Способ моделирования резистентности к гипогликемическому действию инсулина

 

СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКОМУ ДЕЙСТВИЮ ИНСУЖНА путем введения биологически активного вещества, отличающийся тем, что, с целью ускорения срока моделирования, без нарушения общего метаболизма и развития, патологического состояния, внутривенно вводят протамин-сульфат в дозе 0,9-1,0 мг на 200 г массьц затем через 5-30 мин внутривенно вводят инсулин в дозе 0,2-2,4 мг на 200 г/массы.

„,Я0„„1138824 A

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

В

РЕСПУБЛИК

4 (51) G 09 В 23/28

ОЛИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И 01 КРЫТИЙ (21) 3532214/28-13 (22) 31. 1 2. 82 (46) 07.02.85. Бюл. В 5 (72) Б.А. Кудряшов, А.М. Ульянов, Ф.Б. Шапиро и Ю.А.. Пытель (71) МГУ им. М.В. Ломоносова (53) 615. 4 75 (088. 8) 1 (56) 1 ° Soll А.Н., Kahn С.R.R., Neville D.Ì. and Rath I. Insulin

Receptor Deficiency in Genetic and

Acquired Obesity. I. Clin. Invest, 1975, 56. 769-780. (54) (57) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКОИУ

ДЕЙСТВИЮ ИНСУЛИНА путем введения биологически активного вещества, отличающийся тем, что, с целью ускорения срока моделирования, без нарушения общего метаболизма и развития. патологического состояния, внутривенно вводят протамин-сульфат в дозе 0,9-1,0 мг на 200 г массы, затем через 5-30 мин внутривенно вводят инсулин в дозе 0,2-2,4 мг на

200 r. ìàññû.

1138824

Изобретение относится к медицине, а именно к способам моделирования.

Известен способ моделирования ре" зистентности к гипогликемическому действию инсулина, в котором у мышей 5 линии 057BL вызывают гипоталамическое ожирение с помощью препарата тиоглюкозного золота, вводимого однократно внутрибрюшинно мышам в возрасте 4-6 недель в дозе 0,4-0,5 мг 10 на 1 г массы. При этом тиоглюкозное золото избирательно повреждает вентро медиальный гипоталамус, вызывая гиперфагию и через 10-30 недель ожирение 1 J. 15

К недостаткам известного способа относятся высокая токсичность тиоглюкозного золота (1/3 обработанных животных погибает), длительность времени, необходимого для получения 20 модели (10-30 недели), а также нарушение обмена веществ у животных.

Цель способа — ускорения срока моделирования без нарушения общего метаболизма и развития патологичес- 25 кого состояния °

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу моделирования резистентности к гипогликемическому действию инсулина путем вве- 30 дения биологически активного вещества внутривенно вводят протамин-сульфат в дозе 0,9-1,0 мг на 200 r массы, затем через 5-30 мин внутривенно вводят инсулин в дозе 0,2-2,4 мг на

200 г массы.

Способ осуществляется следующим образом.

У контрольных самцов крыс внутривенное введение инсулина в дозе

0,2 мг на 200 г массы через разные промежутки времени после введения

0,85Х-ного раствора NaC1 вызывает к 30-й минуте снижение концентрации глюкозы в крови до 56,4-67,0Х от

45 исходного уровня. У животных же, которым до инсулина эа 5-30 мин введен внутривенно протамин-сульфат в дозе 0,9-1,0 мг на 200 г массы, гипогликемическое действие инсулина не проявляется, и концентрация глю50 козы в крови к 30-й минуте достоверно не отличается от исходной. При введении его за 5 мин до инсулина ингибирующий гипогликемическое действие инсулина эффект протамин-сульфата про является полностью, при введении за

30 мин он несколько слабее. Введение протамин-сульфата sa 35-60 ю н до инсулина на его гипогликемическое действие влияния не оказывает. Ингибирующий эффект протамин-сульфата отсутствует также при введении его за 1-2,5 мин до инсулина или после него.

Предлагаемый способ является ускоренным — занимает 35-40 мин (длительность известного 10-30 недель).

Используемый в предлагаемом способе препарат (протамин-сульфат) не токсичен, дает эффект в 100Х случаев. Протамин-сульфат — препарат белкового происхождения, получаемый из спермы различных видов рыб, оказывает специфическое противогеморрагическое действие, широко применяется при операциях, связанных с экстракорпоральным кровообращением. На фоне протамин-сульфата не оказывают гипогликомического действия и значительно более высокие дозы инсулина 0,4-2,4 мг на 200 r массы.

Использованный препарат протаминсульфата, также как и 0,85Х-ный раствор NaC1, не обладает собственным гипогликемическим действием.

Протамин-сульфат блокирует действие и эндогенного инсулина. Так, у крыс, получивших протамин-сульфат, после сахарной нагрузки (1 мг 1Х-ного раствора глюкозы внутривенно на

200 r массы концентрация глюкозы в крови возрастает в большей степени, чем у контрольных животных, и сохраняется высокой в течение более длительного времени (до 4 ч).

