикаторного штамма (0,2 мл) 50-100 вирионов фага вО, 1 мл среды. Через 16-18 ч при

20-25 С вирионы фага 375 образуют в мягком слое агара с индикаторной культурой Vibriî parahaemoIyticus Зб0 негативные колонии округлой формы, мутные, 1,5-2 мм в диаметре. . При нанесении капли фага 375 на газон иидикаторного штамма непосредственно на плотном агаре или в слое мягкого агара наблюдается лиэис.

Фаг Vibrio parahaemoIyticus 375 полностью нейтрализуется гомологичиой сывороткой и не нейтрализуется сыворотками к другим фагам гальфнльиых и других вибрионов, лиэирует

4.4Х культур парагемолитнческих . вибуионов.Фаг специфичен и не лизи- . . póåò представителей вида V. choIerae

01 и не 01 группы, а также микроорганизмы других родов и семейств:

Aегоmonas anaегоtenes, Escherichia

coIi, Pseudomonas aeruginosa.На этом основании фа.r может быть использован для идентификации галофильных вибрионов как в составе поливалентного

4С

4 препарата,так и для фаготипнрования в качестве монофага.

Пример 1. Использование фага Vibrio parahaemoIyticus 333 для идентификации культур галофильных вибрионов.

Из испражнений бального острой кишечной инфекцией, подозрительной по плиническому течению на заболевание, вызванное галофильными вибрионами, была вьщелена культура грамотрицательных бактерий. Идентификацию этой культуры с помощью фага

V. parahaemoIyticus 333 проводят следующим образом. Культуру засевают в бульон Мартена с ЗХ NaCI u помещают в.термастат на 3 ч 0,2 мл выросшей культуры смешивают с 5 мл расплавленного и охлалпенного до

45 С 0,7Х агара Мартена с 2% NaCI и наливают вторым слоем на пластинки 2Х а ара Мартена с 3% NaCI в чашках Петри. После подсушивания на поверхность мягкого агара с культурой наносят стерильной пипеткой каплю фага V. parahaemoIyticus 333.

Посев оставляют при комнатной температуре.

При просмотре чашки через 18 ч на месте нанесения капли фага наблюЭ дается просветление газона культуры, свидетельствукнцее о ее растворении. Лизис изучаемой культуры под действием фага V. parahaemolyticus позволяет идентифицировать ее как галофильный вибрион.

Пример 2. Выделенная культура не лиэировалась фагом V. parahaemoIyticus 333. По методике, описанной в примере 1, определена ее чувствительность к фагу. 375.Лизис изучаемой культуры под действием фага V. рагаЬаешоХу счз 375 позволяет идентифицировать ее как галофильного вибриона.

Аналогичным образом были идентифицнрованы культуры, выделенные из морской воды и гидробионтов, а также определена, чувствительность музейных культур к фагам 333 и 375.

Использование предложенного способа позволяет упростить идентификапию галофильных вибрионов.