Способ дифференцирования давности образования пятен крови

 

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИРОВАНИЯ ДАВНОСТИ ОБРАЗОВАНИЯ ПЯТЕН КРОВИ . / путем экстрагирования пробы буферньм раствором, спектрофотометрирования экстракта в видимом диапазоне длин волн с добавлением в исследуемую пробу гексациано-( Ш ) феррата калия, отличающийся тем,что, с целью повышения точности способа, спектрофотометрирование проводят в области 575-595 нм, дополнительно /снимают спектр поглощения без добавления гексациано-(Ш| феррата калия, рассчитьгаают разность максимальных зна чений оптических плотностей растворов до и после добавления гексациано- (Ш феррата калия, далее определяют значения оптической плотности в изобестической точке в области 585595 нм и по отношению полученной разности к оптической плотности в изобестической точке дифференцируют давность образования пятен крови.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

ВЮ РВ

РЕСПУБЛИК

4(5!) 6 О! и 33/48!

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н авта сн ва саидп ильстви

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ССОР

FI0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТО!Т!ф (2I J 36041 I8/28-!3 (22) I0.06.83 (46) 07.02.85. Бюл. В 5 (72) А.Г.Логвиненко, Ф.Я.Сидько, 0.H Туребаев С.И.Логвиненко и В.И.Щенякцкий (7!.). Актюбинский государственный медицинский институт ($3) 6!6.07(088.8) (56) I. U.Kohler, !.Oepen."Rechtsemed", !977, t.79,. 3, р.!83-!87 (прототип). (54) (57) . СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИРОВАНИЯ

ДАВНОСТИ ОБРАЗОВАНИЯ ПЯТЕН КРОВИ

iпутем экстрагирования пробы буферным раствором, спектрофотометрирования экстракта в видимом диапазоне длин, SU„„1138741 А волн с добавлением в исследуемую пробу гексациано-(Ш ) феррата калия, отличающийся тем,что, с целью повышения точности способа, снектрофотометрирование проводят в области 575-595 нм, дополнительно снимают спектр поглощения без добавления гексациано-{Ш) феррата калия, рассчитывают разность максимальных значений оптических плотностей растворов до и после добавления гексациано-(Ш ) феррата калия, далее определяют значения оптической плотности в иэобестической точке в облаети 585595 нм и по отношению полученной разности к оптической плотности в изобестической точке дифференцнруют давность образования пятен крови.

1 1138

Изобретение относится к судебной медицине и может:быть использовано в гематологии.

Известен способ, в котором при установлении давности образования пятен крови также определяют состояние дериватов гемоглобина путем изучения его спектральных характеристик в, видимой области длин волн ).13.

Недостатком этого способа являет". ся низкая чувствительность в определении состояния дериватов гемоглобина пятен крови, что не позволяет его испольэовать в судебной медици-. не для установления времени воздействия абиотических факторов окружающей среды на кровяные пятна.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу дифференцирования давности образования пятен крови путем экстрагирования пробы буферным раствором, спектрофотометрирования экстракта в видимом диапазо.не длин волн с добавлением в исследуемую пробу гексациано- III) феррата калия, снектрофотометрирование проводят вобласти 575-595нм,дополнительно снимают спектр поглощения без добавления гексациано-(Ш ) феррата

30 калия, расситывают разность максимальных значений оптических плотностей растворов до и после добавления гексациано- (Ш ) феррата калия, далее определяют значения оптической плотности З5 в изобестической точке в области

585-595 нм и по отношению полученной разности к оптической плотности в изобестической точке дифференцируют давность образования пятен крови.

Способ осуществляют следующим образом. .Кровь экстрагируют из кровяных пятен в фосфатном буфере Зеренсена рН 7,8, готовят небольшое количество 45 раствора гексациано-(Ш 1 феррата ка" лия в фосфатном буфере Зеренсена; осуществляют центрифугирование полученных вытяжек,из пятен крови; обест печи ают одинаковую концентрацию 50 дериватов Нв во всех растворах, осуществляя контроль по значению оптической плотности этих растворов при длине волны, равной 400 нм; проводят спектрофотометрирование всех иссле- 55 дуемых растворов с записью спектров поглощения в области 575-595 нм.

