Способ получения сапогенинов
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ САПОГЕНИНОВ путем измельчения корневищ диоскореи дельтовидной, обработки водными растворами ферментных препаратов, инактивации ферментных препаратов, кислотного гидролиза, нейтрализации, высушивания гидролизатов с последующим экстрагированием петролейным эфиром и отгонкой растворителя , отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и чистоты целевого продукта , сырье обрабатывают раствором ферментного препарата пентоаваморина П10Х из Aspergillus awamori или раствором ферментного препарата, полученного спиртоосаждением из культуральной жидкости высшего базидиального гриба Coriolus hirзцШз , при концентрации ферментных препаратов 0,9-1,1 мае. % в течение 3-24 ч при соотношении твердой и жидкой фаз 1:10.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
PECnYEiflHH
4(5D А 61 К 35 78
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3530990/13 (22) 28.12.82 (46) 23.05.85. Бюл. № 19 (72) К. М. Сытник, Н. И. Даниляк, Л. Г. Дудченко, В. С. Фонин и И. А. Трутнева (71) Институт ботаники им. Н. Г. Холодного и Всесоюзный научно-исследовательский институт лекарственных растений (53) 615.32(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 520986, кл. А 61 К 35/78, 1976. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ САПОГЕНИНОВ путем измельчения корневищ диоскореи дел ьтовидной, обработки водными
„SU„1156695 A растворами ферментных препаратов, инактивации ферментных препаратов, кислотного гидрол иза, нейтрал изации, высушива ния гидролизатов с последующим экстрагированием петролейным эфиром и отгонкой растворителя, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и чистоты целевого продукта, сырье обрабатывают раствором ферментного препарата пентоаваморина П IOX из Aspergil lus awamori или раствором ферментного препарата, полученного спиртоосаждением из культурал ьной жидкости высшего базидиального гриба Coriolus hirsutus, при концентрации ферментных препаратов 0,9 — 1,1 мас. % в течение 3 — 24 ч при соотношении твердой и жидкой фаз 1:10.
1156695 выход диосгенина, Наличие дианов
Способ обработки
140, 2
151,0
Asp. Aqamori
С. пггзоснз
Контроль:
Без ферментативной обработки (по предлагаемому способу
100,0
136,5
Ilo известному способу
Н р и м е ч а н и е: + 0,3-0,57, ++ До 17., +++ Более 27, 0 отсутствие.
Составитель Н. Гуляева
Техред И. Верес Корректор Е. Рошко
Тираж 722 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Редактор Л. Зайцева
Заказ 3218/5
Изобретение относится к медицинской промышленности и может быть использовано для получения лекарственных веществ из растительного сырья.
Целью изобретения является повышение выхода и чистоты целевого продукта.
Пример 1. Сырье — измельченные корне ви ща диос коре и дельтовид ной (на веска
1 г, диаметр частиц 2 мм) заливали 10 мл ферментного препарата пектоаваморина
П10Х из Aspergillus awamori. Дозировка препарата 1 мас. Я на абсолютно сухое вещество, рН раствора около 5,0. Инкубацию проводили 13,5 ч, при 40 С в термостате.
Инактивацию ферментов и последующий кислотный гидролиз проводили с обратным холодильником при добавлении к раствору
2 мл концентрированной соляной кислоты в течение 2-х ч при 115 С на глицериновой бане. Гидрол изаты корневищ отфильтровывали через бумажный фильтр, осадок на фильтре, содержащий сапогенины (диосгенин), 20 промывали водой (25 мл), 5Я-ным раствором аммиака (20 мл), снова водой (10 мл) и сушили при 60 С в течение 10 — 12 ч.
Диосгенин извлекали из осадка петролейным эфиром (фракция 40 — 70 С) в аппарате
Сокслета в течение 24 ч. Экстракты сгущали досуха, остаток диосгенина количественно растворяли спиртом в определенном объеме.
Содержание диосгенина определяли на фотоэлектроколориметре при 530 нм.
Выходсапогенинов (диосгенина) с применением пектоаваморина П10х составлял
4,35 мас. Оо на абсолютно сухое вещество при ферментации в течение 13,5 ч. При тонкослойной хроматографии целевого продукта в опытном варианте не выявлено побочных продуктов в сравнении с известным способом и вариантом без ферментативной обработки сырья.
Пример 2. То же, что в примере 1, но инкубацию сырья проводили ферментным препаратом, полученным из гриба Coriolus
hirsutus, выращенного глубинным способом в течение 120 ч. Ферменты осаждали спиртом из культурального фильтрата с последующей лиофилизацией. Дозировка препарата
1 мас. Я на абсолютно сухое вещество, рН раствора около 5,0. Инкубацию проводили
13,5 ч при 40 С в термостате. Инактивацию ферментов и последующий кислотный гидролиз проводили с обратным холодильником при добавлении к раствору 2 мл концентрированной соляной кислоты, в течение 2-х ч при 115 С на глицериновой бане. Гидролизаты корневищ отфильтровывали через бумажный фильтр, осадок на фильтре, содержащий аногенины (диосгенин), промывали водой (25 мл), 5Я-ным водным раствором аммиака (20 мл), снова водой (10 мл) и сушили при 60 С в течение 10 — 12 ч. Диосгенин извлекали из осадка петролейным эфиром (фракция 40 — 70 С) в аппарате Сокслета в течение 24 ч.
Экстракты сгущали досуха, остаток диосгенина количественно растворяли спиртом в определенном объеме. Содержание диосгенина определяли на фотоэлектроколориметре при 530 нм.
Выход сапогенинов (диосгенина) с применением ферментного препарата из Coriolus
hirsutus составлял 4,72 мас.оА, на абсолютно сухое вещество при ферментации 13,5 ч.
При тонкослойной хроматографии целевого продукта в опытном варианте не выявлено побочных продуктов в сравнении с известным способом и вариантом без ферментативной обработки сырья.
Влияние ферментативной обработки корневищ диоскореи на выход диосгенина приведено в таблице.
Как видно из да нных, представленных в таблице, предлагаемый способ позволяет повысить выход и чистоту . целевого продукта.
