Способ определения глюкозы в биологических жидкостях

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГгаОКОЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ путем фотометрического определения комплекса, образовавшегося при повьшенной температуре в реакщ и глюкозы с ортотолуидином в КИС.1ТОЙ среде, о т л и чающий .ся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, рН реакционной среды доводят до 3,253 ,35 путем добавления к ортотолуидиновомУ реактиву водного раствора аммиака.

„„Я0„„3 124228

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А зац G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И ABTOPGHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OfHPÛÒÈA (21) 3571012/28-13 (22) 10. 01. 83 (46) 15. 11.84. Бюл. Ф 42 (72) В.Ю. Домбровский и В.П. Панферов (71) Белорусский научно-исследовательский институт охраны материнства и детства (53) 612, 122 (088. 8) (56) 1. Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследования.

Под ред. В.В. Иеньшикова. И., 1973, с. 59-61 (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ

В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ путем фотометрического определения комплекса, образовавшегося прн повышенной температуре в реакции глюкозы с ортотолуидином в кислой среде, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, рН реакционной среды доводят до 3,253 35 путем добавления к ортотолуидиновому реактиву водного раствора аммиака.

1124228

10 где Срл — концентрация глюкозы в опытной -пробе, ммоль/л;

С вЂ” концентрация глюкозы в эталонной пробе, ммоль/л;

Ер„ — оптическая . плотность опыт- "5 ной пробы;

Š— оптическая плотность эталонэт ной пробы, Известный способ имеет недостаточно высокую чувствительность. 50

Цель изобретения — повышение чувствительности способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения глюкозы в биологических жидкостях 55 путем фотометрического определения комплекса, образовавшегося при повыl шенной температуре в реакции глюкозы

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано при определении глюкозы в крови и других биологических жидкостях.

Известен способ определения глюко- 5 зы в биологических жидкостях путем фотометрического определения комплекса глюкозы с сртотолуидином в кислой среде при повышенной температуре, по которому глюкозу в крови определяют следующим образом: в пробирку наливают 0,9 мл 0,18 моль/л (ЗЖ) раствора трихлоруксусной кислоты выдувают в нее 0,1 мл крови, перемешивают и центрифугируют, 0,5 мл центрифугата переносят в .другую пробирку, добавляют 4,5 мл ортотолуиди-, нового реактива из набора для определения глюкозы НПО "Биохимреактив и помещают в кипящую водную баню на 8 мин, после чего охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры. Оптическую плотность образовавшегося цветного комплекса измеряют на фотоэлектроколориметре при оранже- 5 вом или красном светофильтре (590650 нм) в кювете с толщиной слоя

10 мм против контроля на реактивы, который ставят так же, как опытную пробу, но вместо крови берут 0,1 мл дистиллированной воды. Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробй, которую ставят так же как опытную .но вместо крови беУ Э

35 рут О, 1 мл эталонного раствора глюко-; зы с известной концентрацией 11.

Расчет ведут по формуле

C1) уг 40 ортотолуидином в кислой среде, рН .--=«,.с ной среды доводят до 3,25З„э5 путем добавления к ортотолуидиновому реактиву .водного раствора аммиака.

Пример 1. (макровариант).

В пробирку наливают 0,9 мл

0,18 моль/л раствора трихлоруксусной кислоты, выдувают в нее 0,1 мл крови, перемешивают и через 5 мин центрифугируют. 0,5 мл центрифугата переносят в другую пробирку и добавляют

4,5 мл модифицированного ортотолуидинового реактива, который готовят перед опытом смешиванием ортотолуидинового реактива из набора для определения глюкозы НПО "Биохимреак:ив"

25%-ным водным раствором аммиака (12:1 по объему). Пробирку помещают в кипящую водяную баню на 8 мин, после чего охлаждают водопроводной водой до комнатно, 1 температуры. Оптическую плотность образовавшегося цветного комплекса измеряют на фотоэлектроколориметре при оранжевом или красном светофильтре (590-650 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против контроля на реактивы, который ставят так же, как опыт, но вместо крови берут дистиллированную воду. Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую ставя так же, как опытную, но вместо крови берут эталонный раствор с известной концентрацией глюкозы. Расчет ведут по формуле (1) .

При Еол - О, 120; Е т 0,060, Сэг

2, О ммоль/л

0,120

Срл= р 06р х 2 =- 4,0 ммоль/л.

Э

Аналогично определяют содержание глюкозы.в сыворотке крови, спинномозговой жидкости и моче.

Пример 2 (микровариант). В пробирку наливают О, 15 мл О, 18 ммоль/л раствора трихлоруксусной кислоты, выдувают в нее 0,01 мл крови, перемешивают и через 5 мин центрифугируют.

0,1 мл супернатанта переносят в другую пробирку и, добавляют 0,7 мл модифицированного ортотолуидиноного реактива, который готовят перед опытом смешиванием ортотолуидилового реактива для определения глюкозы из набора НПО Биохимреактив" 257-ным водн1ам раствором аммиака (12:1 по

124228

Составитель Н. Гуляева

Редактор Л.Пчелйнская Техред,Ж.Кастелевич Корректор И. Эрдейи

Заказ 8272/34 Тираж 822 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгор д, ул, Проектная, 4 з

1 объему) . Пробирку помещают в кипящую к,одян,:к, баню на 8 мин, после чего охлаждают водопроводной водой до комнатной температуры. Оптическую плотность образовавшегося цветного комплекса измеряют на микроколориметре

МКМФ 1 при красном светофильтре (615 нм) в кювете с толщиной слоя

10 мм против контроля на реактивы, который ставят так же, как и опытную пробу, но вместо крови берут 0,01 мл дистиллированной воды.

Количество глюкозы в опытной пробе высчитывают с учетом оптической плотности эталонной пробы, которую ставят так же, как опытную, но.вместо крови берут 0,01 мл эталонного раствора глюкозы с известной ее кон4 центрацней Расчет ведется по форкуле (1) .

При Еоп = 0,060; Сэт = ммоль/л;

Е = 0,240

0 060

С - - — х 6 = 5 имоль/л.

0,240. Аналогично определяют содержание глюкозы в сыворотке крови, спинно1О мозговой жидкости и моче.

Влияние рН реакционной среды .на величину оптической плотности подтверждается экспериментально при исследовании эталонных растворов

15 глюкозы с концентрацией 5,55 ммоль/л.

Предлагаемый способ позволяет по.высить чувствительность определения глюкозы в биологических жидкостях на 36-37 .