Далее в исследуемые растворы добав74 1 2 ляют 0,57.-ный раствор гексациано-(Ш f» феррат калия, обеспечивая полный перевод оксигемоглобина исследуемых растворов в метгемоглобин. Вновь проводят запись спектров поглощения полученных растворов в области 575595 нм. Затем осуществляют определение значений оптической плотности прн длине волны 575-580 нм для вытяжек из кровяных пятен до и после гексацнано-(Ш ) феррата калия и нахо. дят их разность. Затем определяют значение оптической плотности растворов в изобестичеокой точке прн длине волны 585-595 нм и рассчитывают отношение разности максимумов оптических плотностей при 575-580 нм (до и после добавления гексациано-(Ш} феррата калия) к значению оптической плотности в изобестической точке при 585-595:нм. Полученное при этом значение 5=4 0 Vs /05з ЯвлЯетсЯ основным критерием, динамика которого свидетельствует о состоянии,дериватов гемоглобина крови (переход оксигемоглобина в метгемоглобин), обусловленных процессом старения крови

)п vitro, в частности кровяных пятен, Пример. Для исследования представлены два пятна крови на одинаковом предметоносителе, хранивших ся неизвестное время в одинаковых условиях воздействия окружающей среды. Необходимо подтвердить или же опровергнуть возможность одновременного образования этих кровяных пятен. Для этого нарезают по несколько (например по 5 шт.) кусочков (размером до 0,5 х 0,5 см) образцов (проб) от обоих кровяных пятен и осуществляют вытяжку (в течение 30-

40 мин) из всех образцов обоих кровяных пятен в фосфатном буфере Зеренсена рН 7,8 приготовленного из.1/l5 N растворов солей йа НРО 2Н О и КН РО», смешиваемых в определенных пропорциях согласно существующей методике.

Готовят небольшое (2-3 мл), количество 0,5Е-ного раствора гексациано-(Ш) феррата калия путем растворения

К (Ге(СЙ) 3 в фосфатном буфере Зеренсена. Осуществляют центрифугированне полученных вытяжек из пятен крови в.течение 10 мин при 5000 об/мин.

Используя фосфатный буфер Зеренсена . обеспечивают одинаковую концентрацию дериватов Нв, во всех растворах, осуществляя при этом контроль по значению оптической плотности этих раствор cia

В приведенном примере получают

0 314 — 0 242 0,072 (0,005) + (0,0)2) 0,013

Составитель И.Емельяненко

Редактор С. Патрушева Техред Л, Коцюбняк Корректор O. Тигор

Заказ 10681/35 Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного кбмитета СССР по делам изобретений и открытий

113035,Москва,Ж-35,Раушская наб.,д.4/5

Филиал ПЛЛ "Патент, F ° Ужгород,ул.Проектная,4

3 1138 ров, которая может быть равной 1,75 при 3 400 нм. Далее проводят спектрофотометрирование всех десяти йроб, При этом согласно существукицей методике осуществляют запись (например, на СФ вЂ” 10 2 спектра поглощения в области 575-595 нм первого раствора дериватов Нв, используя при этом плоскопараллельные кюветы с толщиной рабочего слоя раствора, равной 10 мм. !о

В пробирку наливают 5 .мл исследуемого раствора и добавляют О,1 мл 0,5Хного раоувор Кэ(Ге(СЙ) 3, что обеспечивает полный перевод (помешивать

20-30 с 3 оксигемоглобина исследуе" !

5 мой пробы в метгемоглобин. Выливают полученный раствор в кювету толщиной

10 мм и производят (согласно методике спектрофотометрического исследования ) запись спектра поглощения полученного раствора на том же, что и в первом случае, бланке. Извлекают

° из спектрофотометра бланк с двумя спектрами поглощения. Проводят последовательно спектрофотометрирование (аналогично описанному) всех оставшихся девяти проб. Далее проводят обработку полученных графических данных.

Допустим, что при длине волн, 3Q

1 авной 578 нм,оптическая плотность первой пробы раствора дериватов Нв первого пятна крови оказалась равной 0,800 (D = 0,800 2, а после добавления в этот раствор гексациано-(Ш 2 феррата калия получили р = 0,625.

Следовательно, разность максимальных. значений оптических плотностей прид

=578 нм будет равной 0,175 -(аО=

= О - 0 ), т. е.:Э 0 =О, 175. Пусть значенйе оптической плотности дерива40

741 4 тов Нв в изобестической точке (h =

=592 нм 21 оказалось равным 0,550, т. е, 0 =0,550. Тогда значение S=d D >/0 для первой пробы первого пятна S будет равно 0,318, т.е, S„ =0,175/

0,550=0,318. Если для, последующих: проб первого пятна будут получены значение Q =0,320, S=0,310, 5=, 0,315 и Sp 0,307, то получают значение

S= 0,314+0,005. Далее, исследуя и обрабатывая статистические данные, полученные по материалам второго кровяного пятна, допустим, получено .

S"=0,242 +0,012. После этого вычисля-. ют критерий значимости t Стьдента по формуле

Значение t=5,54 (при n=52 свидетельствует о том, что процесс превращения дериватов гемоглобина крови в. пятнах достоверно (р 0,001) различим. Следовательно, учитывая идентич" ность условий хранения и физико-механических свойств предметоносителей, это достоверное различие должно быть связано с различием во. времени хра- . нения,т.е. исследованные пятна крови образованы в различное время.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить точность определения состояния дериватов гемоглобина крови и дает возможность более достоверно исследовать процесс старения крови, например при решении практических задач судебной медицины.