Введение протамин-сульфата в более низких дозах (0,6-0,8 мг на

200 г массы) не оказывает ингибирующего действия на гипогликемическую активность инсулина, в больших дозах (1,1-1,5 мг на 200 г массы — тот же эффект, что и введение 0,9-1,0 мг на 200 г массы) .

Пример 1. У двух самцов крыс массой 182 г (Ф 1) и 184 r (У 2) берут из яремной вены кровь для определения концентрации глюкозы.

У крысы Ф 1 исходная концентрация глюкозы, определяемая по методу Канторовича, составляет 85 мге Х, у крысы У 2 — 80 мг, X. Сразу после взятия крови крысе N- 1 внутривенно вводят 0,9 мг протамин-сульфата фир-. мы Р1иЕа А.I. (Швейцария) в объеме

0,9 мл 0,85Х-ного раствора NaC1 (что соответствует 1 мг протамин-сульфата на 200 г массы). Крысе В 2!

15 дозе, а контрольной группе—

35.

Составитель В. Фролова

Техред С. Иовжий Корректор И ° Эрдейи

Редактор А. Козориз

Заказ 10694/39 Тираж 452 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 т

Ужгород, ул. Проектная, 4

Филиал ППП "Патент", г. з 11 для контроля вводят равный объем

0,85Х-ного раствора NaC1 Через

30 мин обеим крысам внутривенно вводят инсулин в дозе 0,18 мг. Определение концентрации глюкозы через

30 мин после введения инсулина показывает, что у крысы У 2 она снижает- ся до 45 мг Х, в то время как у крысы N - 1 не меняется (85 MrX).

Пример 2. Опыт проведен ана.логично примеру 1, но протамин †сульфат в меньшей дозе (0,95 мг на

200 г массы вводят за 15 мин до инсулина) °

У самца крысы Р 3 массой 178 r исходная концентрация глюкозы в крови 95 мг Х, у самца В 4 массой

180 г — 100 мг X. Самцу У 3 вводят внутривенно 0,85 иг протамин-сульфата в 0,9 мп 0,85Х-ного раствора

NaC1, самцу В 4 .для контроля—

0,9 мл 0,85Х-ного раствора NaC1.

Через 15 мин обоим самцам вводят

0,18 мг инсулина. Спустя 30 мин пос-. ле введения инсулина концентрация глюкозы в крови у самца к- 3 сохраняется на прежнем уровне (90 мг.Х), у самца к 4 — понижается до 60 мг Х).

Пример 3. Опыт проведен аналогично примеру 1, но протаминсульфат введен в меньшей дозе за

5 мин до инсулина. У самца N- 5 массой 180 г исходная концентрация глюкозы в крови 96 мг Х, у самца Ф 6 массой 182 r — 100 мг X. Самцу В 5 вводят внутривенно 0,81 мг протаминсульфата (что соответствует 0,9 мг на 200 r массы) в 0,9 мп 0,85Х-ного раствора NaCl, самцу Р 6 для контроля — 0,9 мг 0,85Х-ного раствора

NaC1. Затем через 30 мин обоим самцам вводят 0,18 мг инсулина. Спустя

30 мин после введения инсулина концентрация глюкозы в крови у самца

В 5 сохраняется на прежнем уровне .(96 мг.Х), у самца У 6 понижается до 60 мг Х.

Пример 4. Берут две группы самцов крыс со средней массой 180 r

38824 4 по 12 штук в каждой. Первой группе внутривенно вводят одновременно

0,9 мп 1Х-ного раствора глюкозы и

0,85 мг протамин-сульфата (что соот5 ветствует 0,95 мг на 200 г массы) в

0,9 мп 0,85Х-ного раствора NaC1, второй группе (контроль) — одновременно 0,9 мп 1Х-ного раствора глюкозы и 0,9 мп 0,85X — íîãî раствора

NaCl.

Учитывая, что резистентность к инсулину, вызванная протамин-сульфа- том, сохраняется в течение 30 мин, опытной группе животных через 20 мин после первого введения протамин-сульфата вводят его второй раз в той же

0,85Х-ный раствор NaC1. Кровь для определения глюкозы берем через

30 мин — 24 ч после введения глюкозы.

Исходная концентрация глюкозы в крови в опытной группе составляет

102 мг: Х, в контрольной 97 мг.X.

Если принять исходную концентрацию глюкозы эа 100Х, то у первой группы она через 30 мин составит 220,3+9,3; через 60 мин 187,6+15,9; через 2 ч

176,4+12,9; через 4 ч 167,4+8,5; через 24 ч 100Х. У второй группы (контроль) соответственно 191,5+11,5;

120,0+11,7; 114,9+12,9; 111,5+ 3,1;

1ООХ.

Предлагаемый способ моделирования реэистентности к гипогликомическому действию инсулина можно испольэовать при экспериментальном изучении клинических проявлений резистентйости разного генеэа, таких как ожирение, акромегалия, синдром Кушинга, для которых характерно наличие нормальной или повышенной концентрации глюкозы в крови при повышенном содержании инсулина.

Предлагаемый способ отличается простотой (однократное введение про-! тамии-сульфата) и высокой (в отличие от известного способа) воспроизводимостью (в 100Х случаев при воспроизводимости в ЗОХ в известном способе).